麻杏二陈特禀咳颗粒的提取工艺优选及含量测定研究

杨正腾广西中医药大学第一附属医院530023南宁市东葛路89-9号叶信广西中医药大学530001马家宝王力宁陈小媛广西中医药大学第一附属医院530023陈勇广西中医药大学530001

·中药方剂·

麻杏二陈特禀咳颗粒的提取工艺优选及含量测定研究

杨正腾广西中医药大学第一附属医院530023南宁市东葛路89-9号
叶信广西中医药大学530001
马家宝王力宁陈小媛广西中医药大学第一附属医院530023
陈勇*广西中医药大学530001

目的：考察并优选麻杏二陈特禀咳颗粒的提取工艺，建立麻黄碱与橙皮苷的含量测定方法。方法：以麻黄碱与橙皮苷的含量为综合评价指标，以加水量、提取次数、提取时间为考察因素，采用L9（34）正交试验优选麻吉二陈特禀咳颗粒的提取工艺；采用HPLC测定麻黄碱、橙皮苷的含量，流动相分别为甲醇-乙腈-0.2%磷酸（2.5∶2.5∶95）、乙腈-0.2%磷酸（21∶79），检测波长分别为208 nm、283 nm。结果：最佳提取工艺为加12倍水，提取3次，每次90 min。麻黄碱平均含量为0.59 mg/g，RSD=2.08%（n=3）；橙皮苷平均含量为2.98 mg/g，RSD= 3.61%（n=3）。结论：该提取工艺和含量测定方法稳定可行，可以为麻杏二陈特禀咳颗粒的生产和质量控制提供参考。

麻杏二陈特禀咳颗粒；麻黄碱；橙皮苷；正交试验；HPLC

麻杏二陈特禀咳颗粒是在麻杏二陈汤复方基础上开发而成，由炙麻黄、杏仁、细辛、射干、僵蚕、半夏、陈皮、茯苓、莱菔子和甘草等10味药组成，是治疗小儿特禀质咳嗽的经验方［1-2］。颗粒剂型既保留原处方的有效性，又符合小儿服药特点，具有便于携带与保存的优点。为此，本课题组将该方开发成颗粒剂，并对该方的工艺及质量标准进行研究，现报道如下。

1　实验材料

1.1仪器1260型高效液相色谱（美国安捷伦公司）；SQPPRAGTUM224-1CN电子分析天平（德国赛多利斯科学仪器有限公司）；Simplicity-185超纯水器（美国密理博公司）；LG16-W高速微量离心机（上海安亭科学仪器厂）。

1.2试药甲醇、乙腈为色谱纯，水为纯水，其他试剂均为分析纯。麻黄碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：171241-201007）；橙皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110721-201306）；药材均购自柳州市神农中药饮片厂。

表1　正交设计因素水平表

2　方法与结果

2.1提取工艺条件筛选原药材饮片浸泡1 h，在同等温度下（100℃）考察加水量、提取次数和提取时间三个因素［3］。取麻杏二陈汤处方量（61 g）9份，以麻黄碱和橙皮苷含量综合评分为评价指标，权重系数分别为0.5、0.5。采用L9（34）正交试验选取麻杏二陈特禀咳颗粒最佳提取工艺，设计因素水平表见表1，结果见表2、表3。

由表2实验结果的直观分析可知，影响麻杏二陈汤提取效果的因素大小顺序为B＞A＞C，即提取次数＞加水量＞提取时间；其中A3＞A2＞A1，B3＞B2＞B1，C2＞C3＞C1。且从表3方差分析结果得知，B因素对提取工艺有显著影响（P＜0.05），故选择最佳提取工艺条件为A3B3C2，即以12倍水量提取3次，每次90min。

表2　正交试验方案安排与结果

表3　方差分析结果

2.2处方颗粒的制备以上述最优提取工艺为条件，浓缩药液至浸膏，加乙醇使含醇量为60%，静置24 h，滤过，再次浓缩至浸膏，加入适量辅料，混匀，过3号筛，整粒干燥至颗粒状。

