丹东地区屠宰生猪肺脏细菌的分离鉴定

陆秀玉

（辽东学院农学院，辽宁丹东118003）

丹东地区屠宰生猪肺脏细菌的分离鉴定

陆秀玉

（辽东学院农学院，辽宁丹东118003）

我国养猪业发展迅速，现代化、集约化和规模化的养殖方式已占据更大的市场，随之而来的是猪疾病种类和发病频率成为我国养猪业的主要难题，其中呼吸系统疾病是重点防控的一类疾病。引起肺脏发生疾病的主要病原微生物有细菌、病毒、支原体、寄生虫等。其中细菌主要有猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌、猪链球菌以及致病性大肠杆菌等，它们分别引起猪传染性胸膜肺炎、猪肺疫、副猪嗜血杆菌病和猪链球菌病等。本研究主要针对2014年11月至2015年11月期间丹东地区某屠宰场生猪病变肺脏进行细菌的分离鉴定，旨在为丹东地区猪的呼吸系统疾病的流行病学和病原学情况提供重要的依据。

1材料与方法

1.1病料2014年11月至2015年11月对丹东地区某生猪屠宰场的2 326头屠宰生猪肺脏样品进行观察，其中病变肺脏数量为1 024份，采集典型病变的肺脏50份进行细菌分离鉴定。

珠江水运也发生了天翻地覆的变化。40年来，珠江水系水路货物运输量从1988年的7231万吨增加到2017年的9亿吨；港口货物吞吐量从1988年的4459万吨增加到2017年的6.69亿吨；集装箱货运量由1988年的64万吨增长至2017年的1.48亿吨；基本建设投资从1988年的2.83亿元增长至2017年的76.77亿元……

1.2主要培养基血琼脂（自制）、普通琼脂（自制）、麦康凯琼脂、半固体糖发酵培养基、血清肉汤、M.R.和V-P试验用培养基、TSA（Tryptic SoyAgar）、TSB（Tryptic Soy Broth）、葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、甘露醇、尿素酶、尿素等，均购自杭州天和微生物试剂有限公司。

1.3主要试剂M·R·试剂与V-P试剂，购自杭州天和微生物试剂有限公司；革兰染色液（自配）、美兰染色液（自配）。

1.4细菌的分离与鉴定

增强这一技术专业人才的工作能力。建筑施工在开展的过程中，一定要注重人才培养，只有在具备充分人才的基础上才可以充分发挥注浆施工技术的作用。

1.4.2生化试验分离菌纯培养物进行糖发酵试验、吲哚试验、M.R.试验、V-P试验、尿素酶试验、硝酸盐还原试验、鸟氨酸脱羧酶试验、cAMP试验、柠檬酸盐利用试验。

（25）今宜再顯：昊天宜命，太玄悖與。（《太上說玄天大聖真武本傳神呪妙經註》卷三，《中华道藏》30/554）

2结果

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2.1细菌分离鉴定肺脏样品经过细菌的分离和纯化培养，共获得5种可疑菌落，分别命名为A、B、C、D、E菌，5种菌的培养特性如下：A菌在巧克力平板上可见圆形、边缘整齐、表面光滑的针尖大小菌落，经美蓝染色后呈两极浓染的短小杆菌。B菌在TSA血清平板上可看到半透明、露珠样的小菌落，直径为1～2 mm，并产生β溶血现象；在血清琼脂培养基上可见灰白色、边缘整齐、表面光滑的露珠样小菌落，经革兰染色后镜检，结果为革兰阴性菌，大多为短杆菌、球杆菌。C菌在TSA（加入NAD）中生长出表面光滑、湿润、半透明、边缘整齐、中间隆起的1～2 mm大小的菌落；在巧克力平板上生长呈针尖大小、半透明的菌落，经革兰染色，镜检可见革兰阴性小杆菌，菌体平直。D菌在血琼脂平板上可见圆形、透明的露珠样小菌落，边缘整齐，表面光滑湿润，呈α溶血现象。在普通琼脂平板和麦康凯琼脂平板上均不生长，经革兰染色后镜检，结果为革兰阳性短链球菌。E菌在血琼脂平板上可见灰白色、边缘整齐、表面光滑的菌落，直径为2～3 mm；在麦康凯琼脂培养基上可见红色菌落，经革兰染色后镜检，结果为革兰阴性短杆菌。

