4种配合饲料对克氏原螯虾幼虾生长及免疫性能的影响

朱凛，万金娟，沈美芳，赵沐子，孙建国，朱锡和，王崇华

（1.江苏省淡水水产研究所，江苏南京 210017；2.南京帅丰饲料有限公司，江苏南京 211313）

4种配合饲料对克氏原螯虾幼虾生长及免疫性能的影响

朱凛1，万金娟1，沈美芳1，赵沐子1，孙建国2，朱锡和1，王崇华1

（1.江苏省淡水水产研究所，江苏南京 210017；2.南京帅丰饲料有限公司，江苏南京 211313）

以均初始体质量为（3.02±0.01）g的克氏原螯虾幼虾为研究对象，进行为期58 d的养殖试验，同时比较研究不同配合饲料（D1、D2、D3、D4）对虾的摄食、生长以及非特异性免疫力的影响。养殖试验结束后进行白斑综合征病毒（WSSV）感染试验，并于感染后0、12、24、36、48、60、72、84 h统计虾的存活率。养殖试验结果表明：与D1组相比，投喂D4、D3、D2饲料组均能显著提高克氏原螯虾的增重率、特定生长率，降低饲料系数（P<0.05）；D4、D3组溶菌酶水平显著高于D1组，D4组超氧化物歧化酶水平显著高于D2、D1组，D4组过氧化氢酶水平显著高于其他三组（P<0.05）；各组间存活率、葡萄糖、皮质醇和丙二醛水平均无统计学意义差异（P>0.05）。攻毒试验结果表明：感染WSSV 24 h后虾开始出现死亡；36 h时，各组间存活率无显著差异（P> 0.05）；48 h、60 h、72 h时，D4、D3、D2组存活率显著高于D1组（P<0.05）；84 h时，D4组存活率显著高于其他三组（P<0.05），D1、D2、D3组之间存活率差异不显著（P>0.05）。综上所述，D4组饲料使用效果最佳。

克氏原螯虾；不同配合饲料；生长；免疫

克氏原螯虾（Procambarus clarkia）俗称“小龙虾”，隶属甲壳纲（Cmstacea），十足目（Decapoda），螯虾科（Cambaridae），原螯虾属（Procambarus），是当今世界上最主要的淡水螯虾养殖种类，其产量占整个螯虾产量的70%～80%，也是我国目前重要的经济水产养殖对象。随着养殖规模的不断扩大，克氏原螯虾——尤其是幼虾时期人工配合饲料的开发也越来越受到人们的关注。但在目前关于克氏原螯虾幼虾饲料营养方面尚缺系统的研究。试验采用四种不同饲料，研究其对克氏原螯虾幼虾生长性能和免疫性能方面的影响，旨在为高效、绿色的克氏原螯虾配合饲料提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验饲料

试验设计4组饲料，以某品牌商用虾料为基础饲料（D1），在基础饲料（D1）中分别添加1%的大蒜素、1%大蒜素+0.02%芽孢杆菌和4%乌贼膏制成3种试验饲料（D2、D3、D4），试验基础饲料配方见表1。试验使用的大蒜素、芽孢杆菌、乌贼膏分别来自洛阳纳钰商贸有限公司、浙江省淡水水产研究所鱼药厂和南京帅丰饲料有限公司。饲料原料分别粉碎后过60目筛网，然后进行超微粉碎（粒度98%能过80目），混合均匀后用膨化机制成直径为1.0 mm的沉性颗粒饲料，在50℃烘干24 h，冷却后放入密封袋中于4℃冰柜中保存待用。

1.2 试验设计

养殖试验在江苏省淡水水产研究所禄口基地进行，试验对象为初均体质量为（3.01±0.02）g的克氏原螯虾。试验开始后对克氏原螯虾进行1周驯养，驯化期间所有虾均投喂基础饲料（D1）。随后随机选取1组继续投喂D1，另外3组分别投喂D2、D3、D4，每个试验处理设3个重复，每个重复50尾虾，每天投喂3次（07：00、12：00、19：00）。采用饱食量法投饵，即为虾体质量的3%～4%。并根据摄食和生长情况作适当调整，以每次投饲后无残饵为宜。试验在水泥池（2.50 m×2.5 m×0.8 m）中进行，试验期间气泵连续充氧，DO>6.85 mg/L，水温28～32℃，pH值为6.7～7.5，氨氮<0.049 mg/L，硫化氢<0.015 mg/L。正式养殖58 d后，虾称重、采样等。

1.3 攻毒试验

在饲养试验及采样结束后，每个水泥池选取体质量基本一致、健康状况良好的10尾克氏原螯虾进行攻毒试验。病毒采用实验室的白斑综合征病毒（White spot syndrome virus，WSSV），按每100 g虾腹节注射毒液1.0 mL后，放养于规格为160 L的蓄养槽内，并保证充足的氧气，观察虾死亡情况，并分别每隔12 h统计存活率。

