两种方法检测超敏C反应蛋白诊断2型糖尿病患者颈动脉内中膜厚度的价值

李娟红，赵子贤，曾凤群，利雯秀，陈世豪，叶青云，李敬红(南方医科大学附属新会医院检验科、输血科、内分泌科，广东江门5900)

·论著·

两种方法检测超敏C反应蛋白诊断2型糖尿病患者颈动脉内中膜厚度的价值

李娟红1，赵子贤2，曾凤群1，利雯秀1，陈世豪1，叶青云1，李敬红3
(南方医科大学附属新会医院检验科1、输血科2、内分泌科3，广东江门529100)

目的探讨两种方法检测超敏C反应蛋白(hs-CRP)对2型糖尿病(T2DM)患者颈动脉内中膜厚度（IMT）增加的诊断价值。方法选择2013年4月至2015年4月我院收治的84例T2DM患者，以彩色多普勒超声诊断仪检查患者颈动脉的结果为标准，按IMT＜0.9mm和IMT≥0.9mm分成颈动脉正常组40例和颈动脉增厚组44例。同期另选42例健康查体者为正常对照组，分别采用乳胶增强免疫散射比浊法和颗粒增强免疫透射比浊法检测所有受检者的全血hs-CRP和血清hs-CRP的水平，用受试者工作特征(ROC)曲线评价两种方法检测hs-CRP对T2DM患者IMT增加的诊断效能。另用总胆固醇(TC)联合全血hs-CRP检测评价对T2DM患者IMT增加的诊断效能。结果两种方法显示IMT增厚组的全血[(4.78±1.04)mg/L]和血清hs-CRP水平[(4.43±0.95)mg/L]均高于IMT正常组[(1.85±0.78)mg/L和(1.70±0.89)mg/L]和正常对照组[(0.98±0.67)mg/L和(0.87±0.59)mg/L]，差异均有统计学意义(P＜0.05)。用ROC曲线分析得全血hs-CRP的诊断灵敏度(76.2%)较高，而特异性(47.1%)较低，曲线下面积为0.612，而颗粒增强免疫透射比浊法检测血清hs-CRP的诊断灵敏度(69.0%)较低，特异性(52.9%)较高，曲线下面积为0.596；全血hs-CRP联合总胆固醇(TC)诊断的灵敏度(83.3%)和特异性(64.7%)，曲线下面积为0.732，均高于hs-CRP单项指标诊断效能。结论T2DM患者IMT增加时，血液中hs-CRP水平升高；乳胶增强免疫散射比浊法检测hs-CRP对T2DM患者IMT增加的诊断效能优于颗粒增强免疫透射比浊法；全血hs-CRP联合TC检测能提高对T2DM患者IMT增加的诊断灵敏度和特异性。

乳胶增强免疫散射比浊法；颗粒增强免疫透射比浊法；2型糖尿病；超敏C反应蛋白；颈动脉内中膜厚度；总胆固醇；诊断

随着人们生活条件和环境的改善，2型糖尿病(type 2 diabetesmellitus，T2DM)的发病率呈逐年上升趋势，而糖尿病大血管病变是T2DM患者的主要死因。它发病机制复杂，目前认为动脉粥样硬化和慢性炎症是其病理基础，用超声诊断技术检查颈动脉内中膜厚度(IMT)增厚是反映T2DM患者颈动脉粥样硬化的重要指标。超敏C反应蛋白(hs-CRP)是常见炎症标志物之一，有研究表明hs-CRP水平的升高能反映颈动脉粥样硬化的形成[1-2]。然而hs-CRP检测方法较多，乳胶增强免疫散射比浊法和颗粒增强免疫透射比浊法因存在不同的影响因素从而导致检测结果存在差异。本文旨在比较该两种方法检测患者血液中的hs-CRP水平，评价其检验hs-CRP对T2DM患者IMT增加的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取本院内分泌科2013年4月至2015年4月收治的T2DM患者84例，所有患者均符合1999年世界卫生组织2型糖尿病的诊断标准。根据病史排除恶性肿瘤患者、免疫系统疾病、感染性疾病、结缔组织疾病。其中男性49例，女性35例，平均病程(4.90±5.23)年。以彩色多普勒超声诊断仪检测所有患者双侧颈动脉，并根据IMT大小分为颈动脉正常组(IMT＜0.9 mm)40例和颈动脉增厚组(IMT≥0.9mm)44例，另选择42例年龄、性别、体质量相符的健康查体者为正常对照组进行比较。

