排氚片的利尿作用及急性毒性研究

马　萍，李志韧，雷　宁，曹　淼，张智杰，刘丽宏，周湘艳，辛艳茹（.火箭军总医院药剂科，北京 00088；.中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所，北京 00088）

·实验研究·

排氚片的利尿作用及急性毒性研究

马萍1，李志韧1，雷宁1，曹淼1，张智杰1，刘丽宏1，周湘艳2，辛艳茹1（1.火箭军总医院药剂科，北京 100088；2.中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所，北京 100088）

目的：探讨排氚片的利尿作用，并进行急性毒性实验研究，为其临床应用提供理论依据。方法：采用大鼠代谢笼法测量给药后各组大鼠的排尿量，低、中、高3个剂量组的灌胃给药量分别为4.8、9.6、19.2 g生药·kg-1，评价排氚片利尿作用；采用小鼠4 h内灌胃2次，给药后连续观察2周，观察小鼠对排氚片的最大耐受剂量。结果：大鼠给药后1 ～ 2 h和2 ～ 3 h，中、高剂量组的排尿量显著高于空白对照组，差异均有统计学意义（P ＜ 0.05）；给药后1 ～ 3 h，低、中、高3个剂量组的利尿作用强度分别相当于空白对照的130.0%、140.0%和155.7%，其差异均有统计学意义（P ＜ 0.05）；小鼠未出现严重的毒性反应和死亡。结论：排氚片对大鼠有一定的利尿作用，其有效剂量为9.6 g生药·kg-1，相当于成人拟用剂量的15倍。小鼠4 h内2次给药的最大耐受剂量（MTD）大于333.8 g生药·kg-1，相当于临床一日拟用量的521.6倍。

排氚片；利尿作用；急性毒性试验

排氚片为第二炮兵总医院多年的临床经验方，由黄芪、茯苓、桂枝、白术、泽泻、猪苓、桔梗等组成，具有补肺健脾、通阳益肾、利尿渗湿、排氚解毒的功效，用于人体感受氚辐射后的排氚治疗。目前课题组已完成了排氚片的药学研究[1-2]、药效学和毒理学研究，进行了军队特需药品的申报，并已获得总后军特药临床研究的批准（批件号2009JTL002）。排氚片是通过利尿作用而起到排氚的功效，本文详述了其利尿作用的药效学试验研究，及其临床前安全性评价的急性毒性试验研究，为排氚片的临床应用提供参考依据。

1　材料与方法

1.1药物与试剂

排氚片（本院自制，批号041222）；氢氯噻嗪（天津力生制药股份有限公司，批号040526）；氯化钠（分析纯，北京益利精细化学品有限公司，批号981023）。

1.2动物

选用ICR小鼠，雌雄各半，6周龄，体质量18 ～ 20 g；健康的SD雄性大鼠，体质量150 ～ 158 g，均由北京大学医学部实验动物科学部提供，实验动物生产许可证号：SCXK（京）2002-0001，使用许可证号：SYXK（京）2002-0002。动物室符合国家二级标准，合格证号：SYXK（京）2002-002。饲养室温度（22±2） ℃，湿度（60±5）%。由北京维通利华实验动物技术有限公司提供大小鼠饲养用的块料[京动（2000）第015号]。

1.3仪器

大鼠代谢笼、移液管、刻度离心管、灌胃针管。

2　方法

2.1对大鼠利尿作用的实验[3-6]

SD雄性大鼠预先置于代谢笼中1 d适应环境。禁食不禁水18 h，按体质量每100 g灌胃去离子水2.2 mL，灌胃前轻压大鼠下腹部，排尽余尿。在每个代谢笼中放置1只大鼠，收集2 h尿液，凡排尿量超过给水量40%者用作正式利尿试验。筛选动物60只，53只合格，合格率为88.3%。将筛选出的大鼠随机分成5组，分别为空白对照组（1%盐水）、阳性对照氢氯噻嗪组（10 mg·kg-1）以及低、中、高3个剂量排氚片组（4.8、9.6、19.2 g生药·kg-1），每组10只大鼠。试验前禁食不禁水18 h，试验开始时轻压动物下腹部，排尽余尿，空白对照组每100 g灌胃37 ℃ 1%盐水5 mL，将试验用药物溶于等量的1%盐水中灌胃。在每个代谢笼中放置2只大鼠，给药后每隔1 h收集尿液一次，连续收集6 h，并记录各时间点收集的排尿量。

2.2急性毒性实验[7-8,3]