2.3麻黄碱的测定方法参照文献［4-5］进行测定。

2.3.1麻黄碱对照品溶液的制备精密称取麻黄碱对照品2.40mg，加甲醇定容至50ml，制成0.048mg/ml的麻黄碱对照品溶液。

2.3.2供试品溶液的制备取2.2项下颗粒剂2份，每份0.5 g，研细后精密称定，置100m l锥形瓶中，精密加入甲醇50m l，超声30 min后取出放冷，加甲醇补足重量，过滤后备用。

2.3.3阴性溶液的制备按处方和筛选出的工艺制备不含麻黄的阴性样品，并按2.3.2项方法制备得阴性溶液。

2.3.4检测波长的选择取2.3.1项下对照品溶液适量，在200～400 nm进行全波长扫描，结果显示麻黄碱在208 nm处有最大吸收。

2.3.5色谱条件色谱柱为Agilent SB-C18柱（5μm，4.6mm×250mm），流动相为甲醇-乙腈-0.2%磷酸（2.5∶2.5∶95），检测波长为208 nm，流速为1.0 ml/min。理论板数按麻黄碱峰计算均应不低于3 000。此条件下色谱图见图1。

2.3.6标准曲线绘制精密吸取麻黄碱对照品溶液（0.048 mg/m l）5μl、10μl、15μl、20μl、25μl和30μl，按2.3.5项下色谱条件分别测定，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程Y= 20667.3X-8421.6（r=0.9996），线性范围为0.24～1.44μg。

2.3.7精密度试验分别精密吸取麻黄碱对照品溶液1μl，按2.3.5项下色谱条件连续进样6次，测出峰面积分别为12 277、12 280、12 283、12 272、12 289、12 268，计算峰面积的RSD＜2%，表明仪器精密度良好。

2.3.8重复性试验精密称取同一批样品，按2.3.2项下方法制备供试品溶液，共6份，按2.3.5项下色谱条件测定，测出峰面积分别为1 523、1 527、1 518、1 531、1 529、1 530，RSD＜2%，表明该方法重复性良好。

2.3.9稳定性试验精密吸取供试品溶液20μl，室温放置，分别于0 h、1 h、3 h、6 h、9 h、12 h按2.3.5项下色条件测定，计算峰面积的RSD为1.1%（n=6），表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.3.10加样回收率试验分别精密称取已知含量的样品6份，分别加入适量麻黄碱对照品溶液，计算回收率。测得平均回收率为100.02%，RSD为1.30%（n=6）。结果见表4。

图1　麻黄碱HPLC色谱图

表4　加样回收率测定结果（n=b）

2.4橙皮苷的测定方法参照文献［4-5］进行测定。

2.4.1橙皮苷对照品溶液的制备

精密称取橙皮苷对照品10 mg，加甲醇定容至50m l，制成0.2mg/m l的橙皮苷对照品溶液。

2.4.2供试品溶液的制备取2.2项下颗粒剂2份，每份0.5 g，研细后精密称定，置100 m l锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，超声30min后取出放冷，加甲醇补足重量，过滤后备用。

2.4.3阴性溶液的制备按处方

和筛选出的工艺制备不含陈皮的阴性样品，并按2.4.2项方法制备得阴性溶液。

2.4.4检测波长的选择取2.4.1项下对照品溶液适量，在200～400 nm进行全波长扫描，结果显示橙皮苷在283 nm处有最大吸收。

2.4.5色谱条件色谱柱为Agi lent SB-C18柱（5μm，4.6 mm× 250 mm），流动相为乙腈-0.2%磷酸（21∶79），检测波长为283 nm，流速为1.0 ml/min。理论板数按橙皮苷峰计算应不低于3 000。此条件下色谱图见图2。

2.4.6标准曲线绘制精密吸取橙皮苷对照品溶液（0.2mg/m l）5μl、10μl、15μl、20μl、25μl和30μl，按2.4.5项下色谱条件分别测定，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程Y=55 678.8X-11 163.6（r=0.9999），线性范围为1.00～15.00μg。

2.4.7精密度试验分别精密吸取橙皮苷对照品溶液1μl，按2.4.5项下色谱条件连续进样测定6次，测出峰面积分别为44 521、44 530、44 511、44 512、44 526、44 510，计算峰面积的RSD＜2%，表明仪器精密度良好。

2.4.8重复性试验精密称取同一批样品，按2.4.2项下方法制备供试品溶液，共6份，按2.4.5项下色谱条件测定，测出峰面积分别为33 223、33 227、33 218、33 231、33 229、33 230，RSD＜2%，表明该方法重复性良好。

