骨桥蛋白在子宫腺肌病中的表达及意义

崔艳萍*，薛洁好，刘群英，刘艳红，胡庆兰

（广东省清远市妇幼保健院，广东 清远 511500）

骨桥蛋白在子宫腺肌病中的表达及意义

崔艳萍*，薛洁好，刘群英，刘艳红，胡庆兰

（广东省清远市妇幼保健院，广东 清远 511500）

目的 应用免疫组织化学S-P法检测骨桥蛋白（OPN）在子宫腺肌病的腺上皮细胞胞浆中的表达，探讨OPN在子宫腺肌病中的表达意义。方法 收集来我院手术治疗的子宫腺肌病患者40例作为观察组，纳入同时期来我院进行手术的子宫肌瘤患者40例作为对照组。比较两组患者间组织中OPN表达水平差异。结果 OPN在腺肌病在位内膜分泌期中的高表达，较在位内膜增生期，差异有统计学意义（P＜0.05）。OPN在腺肌病在位内膜增生期与分泌期的表达均分别高于在正常内膜增生期与分泌期的表达，两组比较，差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 子宫腺肌病病灶及在位内膜中OPN的表达上调，OPN可能参与了子宫腺肌病的发生与发展过程。

子宫腺肌病；子宫腺肌病腺上皮细胞；子宫内膜上皮细胞；骨桥蛋白（OPN）

子宫腺肌病（adenomyosis）是指子宫内膜细胞向肌层良性浸润并在其中弥漫性生长的一种雌激素依赖性具有恶性生物学行为的良性疾病。其特征是在子宫肌层内出现异位的子宫内膜细胞与腺体并伴有周围肌层细胞的肥大和增生，常引起患者出现经量增多以及进行性加重的痛经等临床表现。有关子宫腺肌病的真正发病原因及机制仍不十分清楚。多数学者认为可能与屏障瓦解基底内膜内陷、相关组织细胞因子的参与及免疫机制异常等因素有关。

子宫缺乏黏膜下层和基底膜可能是疾病发生的基础，异位内膜的黏附、侵袭、血管生成以及其细胞的无限增殖与恶性肿瘤的生物学行为相似。骨桥蛋白（OPN）是一种分泌型磷酸化糖蛋白，OPN与多种整合素受体结合后促进细胞增殖、黏附、侵袭和转移。关于OPN和子宫腺肌病关系的研究也越来越多，本研究通过检测OPN在子宫腺肌病的腺上皮细胞胞浆中的表达，探讨OPN在子宫腺肌病中的表达意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2014年1月～2016年4月在我院因子宫腺肌病住院拟手术治疗的患者40例作为研究组，年龄38～51岁，平均年龄（46.20±4.75）岁，并选取子宫肌瘤患者40例作为对照组，年龄39～52岁，平均年龄（45.64±5.17）岁。所有患者无糖尿病、高血压、肾病等慢性病史，均未接受免疫药物及甾体类激素等治疗，两组年龄之间比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。患者均经腹腔镜及病理学诊断确诊。

1.2 方法

1.2.1 研究标本分组及收集

研究组级对照组均40例。研究组包括子宫腺肌病病灶与在位内膜各40例，其中在位内膜标本增生期内膜22例和分泌期内膜18例；对照组包括正常子宫肌层与正常子宫内膜各40例，其中在位内膜标本增生期内膜21例和分泌期内膜19例。所有标本子宫切除后“Y”字型切开子宫前壁或后壁子宫肌层至子宫腔。研究组标本：切取腺肌病病灶（大小1×1×1 cm3）及在位内膜（大小1×1×0.5 cm3）；对照组标本：距离肌瘤边缘2 cm以外切取正常子宫肌层（大小1×1× 1 cm3）及子宫内膜（大小1×1×0.5 cm3）。见图1。

图1 研究标本分组图

1.2.2 石蜡切片制作及实验方法

将制成的石蜡块每个标本连续切片3张，每张切片厚度为4 μm。其中1张采用苏木素伊红（HE）染色，确定病理诊断，子宫内膜组织切片，进行增生期或分泌期分期诊断；另1张切片应用免疫组织化学方法（S-P法）进行OPN的检测。

1.2.3 实验试剂

兔抗人OPN单克隆抗体（抗体效价1:100），购自福州迈新公司产品（产品编号：sd-148），DAB显色液试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 判定标准

OPN的阳性表达定位于内膜细胞的细胞浆中，为棕黄色颗粒。应用Leica QW550系统来进行图像分析，免疫组化结果均采用阳性单位（positive unit，PU）来进行定量表达反应免疫组化阳性程度。在Leica Q550IW图像分析系统测试待测结构的平均灰度值Gα和背景的平均灰度值Gβ，Gmax=256，为检测仪器最大灰度值。计算公式：PU=（Gα-Gβ/Gmax）×100。

1.4 统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件对数据进行处理。OPN阳性表达PU值用“±s”表示，采用t及F检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 OPN在子宫腺肌病病灶与正常子宫肌层中的表达

OPN在子宫腺肌病病灶中的高表达PU=（26.45±8.05），明显高于正常子宫肌层中的低表达PU=（12.68±5.69），两组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 OPN及VEGF在子宫腺肌病病灶与正常子宫肌层中的表达（±s）

