生猪猪衣原体感染的PCR诊断

李润成，马　攀，李　淼

（湖南农业大学动物医学院，湖南 长沙 410128）

生猪猪衣原体感染的PCR诊断

李润成，马攀，李淼

（湖南农业大学动物医学院，湖南 长沙 410128）

衣原体是介于细菌和病毒之间的一种微生物，猪衣原体可引起生猪结膜炎、肠炎和肺炎。2015年4月湖南省益阳某规模猪场，约40%的120～160日龄育肥猪出现眼结膜发红、流泪等症状，笔者采用PCR方法检测了6份鼻拭子和2份眼睛分泌物拭子，并进行了药物防治，报告如下。

1　发病情况

2015年4月起，湖南省益阳某规模猪场120～160日龄的猪群中陆续出现生猪眼结膜潮红，流泪，但食欲和精神状态没有明显异常，使用磺胺类药物以及保肝护肝类药物没有效果，发病率约40%左右，一般发病20 d左右可自行恢复。

2　实验室诊断

2.1样本采集选取发病症状明显的生猪，采集眼结膜分泌物棉拭子2份、鼻拭子6份。

2.2PCR检测

2.2.1DNA的提取将采集的棉拭子放于1 mL灭菌PBS当中，混匀后2份眼分泌物棉拭子作为1个样本，6份鼻拭子2份合成1份作3个样本进行检测，共4个样本。1个样本各取200 μL提取基因组DNA。提取方法按照试剂盒说明书进行。

2.2.2衣原体的PCR扩增参照文献［1］合成衣原体科外膜蛋白基因通用引物，以提取的基因组为模板进行PCR扩增。结果眼分泌物棉拭子和1个鼻拭子混合样本扩增出了预期大小的特异性条带（见图1）。将PCR产物进行测序（序列已登录GenBank，登录号为：KT003536）分析发现测出序列同猪衣原体相应序列同源性达到91.7%

3　防治

选取衣原体敏感药物强力霉素+葡萄糖+电解多维拌料连喂7 d，观察猪群情况，进行药物效果评价。全群饲喂7 d后，没有新发病例出现，已发病的生猪逐渐康复，眼结膜恢复正常，再拌药饲喂7 d，猪群基本全部恢复正常。

图1　衣原体PCR鉴定结果

4　讨论

本文从出现眼结膜潮红、流泪的生猪眼分泌物拭子、鼻拭子，通过PCR方法扩增到了猪衣原体基因，共检测了4个样本，只有眼分泌物拭子和1个鼻拭子样本检测为猪衣原体阳性，其原因可能有：该猪群主要表现为眼睛问题、鼻拭子中猪衣原体检出率本身较低；DNA提取时模板质量不好或是模板浓度过高可能导致假阴性结果［2］；阴性样本来源猪没有猪衣原体感染；阴性样本来源猪感染过猪衣原体，但采样时病原浓度已很低。

本文从出现眼结膜潮红、流泪的生猪眼分泌物拭子、鼻拭子，通过PCR方法检测到了猪衣原体，同时笔者还将拭子进行了细菌分离鉴定，分离到了葡萄球菌、摩拉克菌，鼠鼻罗菌，但未见到巴氏杆菌或波氏杆菌，证明该次生猪眼结膜潮红、流泪与萎缩性鼻炎没有关系，此外，猪场使用衣原体敏感的药物可起到控制疫病的作用。因此，可以推断该猪群眼结膜炎可能与猪衣原体感染有较大的关系，至于是否完全是猪衣原体感染引起的结膜炎，由于只在4个样本中2个样本检测到猪衣原体阳性结果。但猪衣原体的感染可呈高发性无症状感染或导致生猪结膜炎、关节炎、心包炎、浆膜炎、肠炎、肺炎、母猪流产和公猪精囊炎［3］，应该受到各养猪工作者及兽医的关注。

［1］李应国.动物衣原体分子检测方法研究和诊断试剂盒的研制及应用［D］.重庆：重庆大学生物工程学院，2014：37.

［2］闫冬春，董双林，黄倢.PCR检测对虾白斑综合征病毒（WSSV）中假阴性的探讨［J］.海洋与湖沼，2007，38（2）：146-149.

［3］Kristien De Puysseleyr，Leentje De Puysseleyr，Julie Geldhof，et al.Development and Validation of a Real-Time PCR for Chlamydia suisDiagnosis in Swine and Humans［J］.PLOS ONE，2014，9（5）：1-7.

S855.1+1

B

0529-6005（2016）09-0047-01

2015-06-24

李润成（1979-），男，实验师，硕士，从事动物传染病的教学与研究工作，E-mail：lixuesheng99@126.com