高效液相色谱法同时测定人参养荣丸中芍药苷、阿魏酸和橙皮苷含量

李鑫，张秀丽

（辽宁省朝阳市药品检验检测所，辽宁朝阳122000）

高效液相色谱法同时测定人参养荣丸中芍药苷、阿魏酸和橙皮苷含量

李鑫，张秀丽

（辽宁省朝阳市药品检验检测所，辽宁朝阳122000）

目的建立同时测定人参养荣丸中芍药苷、阿魏酸、橙皮苷的高效液相色谱法。方法色谱柱为固定相Agilent C18柱（150 mm× 4.6 mm，5 m），流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（等度洗脱），流速1.0 mL/min，柱温30℃，芍药苷、阿魏酸和橙皮苷检测波长为230 nm。结果进样量芍药苷在0.108～2.160 g（r=0.999 6）范围内、阿魏酸在0.014～0.280 g（r=0.999 9）范围内、橙皮苷在0.349～6.980 g（r=0.999 9）范围内与峰面积呈良好线性关系，加样回收率分别为98.86%，97.35%和98.72%，RSD分别为0.62%，1.16%和1.02%（n=6）。结论该法简便稳定，准确度可靠，可用于人参养荣丸的质量控制。

高效液相色谱法；人参养荣丸；芍药苷；阿魏酸；橙皮苷

人参养荣丸是由人参、土白术、茯苓、炙甘草、当归、熟地黄、白芍（麸炒）、炙黄芪、陈皮、制远志、肉桂、五味子（酒蒸）等12味中药经粉碎成细粉加炼蜜制得的小蜜丸或大蜜丸，具有温补气血的功效，主要用于气血两亏、形瘦神疲、食少便溏、病后虚弱等症。目前市场所售人参养荣丸成方制剂品种规格多样，但相关质量控制研究文献较少，其中多数只采用了某单味饮片的成分定量测定作为质控指标，质控指标稍显单一，且2015年版《中国药典（一部）》人参养荣丸项下仅进行了橙皮苷测定，专属性差，难以全面评估其质量优劣。本研究中旨在建立能同时测定人参养荣丸中多种成分的高效液相色谱法［1-6］，现报道如下。

1　仪器与试药

1.1仪器

LC-2010A HT型高效液相色谱仪（日本岛津公司，包括紫外检测器、自动进样器、二元泵、岛津LCSolution色谱工作站）；CPA225D型分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；BSA224S-CW型分析天平（赛多利斯科学仪器有限公司）；9860A型超声波清洗机（天津市科贝尔光电技术有限公司）。

1.2试药

人参养荣丸（石家庄万和制药有限公司，批号为20140301，20140501，20140601）；芍药苷对照品（批号为110736-201438），阿魏酸对照品（批号为110773-201313），橙皮苷对照品（批号为110721-201014）均购于中国食品药品检定研究院；乙腈（色谱纯，西格玛奥德里奇上海贸易有限公司）；甲醇（色谱纯，西格玛奥德里奇上海贸易有限公司）；磷酸（分析纯，批号20110505，天津永大化学试剂有限公司）；水为重蒸馏水。

2　方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Agilent C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B，14∶86）；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃；进样量：15 μL；检测波长：230 nm。在此条件下，色谱图见图1。

2.2溶液制备

对照品溶液：取芍药苷、阿魏酸、橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成质量浓度分别为0.108，0.014，0.349 g/L的混合溶液，即得。

供试品溶液：取样品适量，剪碎，取约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL，密塞，称定质量，超声处理（功率250 W，频率33 kHz）1 h，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液：按2015年版《中国药典（一部）》中人参养荣丸的制法制备缺少白芍、当归、陈皮的大蜜丸，依法制备阴性样品，同供试品溶液制备方法制备溶液，即得。

2.3方法学考察

线性关系考察：分别精密吸取对照品溶液1，2，5，10，15，20 μL进样测定，记录峰面积，以峰面积（Y）为纵坐标、对照品进样量（X）为横坐标绘制标准曲线，建立回归方程。结果见表1。