表1 OPN及VEGF在子宫腺肌病病灶与正常子宫肌层中的表达（±s）

组别nOPN（PU）子宫腺肌病病灶4026.45±8.05正常子宫肌层4012.68±5.69 P＜0.05

2.2 OPN在腺肌病病灶与在位内膜增生期、分泌期中的表达

OPN在腺肌病在位分泌期表达PU=（25.42±6.35）明显高于在位内膜增生期PU=（19.97±8.67），两者比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；腺肌病病灶中OPN的阳性表达与在位内膜增生期OPN阳性表达的PU值比较，差异有统计学意义（P＜0.05），而与在位内膜分泌期的PU比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 OPN在腺肌病病灶及在位内膜增生期、分泌期的表达（±s）

表2 OPN在腺肌病病灶及在位内膜增生期、分泌期的表达（±s）

注：*与**、腺肌病病灶比较，P＜0.05；**与腺肌病病灶比较，P＞0.05

组别nOPN（PU）腺肌病病灶4026.45±8.05在位内膜增生期2219.97±8.67*在位内膜分泌期1825.42±6.35**

2.3 OPN在正常子宫肌层与正常子宫内膜增生期、分泌期中的表达

OPN在正常子宫肌层、正常子宫内膜增生期及分泌期中均有表达，其表达强度依次递增，PU值分别为（12.68±5.69）、（12.81±6.78）和（13.32±3.45），三组比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表3。

表3 OPN在正常子宫肌层及正常子宫内膜增生期、分泌期的表达（±s）

表3 OPN在正常子宫肌层及正常子宫内膜增生期、分泌期的表达（±s）

组别nOPN（PU）正常子宫肌层4012.68±5.69正常子宫内膜增生期2112.81±6.78正常子宫内膜分泌期1913.32±3.45 P＞0.05

2.4 OPN在正常内膜与在位内膜增生期、分泌期的表达

OPN在正常内膜增生期中阳性表达的PU值低于腺肌病在位内膜增生期的表达，差异有统计学意义（P＜0.05）；而正常内膜分泌期中OPN阳性表达的PU值也低于腺肌病在位内膜分泌期中的表达，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 OPN在正常内膜与腺肌病在位内膜增生期、分泌期的表达（±s）

表4 OPN在正常内膜与腺肌病在位内膜增生期、分泌期的表达（±s）

组别nOPN（PU）P正常内膜增生期2112.81±6.78分泌期1913.32±3.45在位内膜增生期2219.97±8.67＜0.05分泌期1825.42±6.35＜0.05

3 讨 论

子宫腺肌病是一种雌激素依赖性但表现出具有“浸润、转移、复发”与恶性肿瘤类似的生物学特征的“良性疾病”。目前发病率呈现明显上升趋势，严重影响女性身心健康。然而，子宫腺肌病的发病机制尚不清楚，多数研究者认为子宫腺肌病是基底层内膜细胞不断增生，由于子宫内膜黏膜缺乏黏膜下层的屏障，内膜细胞浸润转移到子宫肌层间质种植生长的结果。

OPN目前已经被认为是一种新的肿瘤标记物，OPN可通过组织细胞粘附与细胞表面多种整合素受体（αvβ3、αvβ5、CD4等）结合，介导参与细胞的粘附、游走、迁移与增殖。有研究显示，OPN在乳腺、肠道、子宫及卵巢等肿瘤组织中均呈现高表达，肿瘤在OPN过度表达情况下更容易出现侵袭与转移。由于OPN能够促进肿瘤发生、抑制细胞凋亡、促进肿瘤浸润转移和逃逸肿瘤免疫，所以OPN可能与子宫腺肌病的发生也有密切的关系，它可能参与异位内膜细胞黏附、浸润、血管生成以及细胞增殖等。

本研究结果显示，OPN在子宫腺肌病病灶的表达明显高于正常子宫肌层中的表达，两者比较，差异有统计学意义（P＜0.05），OPN过度表达促进MMP-1、uPA等细胞因子表达上调，导致细胞外基质降解，子宫内膜与肌层间屏障消失，子宫内膜细胞容易进入子宫肌层而导致子宫腺肌病的发生。本研究结果还显示，子宫腺肌病在位内膜的增生期与分泌期中OPN阳性表达均高于正常内膜的增生期和分泌期，两组比较差异有统计学意义，在位内膜中OPN的强阳性表达通过上调ICAM-1、MMP-1、MMP-2及VEGF等细胞因子，使在位内膜细胞更具有粘附、侵袭及种植的能力。而正常子宫内膜中由于OPN表达量低不足以介导上述与子宫腺肌病发生相关的细胞因子的表达，从而不导致子宫腺肌病的发生。本研究结果同时显示，OPN在在位内膜分泌期的表达明显高于在位内膜增生期，PU值分别为（25.42±6.35）和（19.97±8.67），两组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），此结果提示，分泌期中OPN的强阳性表达激活MMP、ICAM-1及VEGF等相关细胞因子促进分泌期中的子宫内膜细胞较增生期的子宫内膜细胞更容易进入子宫肌层而导致子宫腺肌病的发生，此结果与Wo1ff等的报道相似，由于在孕激素的作用下，分泌期子宫内膜细胞的生物学特性发生改变，其侵袭性与迁移性增强，使得分泌期的内膜细胞更容易进入子宫肌层而导致子宫腺肌病发生。

综上所述，OPN在子宫腺肌病病灶及在位内膜中的表达均上调，表明OPN参与了子宫腺肌病的发生与发展过程，OPN表达与子宫腺肌病的发生发展具有相关性。

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本文编辑：刘欣悦

R711.71

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