D型肉毒梭菌生物毒素防治青海田鼠的试验研究

李生庆 张西云 胡国元 范玉霞 刘生财李志宁 李秀平 王亭亭 黄 荣 刘怀新

(青海省畜牧兽医科学院，西宁，810016)

D型肉毒梭菌生物毒素防治青海田鼠的试验研究

李生庆 张西云 胡国元 范玉霞 刘生财李志宁 李秀平 王亭亭 黄 荣 刘怀新

(青海省畜牧兽医科学院，西宁，810016)

D型肉毒灭鼠剂；

(Qinghai Academy of Animal Sciences and Veterinary Medicine，Xining ，810016，China)

青藏高原草地具有涵养水源与全球气候调节的重要作用，青藏高原草地应以保护生态环境功能为主要目的，以生态保护发展战略为优先[1-2]。然而，近年来随着生态环境的不断改变，包括青海田鼠(Lasiopodomysfuscus)在内的多种害鼠对高原牧区草地植被的破坏日趋严重。据统计，1987～1997年的10 a间鼠害面积的年增长率达43.8%。据果洛州的实测资料，果洛州每公顷草地平均有青海田鼠1 450只，洞口4 500 个，对草地植被的破坏相当严重[2]。

青海田鼠为啮齿目(Rodentia)、仓鼠科(Cricetidae)、毛足田鼠属动物，主要分布于青海、四川省，栖息于海拔3 700～ 4 800 m的草地中，为青藏高原特有种[3]。该鼠喜栖在疏丛型草地及灌丛草地等气候温和，土壤疏松，牧草比较丰茂，具有高山嵩草(Kobresiapygmaea)、蕨麻(Potentillaanserina)、白颖薹草(Carexduriuscularigescens)、香附子(Cyperusrotundus)的草地上，在沿河流域沼泽地带呈连续性分布，而在山坡嵩草草甸、低矮小叶金露梅(Potentillaparvifolia)灌丛草甸中呈岛状分布[4]。该鼠在青海省内主要分布于玉树州、果洛州、海南州、海西州、海北州等地区[5]。

20世纪90年代，三江源地区的鼠害治理方法主要是化学和物理防治，即化学药剂毒杀和人工捕杀。化学药物自60 年代以来，先后更换了三代药物。早先使用的药物毒性大，能引起动物的二次中毒和积累中毒，从而破坏食物链[2]。鉴于此，青海省畜牧兽医科学院利用D型肉毒梭菌所产毒素成功研制了D型肉毒灭鼠剂。为了检验该灭鼠制剂对青海田鼠的防治效果，我们进行该项实验研究。

1 材料

毒素：813批D型肉毒毒素，毒力1 000万MLD/mL(小白鼠静注)

动物：青海田鼠从刚察县捕捉。

2 试验方法

2.1 灌胃半数致死量的测定

用霍恩氏法测定LD50，以每公斤体重设置21 500、46 400、100 000、215 000 MLD四个剂量组(毒素溶液配制成每毫升为1 075、2 300、5 000、10 750 MLD/mL)。每组灌服5只田鼠，以每20 g体重分别灌服430、930、2 000、4 300 MLD毒素量，喂燕麦和胡萝卜，观察5 d记录死亡结果。

2.2 有选择适口性的测定

取健康田鼠10只，平均体重28.2 g，不分雌雄，放入一鼠笼中，试验前喂胡萝卜及燕麦。试验时取形状大小相同的2个食盆，一个放含0.1% D型肉毒灭鼠剂的小麦，另一个食盆内放无毒小麦(取常水10 mL加入100 g小麦中，反复搅拌，充分混匀后闷制24 h)，同时放入笼子中央，12 h称剩余饵料量，并调换位置，48 h后改喂正常饲料(胡萝卜及燕麦)，观察记录摄食量及死亡情况。

2.3 无选择适口性的测定

取健康田鼠20只，平均体重28.7 g，不分雌雄，随机分为2组，每组10只。

第一组(毒饵组)：喂含有0.1% D型肉毒灭鼠剂的小麦，即取含2亿MLD/瓶 D型肉毒毒素冻干剂1瓶，加水20 mL即成为1 000 MLD/mL D型肉毒灭鼠剂，吸取1 mL加入到99 mL水中充分混合，然后再吸取10 mL加入到100 g小麦中，充分混合均匀闷制24 h后饲喂。