精密度试验：精密吸取同一对照品溶液15 μL，重复进样6次，测定峰面积。结果芍药苷、阿魏酸、橙皮苷色谱峰峰面积的RSD分别为0.1%，0.1%，0.1%（n=6），表明仪器精密度良好。

图1　高效液相色谱图

表1　各对照品回归方程、相关系数及线性范围

重复性试验：取同一样品，按2.2项下供试品溶液制备方法平行制备6份溶液，精密吸取15 μL进样2次，测定峰面积。结果芍药苷、阿魏酸、橙皮苷色谱峰峰面积的RSD分别为1.5%，1.3%，1.6%（n=6），表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，室温放置，分别于0，2，4，6，8，12，24 h时精密吸取15 μL样进，测定峰面积。芍药苷，阿魏酸，橙皮苷色谱峰峰面积的RSD分别为0.2%，0.4%，0.2%（n=7），表明供试品溶液室温放24 h内稳定。

加样回收试验：取已知含量的人参养荣丸样品1 g，精密称定，共6份。每份样品分别精密加入质量浓度为0.306 g/L的芍药苷对照品溶液2 mL，0.085 g/L的阿魏酸对照品溶液1 mL，0.963 g/L的橙皮苷对照品溶液2 mL，按2.2项下方法制备供试品溶液，精密吸取15 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，计算回收率。结果见表2。

2.4样品含量测定

取3个批号的样品，按2.2项下供试品溶液制备方法制备溶液，按拟订色谱条件测定本品中芍药苷、阿魏酸和橙皮苷的含量。结果见表3。

3　讨论

3.1检测波长选择

色谱条件筛选时曾用双波长测定芍药苷、橙皮苷、阿魏酸，以230 nm和321 nm作为检测波长，发现阿魏酸在230 nm波长处与321 nm波长处峰面积相差不大，分离效果良好，能达到HPLC法含量测定要求，而芍药苷与橙皮苷在230 nm波长处有最大吸收［7］，故确定230 nm为检测波长。

3.2流动相选择

相关文献［8-11］多采用梯度洗脱方式，本试验中以乙腈-0.1%磷酸（20∶80）、乙腈-0.1%磷酸（14∶86）和乙腈-0.1%磷酸（10∶90）为流动相等度洗脱，结果表明所检测的色谱峰分离度好，基线稳定，出峰时间较合理，可为部分不具备四元梯度泵检测设备的企业提供便利，故确定流动相为乙腈-0.1%磷酸（14∶86）。

3.3提取方法及溶剂选择

考察了浸渍法、回流法和超声提取法，结果浸渍法效率低，回流法和超声法提取效率相差不大，但超声提取法操作简便，故选择超声提取方法。考察了60%甲醇、甲醇和乙醇作为提取溶剂，结果甲醇提取效果好，杂质较少；考察了超声提取30，45，60，90 min，发现超声处理60 min与90 min所测得的峰面积值相差不大，故确定以甲醇为溶剂，超声处理60 min［12-16］。

表2　加样回收试验结果（n=6）

表3　样品含量测定结果（±s，mg/g，n=3）

表3　样品含量测定结果（±s，mg/g，n=3）

批号2 0 1 4 0 3 0 1 2 0 1 4 0 5 0 1 2 0 1 4 0 6 0 1芍药苷1 . 2 2 5 0 ± 0 . 0 0 6 1 . 2 0 9 4 ± 0 . 0 0 4 1 . 1 8 0 9 ± 0 . 0 0 7阿魏酸0 . 1 7 0 2 ± 0 . 0 0 2 0 . 1 7 8 4 ± 0 . 0 0 1 0 . 1 6 9 5 ± 0 . 0 0 1橙皮苷3 . 8 4 9 6 ± 0 . 0 1 2 3 . 7 2 7 1 ± 0 . 0 0 8 3 . 6 6 1 0 ± 0 . 0 1 0

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：105，133，466.

［2］李捷玮，金柔男，李翔，等.多种中成药中芍药苷的含量测定［J］.药物分析杂志，2009，29（9）：1 440-1 443.