取ICR小鼠24只，雌雄各半，给药前禁食14 h，不禁水，每只小鼠灌胃26.7 g干膏·kg-1（相当于166.9 g生药·kg-1），每10 g体质量灌胃0.4 mL，4 h后重复灌胃一次，连续观察14 d。给药后，立即观察动物的反应及死亡情况，第2天开始，每天观察一次。记录动物的外观、行为活动、精神状态、食欲饮水、大小便及颜色、皮毛、肤色、呼吸、有无分泌物、体质量变化等。

2.3统计学分析[9]

计算一定时间排尿量的平均值及其标准差，显著性测定采用t检验。

3　结果

3.1对大鼠排尿的影响

大鼠灌胃氢氯噻嗪后1 ～ 2 h和2 ～ 3 h排尿量显著多于空白对照组（P ＜ 0.001）。大鼠灌胃排氚片后1 ～ 2 h和2 ～ 3 h排尿量也明显多于空白对照组，随着给药剂量的增加大鼠排尿量有增加的趋势，其中高剂量组和中剂量组的排尿量高于空白对照组，差异均有统计学意义（P ＜ 0.05），详见表1。结果显示，给药后排尿量的增加主要集中在第1 ～ 2 小时和第2 ～ 3 小时。将给药后大鼠1 ～ 3 h的排尿量合并后列于表2，结果表明，以空白对照组的排尿量为100%，则排氚片低、中、高3个剂量组的利尿作用强度分别为130.0%、140.0%和155.7%，与空白对照组相比差异均有统计学意义（P ＜ 0.05）。

表1　给药后不同时间段大鼠的排尿量分布情况Tab 1　Distribution of the rat urine output at different times after administration

表2　给药后1 ～ 3 h内大鼠的排尿量分布情况Tab 2　Distribution of the rat urine output during 1 - 3 h after administration

3.2急性毒性实验

因为预试验和正式试验的方法一致，所以将资料合并分析。 给药后24只雌雄各半的小鼠中几乎所有的小鼠立即出现行动迟缓，眼无神，迷眼，多半小鼠出现呼吸急促，其中部分小鼠出现稀便，见表3。给药后20 ～ 30 min，24只雌雄各半的小鼠症状缓解，小鼠开始正常活动，摄食。14 d内未观察到小鼠死亡，体质量均有增加，见表4。

表3　给小鼠灌胃排氚片后的症状表现Tab 3　The symptoms in mice with the intragastric administration of Paichuan tablets

表4　给小鼠灌胃排氚片后的体质量变化Tab 4　The weight changes in mice with the intragastric administration of Paichuan tablets

4　讨论

4.1排氚片功效的中医理论基础

氚毒主要通过污染肌肤或误吸、误饮，致使氚毒由肌肤、气道、食道侵入机体，伤及脏腑，多损及肺、脾、肾三脏，故治疗氚中毒主要在于调补肺、脾、肾三脏的气化功能，通调水道，排氚解毒。课题组在中医名方五苓散的基础上完成排氚片的组方，五苓散出自《伤寒论》71条“太阳病、发汗后，大汗出……若脉浮，小便不利，微热消渴者，五苓散主之”[10]，排氚片方中黄芪，既可上补肺气、下输膀胱，又可中健脾气、以运化水湿达到排氚解毒的主要目的，故为君药。方中白术和茯苓健脾益气、淡渗利湿、利尿排氚，辅助君药增强调补脾肾、排氚解毒之功，故为臣药。方中猪苓、泽泻和桂枝三药合用，温肾阳、助气化、通膀胱、排氚毒，共为佐药。方中桔梗，开提肺气、通调水道、下输膀胱，升清降浊，佐助君药利尿排氚，故为使药。

4.2排氚片的利尿作用

排氚片中君药黄芪具有补气升阳、固表止汗、利水消肿等功能主治[11]，有学者对黄芪药材利尿作用的谱效关系进行了系统研究[12]。方中茯苓、猪苓和泽泻是常见的中药利尿药，有学者通过综述，分析讨论了其活性成分及利尿作用机制[13]。本文通过药效学试验也表明，中药排氚片对大鼠有明显的利尿作用，其有效剂量为9.6 g生药·kg-1，相当于成人拟用剂量的15倍。