第二组(无毒组)：取10 mL水加入到100 g小麦中，反复搅拌充分混匀闷制24 h后饲喂。

共饲喂48 h，在12、24、48 h分别称剩余饵料1次，48 h后喂正常饲料，观察10 d并记录摄食量和死亡情况。

2.4 再遇适口性的测定

取健康青海田鼠10只，不分雌雄，平均体重28 g，随机分为2组，每组10只。

第一组为再遇试验组，于2009年6月5日投给亚致死量D型肉毒灭鼠剂毒饵，亚致死量为1/4LD50。取形状大小相同的2个食盆，每个放入亚致死量毒饵100 g，饲喂24 h后取出称重，记录消耗量并改喂正常饲料(胡萝卜及燕麦)，3 d后，做再遇适口性试验。

第二组为对照组，正常饲喂。

3 d后，再遇组与对照组分别用含0.4% D型肉毒灭鼠剂的小麦毒饵和无毒小麦各100 g，取2个相同的食盆，分别放入0.4%的D型肉毒灭鼠剂的小麦毒饵及无毒小麦各100 g，每12 h称重并调换位置，观察记录摄食量及死亡情况。

3 试验结果

3.1 D型肉毒毒素对青海田鼠灌胃试验

测得813批D型肉毒毒素对青海田鼠的灌胃半数致死量(共3次)，实验数据列于表1、表2、表3中。

表1 D型肉毒毒素对青海田鼠LD50测定(试验1)

Tab.1 Determination of LD50 about botulinum toxin Type D to Qinghai voles(Test 1)

表2 D型肉毒毒素对青海田鼠LD50测定(试验2)

Tab.2 Determination of LD50 about botulinum toxin Type D to Qinghai voles(Test 2)

表3 D型肉毒毒素对青海田鼠LD50测定(试验3)

Tab.3 Determination of LD50 about botulinum toxin Type D to Qinghai voles(Test 3)

根据表1、表2、 表3的实验结果，得出以下结论。

试验1：LD50=5.01万MLD/kg体重(95%可信限为3.08～8.14万MLD/kg体重)；

试验2：LD50=5.11万MLD/kg体重(95%可信限为2.43～10.8万MLD/kg体重)；

试验3：LD50=6.81万MLD/kg体重(95%可信限为4.00～13.5万MLD/kg体重)。

上述结果表明D型肉毒毒素对青海田鼠敏感。

3.2 青海田鼠对D型肉毒灭鼠剂选择适口性试验结果

青海田鼠对D型肉毒灭鼠剂毒饵及无灭鼠剂饵料采食量的比较试验结果列于表4。

表4 选择适口性试验结果

Tab.4 The result of choose palatability

注：表中72 h后为观察期，记录其死亡情况，实验动物给予正常饲喂，故饵料消耗标记为“0”

研究结果表明：毒饵消耗量与无毒饵消耗量相比，摄食系数为0.92，表明青海田鼠对D型肉毒灭鼠剂选择适口性良好。

3.3 青海田鼠对D型肉毒灭鼠剂无选择适口性试验结果

采用青海田鼠对D型肉毒灭鼠剂毒饵及无灭鼠剂饵料采食量的比较试验结果。

表5 无选择适口性试验结果

Tab.5 The result of no choose palatability

实验结果表明：青海田鼠对D型肉毒灭鼠剂无选择适口性很好，摄食系数(毒饵组摄食量/对照组摄食量)为0.95。

3.4 青海田鼠对D型肉毒灭鼠剂再遇适口性试验结果

表6 亚致死量毒饵摄食情况

Tab.6 Feeding coefficient of sublethal amount poison bait

表7 再遇试验摄食情况

Tab.7 Feeding coefficient of repeating palatability

注：表中48 h后为观察期，记录其死亡情况，实验动物给予正常饲喂，故饵料消耗标记为“0”

表8 对照组摄食情况

Tab.8 Feeding coefficient of control group

注：表中48 h后为观察期，记录其死亡情况，实验动物给予正常饲喂，故饵料消耗标记为“0”

实验结果表明：再遇适口性摄食系数为1.15，对照摄食系数为0.94，表明再遇适口性良好，青海田鼠对D型肉毒灭鼠剂再遇时无避食现象。

4 结论

通过以小麦做基饵在实验室内测定青海田鼠对D 型肉毒灭鼠剂的敏感性、适口性和再遇适口性。实验结果表明：青海田鼠对D型肉毒灭鼠剂(小麦做基饵)敏感，有选择适口性、无选择适口性及再遇适口性均良好，D型肉毒灭鼠剂具备潜在的防治野外青海田鼠的能力。