每份样品中所得到菌株种类和数量亦不同，（见表1），其中链球菌检出率最高，多杀性巴氏杆菌次之，副猪嗜血杆菌最少。说明丹东地区猪的细菌性呼吸系统疾病较为普遍，以链球菌病为主，猪传染性胸膜肺炎和猪肺疫，并有混合感染现象。

2.2细菌生化试验生化试验结果如下：A菌能分解葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露糖和乳糖，产酸不产气；产生硫化氢，M.R.试验和V-P试验为阴性；尿素酶试验、硝酸盐还原试验和鸟氨酸脱羧酶试验为阳性、cAMP试验为阴性，判断此菌为多杀性巴氏杆菌。B菌能发酵多种糖类，产生硫化氢，不分解尿素，M.R.试验、V-P试验、硝酸盐还原试验、鸟氨酸脱羧酶试验、cAMP试验均为阳性，判断此菌为猪胸膜肺炎放线杆菌。C菌能分解葡萄糖、麦芽糖，不产生硫化氢，M.R.试验、V-P试验和鸟氨酸脱羧酶试验为阴性；尿素酶试验、硝酸盐还原试验、cAMP试验为阳性，判断此菌为副猪嗜血杆菌。D菌能分解葡萄糖，产酸不产气，不产生硫化氢，M.R.试验和尿素酶试验为阳性；V-P试验、鸟氨酸脱羧酶试验、硝酸盐还原试验和cAMP试验为阴性；判断此菌为链球菌。E菌能分解葡萄糖、果糖、麦芽糖等多种糖类，产酸产气；吲哚试验和M.R.试验为阳性；V-P试验和柠檬酸盐利用试验为阴性，判断此菌为大肠杆菌。

1.4.1分离纯化无菌采取病料于鲜血琼脂平板、TSA平板、巧克力平板、麦康凯琼脂上划线分离，37℃有氧条件培养24～48 h，挑取可疑菌落进行染色并纯化培养，证实为纯培养物。

表1屠宰生猪肺脏细菌分离结果

3讨论

本次试验主要对丹东地区某屠宰场生猪50份病变肺脏进行了细菌的分离和鉴定，分离得到多杀性巴氏杆菌16株，占致病菌总数的25%；胸膜肺炎放线杆菌14株占致病菌总数的22%；副猪嗜血杆菌7株，占致病菌总数的11%；链球菌21株，占致病菌总数的33%；大肠杆菌6株，占致病菌总数的9%；说明丹东地区猪的细菌性呼吸系统疾病较为普遍，以链球菌病为主，猪传染性胸膜肺炎和猪肺疫，并有混合感染现象，甚至有两种以上细菌混合感染。引起肺脏发生疾病的主要病原微生物有细菌、病毒、支原体、寄生虫等。其中细菌主要有猪胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌、猪链球菌以及致病性大肠杆菌等，它们分别引起猪传染性胸膜肺炎、猪肺疫、副猪嗜血杆菌病和猪链球菌病等。

丹东地区猪的呼吸系统疾病发病率较高，且主要集中在春季，通过对丹东地区2个屠宰场12个猪群的2 326头生猪的肺脏进检验，发现每个猪群的生猪肺脏都有不同程度的病变，但类型和程度上有明显的差异。共发现病变肺脏1 024例，占总数的44%，病变类型主要有肺炎，出血，淤血，水肿，气肿和混合感染等，其中肺炎的发生率最高，出血淤血次之。

呼吸系统疾病是规模化猪场的重要高发传染病，严重影响猪群健康和饲料利用率，因此对呼吸系统疾病的控制仍是规模化猪场的主要工作。饲养管理低下、疫苗免疫失败、诊疗处置不当、敏感药物选择不正确，甚至乱用抗生素是导致发病率、病死率进一步升高，病程加长的重要因素［1］。

本试验主要对病料进行细菌学检测，对于病毒和支原体，寄生虫等病原体没有进一步分离鉴定。因此虽然引起肺脏病变可能不仅仅是试验所分离到的细菌，亦有由病毒或者支原体导致的呼吸系统疾病的可能性，这有待进一步研究确认。

S852.61

B

0529-6005（2016）08-0097-01

2016-03-02

辽东学院校级基金（2014F16）

陆秀玉（1975-），女，讲师，本科，从事基础与预防兽医研究，E-mail：shenlu-2000@126.com