1.2 观察指标与检测方法采集受试者早晨空腹肘静脉血，EDTA-K2抗凝管分别用于全血hs-CRP和糖化血红蛋白(HbA1c)测试，促凝管分离获取血清，分别检测血清hs-CRP、空腹血糖(FPG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)。全血hs-CRP采用乳胶增强免疫散射比浊法检测(禾柏生物技术公司生产的HP-083/4型检测仪)，HbA1c采用亲和层析-高效液相色谱法检测(美国Primus PDQ PLUS全自动糖化血红蛋白分析仪)，用全自动生化分析仪COBAS 6000(德国Roche公司生产)检测血清hs-CRP(采用颗粒增强免疫透射比浊法)、TC、TG。各仪器使用对应配套的试剂、校准品和质控品，各项目符合室内质控和室间质控要求。用彩色多普勒超声诊断仪(GE LOQIG 500)以6.0～11.0MHz的探头频率，测量受试者IMT，即颈总动脉后壁内膜表面与外膜分界线的距离，以IMT＜0.9mm归入颈动脉厚度正常组，IMT≥0.9mm归入颈动脉增厚度。

1.3 统计学方法应用SPSS17.0统计软件包进行数据分析，计量资料均数±标准差±s)表示，多组间均数比较采用单因素方差分析，两两差异比较采用NK法，以P＜0.05为检验水平。制作ROC曲线，分别计算曲线下面积AUC(area under ROC curve)，探讨最佳诊断点即约登指数最大时的Cut-off值及相应的灵敏度和特异性，对两种方法检测hs-CRP在2型糖尿病患者颈动脉内中膜厚度增加的诊断效能进行评价。

2 结果

2.1 三组受检者一般临床资料及血液学指标比较T2DM患者IMT正常组和IMT增厚组血液学指标中，FPG、HbA1c、TG与正常对照组比较，均明显升高，差异均有统计学意义(P＜0.05)。IMT正常组与正常对照组比较，TC、IMT、全血hs-CRP、血清hs-CRP水平差异均无统计学意义(P＞0.05)。IMT增厚组与正常对照组比较，TC、IMT、全血hs-CRP、血清hs-CRP水平均明显升高，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 三组患者的一般临床资料及血液学指标比较(±s)

表1 三组患者的一般临床资料及血液学指标比较(±s)

注：与正常对照组比较，a P＜0.05；与IMT正常组比较，b P＜0.05；“-”表示无此数据。

项目F/χ2值P值男性(%)病程(年) BM I(kg/m2) FPG(mmol/L) HbA1c(%) TG(mmol/L) TC(mmol/L) IMT(mm)全血hS-CRP(mg/L)血清hS-CRP(mg/L) IMT正常组(n=40) 54.41 4.92±5.35 24.37±1.80 9.51±2.98a 8.59±2.14a 2.30±2.11a 4.35±1.01 0.67±0.13 1.85±0.78 1.70±0.89 IMT增厚组(n=44) 55.18 4.87±5.11 23.84±1.79 9.72±4.12a 8.91±2.61a 2.58±2.09a 5.13±1.11ab 1.34±0.35ab 4.78±1.04ab 4.43±0.95ab正常对照组(n=42) 53.21 -24.12±1.83 5.12±0.34 5.28±0.47 1.49±0.51 4.18±0.48 0.62±0.12 0.98±0.67 0.87±0.59 0.512 0.852 0.813 4.385 5.863 4.452 4.012 4.526 10.211 8.514 0.731 0.462 0.485 0.027 0.019 0.026 0.033 0.025 0.011 0.018