1.4 样品采集与分析测定方法

60 d养殖试验结束后，对试验虾饥饿养殖24 h，统计尾数并称重。随后每个水泥池随机抽取9尾虾，用一次性无菌注射器从虾的头胸甲后部刺入心脏，抽取血液，并置于2 mL Eppendorf管中于4℃、5 000 r/min离心10 min，取血清，-80℃冻存备用，用于血清各项生化指标测定。

分别计算各组的增重率、特定生长率、饲料系数、存活率。血清各项生化指标（葡萄糖、皮质醇、溶菌酶、超氧化物歧化酶、丙二醛、过氧化氢酶采用相关试剂盒进行测定，试剂盒均购自南京建成生物研究所。相关计算公式如下：

式中：W0和Wt分别为试验初始和终末时虾的均体质量（鲜质量g）；t为试验天数（d）；F为每尾虾平均摄食饲料质量（风干基础）（g）；N0和Nt分别为试验初始和终末时虾的尾数（尾）。

表1 实验基础饲料配方%

1.5 数据统计与分析

试验数据均以平均值±标准误表示，用SPSS19.0软件进行相关性检验、方差分析和LSD多重比较，以P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 四种配合饲料对克氏原螯虾生长性能的影响

从表2可见：投喂不同配合饲料对克氏原螯虾的增重率、特定生长率和饲料系数均有显著影响（P<0.05），对存活率无显著影响（P>0.05）。其中投喂D4、D3、D2饲料组均能显著提高克氏原螯虾的增重率、特定生长率，降低饲料系数；D4组对生长性能的影响最大，D3组次之。

2.2 四种配合饲料对克氏原螯虾非特异性免疫力的影响

由表3可以看出，各组间葡萄糖、皮质醇和丙二醛水平均无统计学意义差异（P>0.05）；D4、D3组溶菌酶水平显著高于D1组，D4组超氧化物歧化酶水平显著高于D2、D1组，D4组过氧化氢酶水平显著高于其他三组（P<0.05）；D1、D2、D3组之间超氧化物歧化酶和过氧化氢酶水平差异无统计学意义（P>0.05）。

2.3 四种配合饲料对克氏原螯虾抗白斑综合征病毒的影响

由图1可见：感染WSSV 24 h后开始出现死亡。36 h时，各组间存活率无显著差异（P>0.05）；48 h、60 h、72 h时，D4、D3、D2组存活率显著高于D1组（P<0.05），D4、D3、D2组间差异无统计学意义（P> 0.05）；84 h时，D4组存活率显著高于其他3组（P< 0.05），D1、D2、D3组之间存活率差异无统计学意义（P>0.05）。

表2 四种配合饲料对克氏原螯虾生长性能的影响

表3 四种配合饲料对克氏原螯虾非特异性免疫力的影响

图1 四种配合饲料对克氏原螯虾抗白斑综合征病毒的影响

3 讨论

大蒜素是大蒜中的主要生物活性成分，含多种烯丙基有机硫化物。研究表明，其特殊强烈的蒜香气味，对鲫鱼、罗非鱼以及中华鳖等水产动物具有很好的诱食作用，能提高其摄食量。同时，大蒜素中的三硫醚和二硫醚能透过病原菌的细胞膜进入细胞质中，将所含琉基氧化为双硫键，破坏病原菌正常的新陈代谢，从而有效的抑制和杀灭多种病原微生物。目前，国内外学者对大蒜素在水产动物饲料上的应用已有报道。聂乾忠发现在饲料中添加80 mg/kg大蒜素时可以促进草鱼的生长[1]；胡石亮等在牛蛙饲料中添加100 mg/kg大蒜素的试验组比对照组提高19.5%[2]；宋文华在对草鱼的研究中发现，饲料中添加大蒜素能显著提高草鱼幼鱼溶菌酶、超氧化物歧化酶和补体C3的活性[3]；曹丹等在暗纹东方鲀的饲料中添加100 mg/kg的大蒜素，极显著地提高暗纹东方鲀脾脏中溶菌酶的活力[4]；蔡春芳等在银鲫饲料中添加0.5%大蒜素时，表现出显著的免疫增强作用[5]。本试验中，在基础饲料中添加1%的大蒜素，能显著提高克氏原螯虾幼虾的增重率、特定生长率，降低饵料系数；在感染WSSV后，其存活率显著高于基础饲料组。与上述研究一致。

本试验中，在添加1%大蒜素饲料的基础上，再添加0.02%芽孢杆菌，能显著提高克氏原螯虾的增重率，降低饲料系数。这与国外学者在对斑节对虾、罗氏沼虾的研究结果一致[6-7]。芽孢杆菌对甲壳动物的促生长作用可能归功于芽孢杆菌在肠道内生长繁殖过程中能够产生大量挥发性脂肪酸，降低肠道pH值，从而抑制有害微生物；同时肠道pH值降低又可以促进水产动物幼体对营养物质的消化，尤其是对蛋白质的消化和吸收[8]。沈文英等[9]在研究中指出枯草芽孢杆菌表达的重组VP28通过提高对虾机体非特异性免疫力，进而提高虾体抗WSSV感染的作用。

