ANS活性在乳鼠心房肌细胞KAch通道表达中的作用

田 银 杨 龙 夏桂玲 邓 娜

ANS活性在乳鼠心房肌细胞KAch通道表达中的作用

田 银 杨 龙 夏桂玲 邓 娜

目的 探讨ANS活性在乳鼠心房肌细胞KAch通道表达中的作用。方法 在2015年9月～2016年9月，选60只实验用大鼠，分为去甲肾上腺素组和对照组，去甲肾上腺素组利用去肾上腺素干预，对照组仅应用生理盐水；使用实时荧光定量RT-PCR检测二组大鼠乳鼠心房肌细胞的Kir 3．1、Kir 3．4 mRNA的转录水平。结果 ANS活性和乳鼠心房肌细胞KAch通道上Kir 3．1、Kir 3．4 mRNA表达水平之间存在着相关性。结论 ANS活性影响乳鼠心房肌细胞KAch通道上很多因子的表达水平。

ANS活性；乳鼠心房肌细胞；KAch通道 ；表达

自主神经系统（Autonomic Nervous System，ANS）在心脏分布密度极高，而心脏功能受ANS的调节［1］。目前ANS在心脏功能调节中的作用倍受关注。ANS活性变化与心脏疾病，如心力衰竭等疾病都已经证实与ANS活性有着非常重要的关系［2］。本研究主要是对ANS活性在乳鼠心房肌细胞KAch通道表达中的作用进行分析，选择2015年9月～2016年3月45只实验用大鼠乳鼠，对其进行实验研究，具体情况如下所示：

1 一般材料和方法

1.1 一般方法

将清洁级SD（Sprague-Dawley）乳鼠称重，ip10%水合氯醛（30 mg/kg）麻醉，麻醉成功后处死乳鼠分离心房肌细胞，进行细胞培养及干预。进行分组后，分别给药。对照组进行生理盐水0.1 ml/100 g的注射（22只）。去甲肾上腺素组给予去甲肾上腺素NE-氯化钙混合液0.1 ml/100 g（23只）。

1.2 方法

使用实时荧光定量RT-PCR检测二组大鼠乳鼠心房肌细胞的Kir 3.1、Kir 3.4 mRNA的转录水平。具体方法如下：

按不同组份配制PCR反应液，分别为5×PrimeSTAR® Buffer（Mg2+plus）10 μl，PCR Primer 1（10 μM）1 μl ，PCR Primer 2（10 μM）1 μl，dNTP Mixture（各2.5 mM）4 μl，RT反应液（cDNA溶液）2.0 μl PrimeSTAR® HS，DNA Polymerase（2.5 U/μl）0.5 μl，d H2O灭菌蒸馏水8.5 μl等。

然后进行Real Time PCR反应，PCR扩增程序，第一步是预变性，在95℃ 2 min，55℃ 1 min，72℃ 2 min中进行第一个循环，第二步是PCR反应，在95℃ 45 s，60℃ 30 s，70℃ 1 min中进行第二个循环，共40个。第三步取出4℃ 5 min后-20℃保存或电泳。

反应结束后确认Real Time PCR的扩增曲线和熔解曲线，制作标准曲线等。

1.3 统计学方法

采用SPSS 16.0统计软件进行统计学分析。计数资料应用χ2检验，计量资料采用t检验，检验水准α=0.05，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组乳鼠心房肌细胞钾离子通道上的因子表达

通过检测发现，去甲肾上腺素组的Kir 3.1、Kir 3.4 mRNA表达水平均低于空白组，其中Kir 3.1、Kir 3.4、Cab 2、CaB 3 mRNA与空白组相比，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组Kir 3.1、Kir 3.4 mRNA表达水平

2.2 两者相关性分析

数据发现ANS活性和乳鼠心房肌细胞KAch通道上Kir3.1、Kir3.4mRNA表达水平之间存在着相关性。见图1。

图1 ANS活性和乳鼠心房肌细胞Kach通道相关性

3 讨论

KAch是参与心房肌细胞动作电位复极末期主要钾离子通道之一，促进K+外流，对动作电位末期的复极、静息电位水平有重要影响［3-4］；针对发生心房重构的过程，刺激交感神经增加房颤诱发率，刺激迷走神经无增加；而在心房正常情况下，刺激迷走神经增加房颤诱发率，刺激交感神经无增加。经消融心外脂肪垫去神经能够抑制犬心房快速起搏诱导的心房电重构、使房颤诱发更为困难［5-8］。本研究选择选60只实验用大鼠，分为去甲肾上腺素组和对照组，去甲肾上腺素组利用去肾上腺素干预，对照组仅应用生理盐水；使用实时荧光定量RT-PCR检测二组大鼠乳鼠心房肌细胞的Kir 3.1、Kir 3.4 mRNA的转录水平。本次研究结果显示，ANS活性和乳鼠心房肌细胞KAch通道上Kir 3.1、Kir 3.4 mRNA表达水平之间存在着相关性。提示ANS活性影响乳鼠心房肌细胞KAch通道上很多因子的表达水平。以上临床和基础研究结果显示交感神经和副交感神经在房颤的发生和维持机制中的作用复杂，而自主神经效应相关基质的改变作为心房重构的主要机制之一参与房颤的发生和维持。

［1］ 苏昕，徐健． 房颤中心房钾离子通道重构机制及相关药物的研究进展［J］． 中华临床医师杂志（电子版），2014，23（1）：89-90．

［2］ 李珊珊． 浅谈血管平滑肌钾离子通道的特性及运动对其的影响［J］． 中华少年，2015（17）：166．

［3］ 苏昕，徐健． 房颤中心房钾离子通道重构机制及相关药物的研究进展［J］． 中华临床医师杂志（电子版），2014，8（1）：145-149．

［4］ 陆平兰，肖学钧． FHL2对心脏钾离子通道调控的研究进展［J］．心脏杂志，2013，25（1）：100-103．

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［6］ 李晖，李东泽，张源明，等． 新疆哈萨克族高血压患者外周血淋巴细胞Kv1．3钾离子通道蛋白与左心室肥厚相关［J］． 中华高血压杂志，2015，23（4）：354-358．

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Role of ANS Activity in the Expression of KAch Channel in Rat Atrial Myocytes

TIAN Yin YANG Long XIA Guiling DENG Na Department of Cardiology，Guizhou Provincial People's Hospital，Guiyang Guizhou 550000，China

Objective To investigate the effect of ANS activity on the expression of KAch channel in rat atrial myocytes． Methods From September 2015 to September 2016，60 experimental rats were divided into norepinephrine group and control group，norepinephrine group using norepinephrine intervention，the control group used normal saline，the transcription level detection of atrial myocytes of neonatal rats in the two groups of Kir 3．1 and Kir 3．4 mRNA using real-time fluorescence quantitative RT-PCR． Results There was a correlation between ANS activity and the expression level of Kir 3．1 and Kir 3．4 mRNA in the rat atrial myocytes of KAch． Conclusion ANS activity affects the expression levels of many factors in the KAch channel of rat atrial myocytes．

ANS activity，Neonatal rat atrial myocytes，KAch pathway，Expression

R-33

A

1674-9316（2016）19-0168-03

10．3969/j．issn．1674-9316．2016．19．113

贵州省人民医院心血管内科，贵州 贵阳 550000 通讯作者：杨龙，E-mail：yanglong1001@163．com