2.2 ROC曲线下两种方法检测hs-CRP对T2DM患者IMT增加的诊断效能比较在ROC曲线下得到的面积(AUC)是反映诊断效能的指标，AUC越靠近1，表明诊断效能越好。乳胶增强免疫散射比浊法检测全血hs-CRP的AUC为0.612(见图1)，大于颗粒增强免疫透射比浊法检测血清hs-CRP的AUC(0.596)(见图2)。当约登指数为最大值时所对应的hs-CRP水平作为最佳诊断点，乳胶增强免疫散射比浊法检测全血hs-CRP的最佳诊断点为4.78，敏感度为76.2%，特异度为47.1%，而颗粒增强免疫透射比浊法检测血清hs-CRP的最佳诊断点为4.43，敏感度为69.0%，特异度为52.9%。结果显示，乳胶增强免疫散射比浊法检测全血hs-CRP对T2DM患者IMT增加的诊断效能优于颗粒增强免疫透射比浊法，见表2。

图1 乳胶增强免疫散射比浊法检测全血hs-CRP对T2DM患者颈动脉内中膜厚度增加诊断的ROC曲线

图2 颗粒增强免疫透射比浊法检测血清hs-CRP对T2DM患者颈动脉内中膜厚度增加诊断的ROC曲线

表2 两种方法检测hs-CRP对T2DM患者颈动脉内中膜厚度增加诊断的效能比较

2.3 ROC曲线下全血hs-CRP联合TC检测对T2DM患者IMT增加的诊断效能评价全血hs-CRP联合TC检测对T2DM患者IMT增加诊断的ROC曲线AUC为0.732(见图3)，敏感度为83.3%，特异度为64.7%，95%可信区间为0.582～0.883，均高于hs-CRP单项检测指标的诊断效能。

图3 全血hs-CRP联合TC用于T2DM患者颈动脉内中膜厚度增加诊断的ROC曲线

3 讨论

目前研究认为T2DM和动脉粥样硬化属于系统性慢性炎症反应[3]。炎症反应介质在介导糖脂蛋白质代谢和胰岛素抵抗中起到至关重要的作用。超敏C反应蛋白是反映炎症最为敏感的指标蛋白之一，它可激活补体途径等多种免疫或炎症反应机理从而损害动脉内膜，促进动脉粥样硬化的形成[4]；颈动脉内中膜厚度(IMT)增加是公认反映体内动脉粥样硬化程度的指标[5]。本文分析T2DM患者IMT正常组、IMT增厚组和正常对照组血液中hs-CRP水平结果显示，IMT增厚组血液中hs-CRP水平均高于IMT正常组和正常对照组，差异有统计学意义，提示hs-CRP水平可反映T2DM患者IMT的变化情况。李宗锋等[6]研究发现，老年T2DM患者颈动脉斑块组中hs-CRP水平高于正常对照组和内膜增厚组，hs-CRP和IMT呈正相关。我们可通过检测T2DM患者体内hs-CRP水平来预测和评估IMT增加的情况，本研究利用在ROC曲线下，评价乳胶增强免疫散射比浊法和颗粒增强免疫透射比浊法检测hs-CRP对T2DM患者IMT增加的诊断效能。