［3］李丽娇，张元桐，陈晓霞.HPLC法测定人参养荣丸中桂皮醛含量［J］.辽宁中医药大学学报，2009，11（6）：230-231.

［4］麦艳珍，程怡，张素方，等.HPLC法测定人参养荣丸中人参皂苷Rb1的含量［J］.长春中医药大学学报，2012，28（1）：156-157.

［5］李中娥，王春颖.HPLC同时测定妇康片中芍药苷和阿魏酸的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（10）：143-146.

［6］吕海涛，王艳丽，王英芹.当归提取液中阿魏酸稳定性研究［J］.中成药，2008，30（10）：1 555-1 557.

［7］张琳琳，祁峰，卞海林.HPLC法测定通气合剂中芍药苷和橙皮苷的含量［J］.现代中西医结合杂志，2012，21（36）：4 092-4 093.

［8］陈四平，王英峰.高效液相色谱法测定健行颗粒中芍药苷的含量［J］.中成药，2008，30（7）：33-35.

［9］季宁平，徐晓秋，傅超美，等.HPLC法同时测定艾附暖宫丸中芍药苷、阿魏酸和川续断皂苷Ⅵ［J］.中成药，2015，37（3）：534-537.

［10］马向东.HPLC法测定八珍益母丸中芍药苷和阿魏酸的含量［J］.中国药物评价，2014，31（4）：193-195.

［11］倪文澎，钱平，周琴妹，等.RP-HPLC法同时测定养生丸重中芍药苷和阿魏酸的含量［J］.中国药师，2010，13（8）：1 114-1 116.

［12］林隽丹.HPLC法测定芩连片中芍药苷的含量［J］.海峡药学，2007，19（10）：45-46.

［13］马冰，王晶，刘春明，等.不同提取方法对赤芍中芍药苷含量影响的高效液相色谱法对比研究［J］.时珍国医国药，2013，13（8）：1 820-1 822.

［14］梁惠珍，李霞，门九章，等.高效液相色谱法测定雄芍颗粒中芍药苷的含量［J］.山西中医，2014，30（9）：48-49.

［15］孟令丹，陈晓辉，姚燕，等.RP-HPLC法同时测定四物合剂中中芍药苷和阿魏酸的含量［J］.药物分析杂志，2006，26（10）：1 398-1 400.

［16］王健，范文成，叶晓红，等.HPLC测定妇康片中阿魏酸的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2008，14（8）：15-16.

Simultaneous Content Determination of Paeoniflorin，Ferulic Acid and Hesperidin in Renshen YangRong Pills by HPLC

Li Xin，Zhang Xiuli
（Chaoyang Drug Inspection and Testing Institute，Chaoyang，Liaoning，China122000）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the simultaneous content determination of paeoniflorin，ferulic acid and hesperidin in Reshen YangRong Pills.MethodsThe chromatographic separation of methanolic extract of ReShen YangRong Pills was performed on Global-C18column（150 mm×4.6 mm，5 μm）in a gradient elution using a mixture of acetonitrile and 0.1%phosphoric as mobile phase.The flow rate was 1.0 mL/min and the column temperature was maintained at 30℃.The detection wavelength of paeoniflorin，ferulic acid and hesperidin was set up at 230 nm.ResultsThe linear range was 0.108-2.160 μg（r=0.999 6）for paeoniflorin，0.014-0.280 μg（r=0.999 9）for ferulic acid and 0.349-6.980 μg（r=0.999 9）for hesperidin.The average recoveries were 98.86%for paeoniflorin withRSD=0.62%（n=6），97.35%for ferulic acid withRSD=1.16%（n=6），and 98.72%for hesperidin with 1.02%（n=6），respectively.ConclusionThe method is simple and convenient，reliable and accurate，it can be utilized as a quality control method for ReShen YangRong Pills.

HPLC；Renshen YangRong Pills；paeoniflorin；ferulic acid；hesperidin

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2016）17-0068-03

李鑫（1985-），男，硕士研究生，主管中药师，研究方向为中药鉴定及检验，（电子信箱）lixin850801@126.com。

（2016-02-10；

2016-05-14）