用可见-紫外分光光度法测定水产品中组胺的含量

江生汪敏 白亚敏 韩燕

（重庆市食品药品检验检测研究院，重庆401121）

·食品分析·

用可见-紫外分光光度法测定水产品中组胺的含量

江生*汪敏 白亚敏 韩燕

（重庆市食品药品检验检测研究院，重庆401121）

组胺中毒是由于食用含有一定数量组胺的某些鱼类而引起的过敏性食物中毒，主要是因为此类鱼含有较高的组氨酸，当鱼体不新鲜或腐败时，污染鱼体的细菌产生脱羧酶，使组氨酸脱羧生成组胺。中毒机理是组胺引起毛细血管扩张和支气管收缩，导致一系列的临床症状。采用可见-紫外分光光度法测定水产品中组胺含量时，原标准加入3 mL碳酸钠溶液（50 g/L），而本研究则加入3 mL无水碳酸钠溶液（50 g/L）进行检测，并对该检测方法的准确性和稳定性进行了分析。

1　材料与仪器

1.1材料

磷酸组胺，中国食品药品检定研究院，批号为150510-201313；正戊醇，分析纯；三氯乙酸，分析纯；碳酸钠，分析纯；氢氧化钠，分析纯；盐酸，分析纯。

1.2仪器

HP-8453E紫外分光光度计，美国惠普公司。

2　方法与结果

2.1供试品溶液制备

称取适量绞碎并混和均匀的供试品，置于具塞锥形瓶中，加入20 mL三氯乙酸溶液（100 g/L），浸泡3 h，过滤；精密量取2.0 mL滤液，置于分液漏斗中，加氢氧化钠溶液（250 g/L）使其呈碱性，每次加入3 mL正戊醇，振摇5 min，提取3次，合并正戊醇并稀释至10.0 mL；精密量取2.0 mL正戊醇提取液于分液漏斗中，每次加3 mL盐酸（1+11），振摇提取3次，合并盐酸提取液并稀释至10.0 mL，即得。

2.2标准品溶液制备

称取磷酸组胺标准品约27.6 mg，置50 mL量瓶中，加水溶解稀释至刻度，摇匀，作为组胺标准储备液。精密量取组胺标准储备液5.0 mL，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3测定

精密量取盐酸提取液2.0 mL置于10 mL比色管中，分别精密量取标准品溶液0.00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL、2.00 mL，置于10 mL比色管中，再加1 mL盐酸（1+11）。样品管和标准管各加3 mL无水碳酸钠溶液（50 g/L），3 mL偶氮试剂，加水至刻度，摇匀，放置10 min后，以零管调节零点，于480 nm的波长处测定吸收度，以质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，见图1。求得回归方程为Y=0.116 8X +0.004 1，相关系数R2=0.999 7，表明组胺质量浓度在0.407 81 μg/mL～4.078 1 μg/mL范围内，与吸收度呈良好的线性关系。

图1　组胺标准曲线

2.4重复性试验

称取适量绞碎并混和均匀的供试品6份，按2.1方法制备供试品溶液，同时做空白试验，按2.3方法依法测定，计算样品中组胺含量，结果见表1。由表1结果可知，采用该方法提取与检测，重复性良好。

表1　重复性试验结果（n=6）

2.5精密度试验

精密量取标准品溶液0.80 mL，按2.3方法依法操作，同时做空白试验，连续测定5次，结果其精密度为0.21 %（n=5）。

2.6加样回收试验

精密称取已知含量的供试品（0.225 g/kg）10.0 g，共9份，分别精密量取2.0 mL、2.5 mL、3.0 mL组胺标准储备液，按2.1方法制备供试品溶液，同时做空白试验，按2.3方法依法操作，计算回收率，结果平均回收率为94.8 %，RSD为1.1 %（n=9），结果见表2。

表2　回收率测定结果（n=9）

2.5稳定性试验

精密量取标准品溶液0.80 mL，按2.3方法依法操作，同时做空白试验，分别在0.0 h、0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、3.0 h、4.0 h、5.0 h时测定吸光度，结果见表3。结果表明溶液在1.5 h内基本稳定，吸光度平均值为0.193 1，RSD为0.09%，随时间增加吸光度变小。

表3　稳定性试验结果（n=7）

3　讨论

综上所述，采用该方法提取、测定水产品中组胺含量线性良好，稳定性好，重复性、精密度、加样回收率试验表明，本法简便可行。

原标准加入3 mL碳酸钠溶液（50 g/L），本研究采用3 mL无水碳酸钠溶液（50 g/L）。若碳酸钠含10个结晶水配成溶液，根本不显色，随着结晶水的减少渐渐显色，采用无水碳酸钠配成溶液，在1.5 h内显色稳定，结果表明此方法操作简单，快速，测定结果准确。

［1］中华人民共和国卫生部. GB/T 5009.45-2003 水产品卫生标准的分析方法［S］.北京：中国标准出版社，2003：359-362.

Determination of histamine in the aquatic products by UV

JIANG Sheng*WANG Min BAI Yamin HAN Yan
（Chongqing institute for food and drug control，Chongqing 401121，China）

建立了水产品中组胺含量的测定方法。采用正戊醇提取，偶氮试剂显色，可见-紫外分光光度计检测，测定波长为480 nm。试验结果表明，当组胺的质量浓度在0.407 81 μg/mL～4.078 1 μg/mL范围内，质量浓度与吸光度呈良好线性关系（R2=0.999 7）。平均回收率为94.8 %，RSD为1.1%（n=9）。本法简单，易操作，测定结果准确。

可见-紫外分光光度法；组胺；水产品

To establish a UV method for the determination of histamine in the aquatic products. With positive amyl alcohol extraction，encounter azo reagent orange. The detection wavelength was set at 480 nm. Histamine linear range was：0.407 81 μg/mL～4.078 1 μg/mL（R2=0.999 7）.The average recovery was 94.8%，and all RSD less than 1.1%（n=9）. This method is sensitive，accurate and reproducible and can be used to control the quality of the cosmetic.

UV；histamine；aquatic products

TS207.3

A

1673-6044（2016）01-0062-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2016.01.017

*江生，男，1973年出生，1998年毕业于成都理工大学分析化学专业，正高级工程师。

2015-12-14