结果显示，乳胶增强免疫散射比浊法稍优于颗粒增强免疫透射比浊法。从方法学原理上分析两者有所不同：hs-CRP的检测是用CRP抗体连接微小(约1µL)的乳胶或颗粒后，在液相介质中与相应抗原(CRP)结合，产生浊度或散射光的变化从而检测抗原含量[7]；散射比浊法是某固定波长的光束沿水平方向照射，通过液体遇到抗原抗体复合物颗粒时，光线被其颗粒折射发生偏转，偏转的角度变化和发射光的波长与抗原抗体复合物的颗粒大小与数量成正比；透射比浊法是检测光束通过液体中抗原抗体复合物颗粒后到达探测器而未被吸收或散射的光束量，光通量与抗原含量成反比[8]。在低浓度时其浊度的变化对光束通量的透过影响不足够大，从而相对降低颗粒增强免疫透射比浊法的灵敏度，这与文献[9-10]报道相符。在抗原高浓度时，颗粒增强免疫透射比浊法存在钩状效应使结果偏低。乳胶增强免疫散射比浊法检测时，仪器上有探测抗原是否过量的检测系统，更能提高对样本检测的准确性和重复性。但刚等[11]认为，在抗原低浓度和高浓度时，免疫散射比浊法比免疫透射比浊法更能获得较为准确的结果。

两种方法的ROC曲线下AUC均小于0.8，说明单项检测hs-CRP对T2DM患者IMT增加的诊断效能不理想，可能与T2DM患者IMT增加的复杂致病机制有关。全血hs-CRP联合TC检测对T2DM患者IMT增加诊断的ROC曲线AUC为0.732，敏感性为83.3%，特异度为64.7%，均高于hs-CRP单项检测指标的诊断效能。大量研究表明，血液中TC水平与心肌梗死、脑梗死等大动脉血管事件密切相关[12-13]，且TC是导致动脉粥样硬化的重要因素。hs-CRP联合TC检测更有利于对T2DM患者IMT增加的预测和诊断。

综上所述，T2DM患者IMT增厚时血液中hs-CRP水平升高，用乳胶增强免疫散射比浊法检测hs-CRP比用颗粒增强免疫透射比浊法有更高的诊断效能；全血hs-CRP联合TC检测对诊断T2DM患者IMT增厚有更好的灵敏度和特异性，能增强临床对患者病情发展的预测和诊断能力。

[1]卢薇,王青,李海英.2型糖尿病患者血清胱抑素-C、超敏C反应蛋白与颈动脉内中膜厚度的相关性[J].重庆医学,2014,43(24)∶3160-3162.

[2]黄漓莉,苏珂,于健,等.2型糖尿病患者大血管病变与Hcy、CysC、hs-CRP的关系[J].广东医学,2015,36(10)∶1518-1520.

[3]Gach O,Pierard L,Leqrand V.Inflammation and atherosclerosis∶state of the art in 2004-2005[J].Rev Med Liege,2005,60(4)∶235-241.

[4]Bovet P,Rossi I.Serum C-reactive protein and carotid intimamedia thickness[J].Int JCardiol,2012,157(1)∶143-144.

[5]谭安隽,李天荣,李红.老年2型糖尿病、糖耐量减低患者CRP、TNF-α与颈动脉粥样硬化及胰岛素抵抗的相关性[J].中国老年学杂志,2015,37(14)∶3878-3880.

[6]李宗锋,张晶.老年2型糖尿病患者血浆NGAL、Hcy及hs-CRP与颈动脉内中膜厚度的相关性[J].山东医药,2015,55(26)∶60-61.

[7]焦瑞宝,唐吉斌,陈然,等.全血超敏C反应蛋白与血清C反应蛋白的相关性分析[J].国际检验医学杂志,2011,32(4)∶528.

[8]张倩,周敬静,徐华.免疫透射比浊法与免疫散射比浊法检测特定蛋白的比较[J].国际检验医学杂志,2012,33(20)∶2530-2531.

[9]陈世佳.透射比浊法和散射比浊法检测RF的结果比较[J].淮海医药,2009,27(6)∶484-485.

[10]段玉东,桑俊军,闫海鹏,等.散射比浊法和透射比浊法测定血浆免疫蛋白的比较[J].中国医药导报,2008,5(2)∶97.

[11]但刚,胡宗海,李同心.免疫透射和免疫散射比浊法测定血清免疫球蛋白及补体的比较[J].西南国防医药,2008,18(5)∶659-661.