5 讨论

5.1 高原鼠兔(Ochotonacurzoniae)、高原鼢鼠(Myospalaxbaileyi)和青海田鼠是危害青海省草原的3种主要害鼠种类，多年来，青海省在防治高原鼠兔和高原鼢鼠方面积累了丰富的经验，防治技术日臻完善，但在青海田鼠防治方面，始终未能找到成功的防治方法和技术。本试验通过D型肉毒毒素对青海田鼠的半数致死量(LD50)的测定，青海田鼠喜食性饵料的筛选以及害鼠对D型肉毒毒素的适口性、再与适口性等试验，取得了现地灭鼠中所需的相关技术参数。

5.2 本试验中我们测得D型肉毒毒素对青海田鼠的灌胃半数致死量分别为5.01万MLD/kg体重，5.11万MLD/kg体重，6.81万MLD/kg体重，平均为5.64万MLD/kg体重，该数据与高原上另外两种主要害鼠高原鼠兔的敏感性(5 010 MLD/kg体重)，高原鼢鼠相比较(5 840 MLD/kg体重)其敏感性相对较差，但仍然属于敏感范围，因此本实验首先从理论上证明了D型肉毒毒素作为防治高原鼢鼠具有一定的可行性。为进一步证实药物在现地鼠害防治中的使用效果，还需进行小区灭鼠实验作为参考。

[1] 汪诗平.青海省“三江源”地区植被退化原因及其保护策略[J].草业学报，2003，12(6)：1-9.

[2] 周立志，李迪强，王秀磊，等.三江源自然保护区鼠害类型、现状和防治策略[J].安徽大学学报：自然科学版，2002，26(2)：87-96.

[3] 李德浩.青海经济动物志[M].西宁：青海人民出版社，1989：689-691.

[4] 王祖郧，罗松达卫，于晓涛，等.青海省青海田鼠鼠疫自然疫源地的发现与研究[J].中国地方病学杂志，2004，23(1)：69-72.

[5] 张宇卫，祁生源.青海省农田主要害鼠种类调查报告[J].青海农技推广，2015(2)：15-17.

Type D botulinum rodenticide；

Research on Prevention and Control of QinghaiVoles by Type D Botulinum Rodenticide

Li Shengqing Zhang Xiyun Hu Guoyuan Fan Yuxia Liu ShengcaiLi Zhining Li Xiuping Wang Tingting Huang Rong Liu Huaixin

We used Horn’s method to measure the effect of type D botulinum rodenticide on Qinghai voles.The results showed that the gastricLD50was 50 100 MLD/kg body weight.The 95% confidence limit was 30 800-81 400 MLD/kg body weight.Qinghai voles proved sensitive to type D botulinum rodenticide.Type D botulinum rodenticide had good selective palatability to Qinghai voles with feeding coefficient 0.92.Selectiveness palatability was high with a feeding coefficient of 1.15.Repeat palatability was high with a feeding coefficient of 1.15.Type D botulinum rodenticide proved effective for control of Qinghai voles.

稿件运行过程

2016-03-25

修回日期：2016-06-15

发表日期：2016-11-10

青海田鼠；

半数致死量；

再遇适口性

Qinghai voles ；

Median lethal dose；

Repeating palatability

Q958.1

A

2310-1490(2016)04-297-04

采用霍恩氏法测得D型肉毒梭菌毒素对青海田鼠的灌胃半数致死量LD50=5.01万MLD/kg体重，95%可信限为3.08～8.14万MLD/kg体重，表明D型肉毒灭鼠剂对青海田鼠敏感；实验以小麦做基饵，测得青海田鼠对小麦基饵的D型肉毒灭鼠剂有选择适口性良好，摄食系数为0.92；无选择适口性很好，摄食系数为1.15；再遇适口性良好，摄食系数为1.15。该项试验研究为利用D型肉毒梭菌生物毒素进行大面积青海田鼠的防治提供了基础数据。

李生庆，男，36岁，博士研究生，副研究员；主要从事动物疫病防治及生物毒素草地鼠害防治研究。E-mail：lsq.8008@163.com