4.3排氚片的临床前安全性的初步评价

在急性毒性的预试验中，将每克受试药加水至1.5 mL，给每只小鼠灌胃0.4 mL·10g-1体质量，未观察到小鼠出现明显的毒性反应和死亡，主要症状为活动迟缓，部分小鼠拉稀便，且30 min后恢复正常。为了观察小鼠对排氚片的耐受情况，4 h后又重复给药一次。第2次给药后小鼠的反应同第一次给药。考虑到再增加给药量有困难，因此对本试药进行小鼠最大耐受剂量（MTD）测定。一天内间隔4 h给小鼠2次受试药，总剂量为333.8 g生药·kg-1。给药后连续观察2周，小鼠未出现严重的毒性反应和死亡。给药后小鼠立即出现一过性的症状可能是由于灌药的机械刺激造成的胃肠不适。小鼠对排氚片一日2次给药的MTD大于333.8 g生药·kg-1，相当于临床一日拟用量的521.6倍。

[1] 马萍，李志韧，雷宁，等.HPLC-ELSD法测定排氚片中黄芪甲苷的含量[J].解放军药学学报，2014，30（5）：447-448.

[2] 辛艳茹，刘丽宏，马萍，等.排氚片对小鼠体内氚的促排作用[J].武警后勤学院学报（医学版），2013，22（9）：773-776.

[3] 中华人民共和国卫生部药政管理局.中药新药研究指南（药学药理学 毒理学）[G].北京：中华人民共和国卫生部药政管理局，1994：60-64，202-204.

[4] 中华人民共和国卫生部药政管理局.新药（西药）研究指导原则汇编（药学 药理学 毒理学）[G].北京：中华人民共和国卫生部药政管理局，1993：121-124.

[5] 徐淑云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[M].北京：人民卫生出版社，2002：987.

[6] 陈奇.中药药理研究方法学[M].北京：人民卫生出版社，1993：356-362.

[7] 卫生部新药审评办公室.新药审批办法及有关法规汇编[G].1992.

[8] 袁伯俊，王治乔.新药临床前安全性评价与实践[M].北京：军事医学科学出版社，1997：23-42.

[9] 上海第一医学院卫生统计学教研组.医学统计方法[M].上海：上海科学技术出版社，1979：32-33.

[10] 储生康.五苓散临床应用体会[J].中医药临床杂志，2015，27（4）：561-562.

[11] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].2015年版.北京：中国医药科技出版社，2015：303.

[12] 刘小花，蔺兴遥，梁瑾，等.黄芪药材利尿作用的谱效关系研究[J].中国现代应用药学，2013，30（5）：491-495.

[13] 赵宇辉，唐丹丹，陈丹倩，等.利尿药茯苓、茯苓皮、猪苓和泽泻的化学成分及其利尿作用机制研究进展[J].中国药理学与毒理学杂志，2014，28（4）：594-599.

Study on the diuretic effects and acute toxicity of the Paichuan tablets

MA Ping1,LI Zhi-ren1,LEI Ning1,CAO Miao1,ZHANG Zhi-jie1,LIU Li-hong1,ZHOU Xiang-yan2,XIN Yan-ru1(1. Department of Pharmacy,General Hospital of the Rocket Forces,Beijing 100088,China; 2. National Institute for Radiological Protection,Chinese Center for Disease Control and Prevention,Beijing 100088,China)

Objective: To study the diuretic effect and acute toxicity of Paichuan tablets,in order to offer references for its clinical application. Methods: Metabolic cage method of rats was used to measure urine volume after the treatment. The rats were divided into low,medium and high three dose groups. The amounts of intragastric administration dose for each group were 4.8,9.6,19.2 g·kg-1in crude drug,respectively. The rats were given twice dose in 4 hours each day and continuously observed for two weeks to find out the maximum tolerated dosage of Paichuan tablets.Results: The amount of urine volume in medium and high dose groups were significantly higher than the blank control group in 1 – 2 h or 2 – 3 h (P ＜ 0.05). The urine volume showed that the diuretic effect intensity in the low,medium and high dose group was 130.0%,140.0% and 155.7% compared with the blank control group. The differences among each groups were statistically significant (P ＜ 0.05). No severe toxicity response and death were observed. Conclusion: Paichuan tablets has diuretic effect. The effective dose is 9.6 g·kg-1in crude drug,which is 15 times of the adult planning dose. The maximum tolerated dose (MTD) is greater than 333.8 g·kg-1in crude drug for 4 hours twice dose regimen,which is 521.6 times of the clinical planning daily dose.

Paichuan tablets; Diuretic effect; Acute toxicity test

R917

A

1672 - 8157(2016)01 - 0014 - 03

国家科技重大专项（2009ZXJ09001-022）

辛艳茹，女，主任药师，主要从事医院药学管理工作。E-mail：xinyanru@sina.cn

马萍，女，副主任药师，主要从事军特药及医院新制剂的研发。E-mail：maping691009@126.com

（2015-08-10

2015-11-19）