[12]Okamura T,Tanaka H,M iyamatsu N,etal.The relationship between serum total cholesterol and all-cause or cause-specificmortality in a 17.3-year study of a Japanese cohort[J].Atherosclerosis,2007,190 (1)∶216-223.

[13]Cui R,Iso H,Toyoshima H,et al.Serum total cholesterol levels and risk ofmortality from stroke and coronary heart disease in Japanese∶the JACC study[J].Atherosclerosis,2007,194(2)∶415-420.

Diagnostic value of hs-CRP detected by two assays in determ ining carotid intima-media thickness of patients w ith type 2 diabetesmellitus.

LIJuan-hong1,ZHAO Zi-xian2,ZENGFeng-qun1,LIWen-xiu1,CHEN Shi-hao1,YE Qing-yun1,LIJing-hong3.Departmentof Laboratory1,Departmentof Blood Transfusion2,Departmentof Endocrinology3, XinhuiHospital Afiliated to Southern MedicalUniversity,Jiangmen 529100,Guangdong,CHINA

Objective To evaluate the value of hypersensitive C-reaction protein(hs-CRP)detected by two assays in diagnosing increased carotid intima-media thickness(IMT)of patientsw ith type2 diabetesmellitus.M ethods With the findingsof cervical vascular color Doppler ultrasound exam ination as standard,84 patientsw ith T2DM,who adm itted to ourhospital from April2013 to April2015,were chosen and divided into thenormal IMT group(n=40,IMT＜0.9mm)and the IMT increased group(n=44,IMT≥0.9mm)according to the IMT level.At the same time,42 healthy peoplewere chosen as the control group.Thewhole blood and serum concentration of hs-CRP in the patients of normal IMT group,IMT increased group and control group were detected by latex-enhanced immunonephelometry method and partied-enhanced turbidimetric immunoassay respectively.The application value of the two assays in the diagnosisof patientsof type 2 diabetesmellitusw ith increased carotid intima-media thicknesswas evaluated by the receiver operating characteristic(ROC) curve.In addition,the total cholesterol combined w ith hs-CRPwere detected to evaluate the application value of the diagnosis of patients of type 2 diabetesmellitus w ith increased carotid intima-media thickness.Results The two assays showed that the levelof hs-CRP in whole blood and serum of IMT increased group[(4.78±1.04)mg/L,(4.43±0.95)mg/L, respectively]were significantly higher than those of thenormal IMT group[(1.85±0.78)mg/L,(1.70±0.89)mg/L,respectively]and the healthy control[(0.98±0.67)mg/L and(0.87±0.59)mg/L](P＜0.05).The ROC curve analysis showed that the latex-enhanced immunonephelometrymethod had higher sensitivity(76.2%)and lower specificity(47.1%),w ith the areas under ROC curve for 0.612;the partied-enhanced turbidmetric method had lower sensitivity(69.0%)and higher specificity(52.9%),w ith the areas under ROC curve for 0.596.Compared to the single index test,the sensitivity of hs-CRP and total cholesterol combination detection had higher sensitivity(83.3%)and higher specificity(64.7%),w ith the areas under ROC curve for 0.732.Conclusion The blood hs-CRP level rises w ith the increase of IMT in the patients w ith T2DM.The latex-enhanced immunonephelometry method is better than the partied-enhanced turbidimetric immunoassaymethod in the diagnostic performance of increased carotid intima-media thickness of T2DM.The combination detection of hs-CRPand total cholesterolcan improve the diagnostic sensitivity and specificity.

Latex-enhanced immunonephelometrymethod;Partied-enhanced turbidimetric immunoassay;Type 2 diabetesmellitus(T2DM);Hypersensitive C-reaction protein(hs-CRP);Carotid intima-media thickness;Total cholesterol;Diagnosis

R587.1

A

1003—6350（2016）16—2615—04

2016-01-27)

doi∶10.3969/j.issn.1003-6350.2016.16.012

李娟红。E-mail：224047632@qq.com