乌贼膏因为自身具有浓烈的乌贼（鱿鱼）内脏腥香味，而同样常被用作水产动物的诱食剂，可以提高饲料的适口性和利用率；此外乌贼膏富含胆固醇类蜕壳刺激素以及二十碳五烯酸（EPA）、二十二碳六烯酸（DHA）及维生素A和维生素D，能有效促进甲壳类动物蜕壳和生长。本试验表明，在配合饲料中添加4%的乌贼膏，能显著提高克氏原螯虾的增重率和特定生长率，降低饲料系数。但是周萌等[10]研究发现在饲料中添加1%、2%乌贼膏对鱼的增重率有一定程度的提高，但与对照组之间差异无统计学意义。这可能是由于甲壳类动物与鱼类不同的生理机能造成的。此外，本试验发现乌贼膏组虾的溶菌酶、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶水平要高于其他几组，表明乌贼膏的添加可以提高虾体的非特异性免疫力和抗氧化能力，从而提高其抗WSSV感染的能力。

[1]聂乾忠.大蒜素对草鱼鱼种阶段生产性能及抗病力影响研究[D].长沙：湖南农业大学，2003.

[2]胡石亮，陈学文，谭利群，等.大蒜素在牛蛙饲料中应用效果的研究[J].饲料研究，2000（03）：32-33.

[3]宋文华，张涛，富丽静，等.大蒜素、枸杞多糖对草鱼血清非特异性免疫指标的影响[J].河北渔业，2011（06）：12-18.

[4]曹丹，周洪琪.不同添加剂对暗纹东方鲀生长和脾脏溶菌酶活力的影响[J].饲料广角，2002（11）：18-19.

[5]蔡春芳，宋学宏，潘兴法，等.几种抗病促生长剂对银鲫生长和免疫力的影响[J].水利渔业，2002，22（2）：21-23.

[6]Boonthai T，Vuthiphandchai V，Nimrat S.Probiotic bacteria effects on growth and bacterial composition of black tiger shrimp（Penaeus monodon）[J].Aquaculture Nutrition，2011（17）:634-644.

[7]Keysami M A，Saad C R，Sijam K，et al.Effect of Bacillus subtilis on growth development and survival of larvae Macrobrachium rosenbergii（de Man）[J].Aquaculture Nutrition，2007（13）:131-136.

[8]Moriarty D.The role of microorganisms in aquaculture ponds[J].Aquaculture，1997（151）：333-349.

[9]沈文英，傅玲琳，李卫芬.枯草芽孢杆菌表达的VP28对南美白对虾免疫力和抗病毒感染的影响[J].水生生物学报，2012，36（2）：375-378.

[10]周萌，朱旺明，汪福保，等.饲料中添加乌贼膏和酵母膏对生鱼生长性能和肠道健康的影响[J].饲料工业，2012（14）: 27-31.

The effects of four diets on the growth performance and immunity of red swamp crayfish Procambarus clarkia

Zhu Lin1，Wan Jinjuan1，Shen Meifang1，Zhao Muzi1，Sun Jianguo2，Zhu Xihe1，Wang Chonghua1
（1.Freshwater Fisheries Research Institute of Jiangsu province，Nanjing 210017，China；2.Nanjing ShuaiFeng feed co.，LTD，Nanjing 211313，China)

An experiment was conducted to investigate the effects of four diets on growth performance and immunity of red swamp crayfish Procambarus clarkia.600 Procambarus clarkii[average（3.01±0.02）g in initial body weight]were randomly divided into 4 groups（D1、D2、D3、D4）with 3 replicates per group and 50 crayfishper replicate in experiment.After 60-d feeding，the growth performance，immune-related enzyme activities and survival rates after white spot syndrome virus（WSSV）infection were investigated.Compared with the control，the weight gain and specific growth rates were significantly improved in D4、D3、D2 group，while the feed conversion ratio was significantly lower（P<0.05）.The level of lysozyme in D4、D3 were significantly higher than D1，the level of superoxide dismutase in D4 were significantly higher than D2 and D1，the level of peroxidase in D4 were significantly higher than other groups（P<0.05）.However，there was no significant difference in survival rate，glucose，cortisol and malondialdehyde among four groups（P>0.05）.The challenge experiment with WSSV showed that compared with D1 the survival rates in D4、D3、D2 significantly increased in 48 h、60 h、72 h after the infection，moreover，the survival rate in D4 was significantly higher than D1、D2、D3（P<0.05）.In conclusion，the optimal diet was D4 for Procambarus clarkia.

Procambarus clarkia；four diets；growth performance；immunity

10.3969/j.issn.1004-2091.2016.10.003

S963.7

A

1004-2091（2016）10-0012-05

2016-05-10）

江苏省农业科技自主创新资金项目CX（16）1017；江苏省科技支撑计划项目（农业）项目（BE2013446）

朱凛（1975-），女，研究方向：水产动物饲料与营养学.E-mail：w007945@163.com