2.4.9稳定性试验精密吸取供试品溶液20μl，室温放置，分别于0 h，1 h，3 h，6 h，9 h，12 h按2.4.5项下色谱条件测定，计算峰面积的RSD为1.5%（n=6），表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.4.10加样回收率试验分别精密称取已知含量的样品6份，分别加入适量橙皮苷对照品溶液，计算回收率。测得平均回收率为99.82%，RSD为1.36%（n=6）。结果见表5。

2.5样品含量测定精密称取2.2项下颗粒约0.5 g 3份，按2.3.2项下方法制备供试品溶液，分别取10μl按2.3.5和2.4.5项下色谱条件测定，计算出麻黄碱和橙皮苷含量。结果见表6。

3　讨论

3.1麻杏二陈汤的提取因素曾考察过药材浸泡时间，但效果不明显，故选择中药煎煮常规的加水量、提取次数、提取时间作为考察因素，并以处方中主药麻黄和陈皮的有效成分麻黄碱和橙皮苷的含量综合评分为评价指标，筛选出最佳提取工艺条件为A3B3C2，即以12倍水量提取3次，每次90min。

3.2由于麻杏二陈汤中僵蚕、半夏等含有大量的蛋白质和淀粉，所以在制备供试品溶液时会有大量沉淀，但不影响麻黄碱与橙皮苷的测定。

3.3特禀质类似于西医的过敏体质，特禀质咳嗽包括了咳嗽变异性哮喘（CVA）及既往病史有哮喘、CVA、过敏性鼻炎、荨麻疹等过敏体质小儿的咳嗽［6-7］。王力宁等［8］临床研究发现麻杏二陈汤治疗特禀质咳嗽具有特异性。方中炙麻黄和杏仁宣降肺气，细辛宣肺散寒，莱菔子化痰降逆，射干和僵蚕能够解痉祛风，半夏、陈皮和茯苓健脾燥湿化痰，甘草和中而调和诸药。诸药合用，标本兼顾，共奏逐寒化痰止咳之效。

本研究考察并优选了麻杏二陈特禀咳颗粒的提取工艺，建立了麻黄碱与橙皮苷的含量测定方法，结果表明，提取工艺和含量测定方法稳定可行，可为麻杏二陈特禀咳颗粒的生产和质量控制提供参考依据。

图2　橙皮苷HPLC色谱图

表5　加样回收率测定结果（n=6）

表6　样品中麻黄碱和橙皮苷含量测定结果（n=3）

［1］夏睿明.活用麻杏二陈汤治疗小儿重症咳喘［J］.现代医药卫生，2015，31（1）：1-2.

［2］向培福.麻杏二陈汤治小儿咳嗽［J］.四川中医，1990，9（3）：12.

［3］李圆圆，宋英，方芳，等.正交设计优选益心通脉合剂提取工艺［J］.中国实验方剂学杂志，2014，20（4）：32-34.

［4］刘倩，陈金月，文隽，等.麻杏二陈汤煮散质量标准［J］.中国实验方剂学杂志，2015，21（9）：71-73.

［5］刘倩，陈金月，黄权芳，等.HPLC法同时测定麻杏二陈汤煮散剂中盐酸麻黄碱和苦杏仁苷的含量［J］.中医药导报，2013，19（1）：80-82.

［6］王力宁，冯春晖，陈金月，等.麻杏二陈汤煮散治疗小儿特禀质咳嗽的临床研究［J］.中医儿科杂志，2012，8（5）：32-35.

［7］杨黎明.麻杏二陈汤加味孟鲁司特钠治疗小儿特禀质咳嗽60例临床观察［J］.中医儿科杂志，2015，11（4）：25-27.

［8］王力宁，姚勇志，程志勇，等.小儿特禀质咳嗽中医证治规律及疗效评价研究［J］.中国中西医结合儿科学，2014，6（2）：105-108.

（2016-07-23收稿/编辑陈明伟）

R284.1

A

1003-0719（2016）05-0072-04

广西科学研究与技术开发计划项目（编号：桂科攻1355004）

，教授，硕士生导师，研究方向：药物分析、中药及其制剂质量分析；E-mail：cy6381@163.com