生精胶囊对精子DNA和顶体完整率及体外受精结局影响*

何泳志，李大文，肖　鑫，龚国通

(广西壮族自治区人民医院生殖医学与遗传中心,南宁 530021)



·经验交流·doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.26.027

生精胶囊对精子DNA和顶体完整率及体外受精结局影响*

何泳志，李大文△，肖鑫，龚国通

(广西壮族自治区人民医院生殖医学与遗传中心,南宁 530021)

目的临床观察生精胶囊对少弱精子症患者精子DNA完整率(DFI)、精子顶体完整率及行体外受精结局的影响。方法选取2014年1月至2014年10月来该中心门诊就诊的300例少弱精子症患者，口服生精胶囊进行治疗3个月(试验组)200例、未口服生精胶囊100例(对照组)。结果(1)3个月后试验组精子顶体完整率及精子DNA完整率高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；试验组患者服用生精胶囊后前向运动精子数、精子顶体完整率、精子DNA完整率显著优于用药前，差异有统计学意义(P<0.05)。(2)试验组受精率及优胚率高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；两组患者卵裂率差异无统计学意义(P>0.05)；对照组精子正常患者的受精率、优胚率高于弱精症患者，差异有统计学意义(P<0.05)；试验组行IVF的临床妊娠率高于对照组(58.4%vs. 42.9%)，差异有统计学意义(P<0.05)。结论生精胶囊可以有效提高精子顶体及精子DNA完整率,有利于提高IVF的受精率、优胚率及临床妊娠率。

生精胶囊；体外受精；精子DNA完整率；精子顶体完整率

不孕不育症发病率占育龄夫妇的8%～10%，是值得关注的社会人群和生殖健康的重要事件[1]。其中由男方因素引起不孕不育约占40%，并有逐年上升趋势。大量研究表明少精、弱精、顶体不完整及高水平的DFI是男性不育症的重要因素。近年来，许多生殖工作者应用中医中药治疗男性不育症取得了较好的疗效。值得一提的是，生精胶囊的广泛应用更是为广大不育患者带来了福音。本研究旨在探讨生精胶囊对不育症患者精子顶体完整率、DFI及行体外受精结局的影响。

1　资料与方法

1.1一般资料回顾分析2014年1月至2014年10月来本中心就诊的300例少弱精子症患者，将其分为两组：口服生精胶囊(遵义廖元和堂药业有限公司)治疗200例(试验组，未行其他治疗)，服药方法：4粒，每日3次，口服，疗程为3个月。未口服生精胶囊的患者100例(对照组，未行其他治疗)。入选患者女方基础性激素检查及B超示卵巢功能正常，输卵管造影示女方输卵管正常。纳入研究的男性不育患者两次以上精液检查前向运动精子总数为(5～10)×106(男性因素行体外受精的指标)。3个月后两组患者均行体外受精-胚胎移植助孕。

1.2方法

1.2.1精子的收集 男方禁欲2～7 d，在室温25～35 ℃下，手淫取精液于干燥消毒量杯内，置于37 ℃恒温箱内液化。

1.2.2精液常规 参照《人类精液检查与处理实验室手册》第5版。使用计算机精子辅助分析(CASA)测定精子密度及活力，各项参考值：两次以上精液检查密度(P)≤15×106/mL为少精子症；两次以上精液检查前向运动精子(PR)≤32%或PR+非前向运动精子(NP)≤40%为弱精子症。

1.2.3检测精子DNA断裂率精子DNA 的检测采用精子染色质扩散试验。主要染色试剂为瑞氏-姬姆萨(珠海贝索生物技术有限公司)，普通显微镜观察精子核DNA 碎片的判断标准计数为500 条精子，并观察精子光晕大小。

1.2.4检测顶体完整率PSA-FITC豌豆凝集素(Sigma公司，美国)用异硫氰酸荧光素FITC标记。结果评估：用450～490 nm激发光，于1 000倍油镜下观察涂片。精子分类如下：(1)顶体完整(AI)：精子头部一半以上荧光染色明亮且均匀。(2)已发生顶体反应(AR):精子仅在赤道带出现荧光带，或者顶体区根本没有荧光染色。(3)顶体异常：除上述两类精子外的所以其他精子。

1.2.5促排卵方案 采用促性腺激素激动剂(Diphereline，益普生公司)/促卵泡生成素(Gonal-F，瑞士)或(和)人绝经期促性腺激素(HMG，丽珠制药)/注射用绒促性素(HCG,丽珠药业)长方案超促排卵。自用促性腺激素4 d后开始B超监测卵泡发育;当有2个卵泡直径大于18 mm时，当晚9:00 左右予10 000 U肌内注射，36 h后取卵。

1.2.6体外受精将收集的精液，采用密度梯度离心法加上游法处理，收集高活力的精子，按5×105/mL与卵母细胞混合。受精6 h后去除卵丘细胞，置另一个加有ART-1020培养液的培养皿中，放置到37 ℃、5%CO2培养箱中继续培养。

2　结　果

2.1两组患者一般情况比较两组男性患者年龄、睾酮、FSH、睾丸体积及采卵数均差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

2.2两组患者纳入研究时精子情况比较两组患者前向运动精子数、精子顶体完整率及DFI比较均差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

2.3两组患者3个月精子顶体完整率及DFI情况比较3个月后试验组精子顶体完整率高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；试验组DFI(DFI与精子DNA完整率呈反比)低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表3。对照组中精子正常患者精子顶体完整率及精子DNA完整率显著高于弱精症患者，差异有统计学意义(P<0.05)，见表4。试验组患者服用生精胶囊后前向运动精子总数、精子顶体完整率及精子DNA完整率显著高于用药前，差异有统计学意义(P<0.05)，见表5。

表1　两组患者一般情况比较 ±s)

表2　两组患者纳入研究时精子情况比较 ±s)

2.4两组患者行IVF的情况比较试验组受精率及优胚率高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；两组患者卵裂率差异无统计学意义(P>0.05),见表5。对照组(未服用生精胶囊)精子正常患者的受精率、优胚率明显高于弱精症患者，差异有统计学意义(P<0.05)；精子正常患者与弱精症患者卵裂率差异无统计学意义(P>0.05)，见表4。

表3　两组患者3个月后精子顶体完整率及DFI比较

2.5两组患者行IVF最终结局相比较对照组患者100例，其中2例取消周期，移植周期98个，临床妊娠42个周期，临床妊娠率为42.9%；试验组患者200例，其中3例取消周期，移植周期197个，临床妊娠115个周期，临床妊娠率为58.4%，差异有统计学意义(χ2=4.294，P=0.049)。

表4　对照组弱精及精子正常患者精子顶体、DNA及行IVF的情况比较±s)

表5　试验组患者用药前后精子功能质量的比较±s)

表6　两组患者行IVF的情况比较

3　讨　论

自从1978年第一例试管婴儿诞生以来,辅助生殖技术(ART)在全世界蓬勃发展,给成千上万的不孕患者带来福音。在 ART技术中,体外受精-胚胎移植(IVF-ET)是当今生殖领域里程碑性的ART技术之一,是治疗不孕症的主要方法。但是，现代医学多采取辅助生殖技术，抗感染治疗，营养疗法及激素治疗以增强睾丸的生精功能等方法治疗男性不育症，都存在不同程度的缺陷[2-3]。为此，很多学者应用中医中药来治疗男性不育症。对于男性精液质量低下所致的不孕不育症，应用生精胶囊可有效达到补肾养血益精，调节阴阳平衡的作用，从而提高精子发生、成熟率[4]。生精胶囊组方成分主要有银杏叶、马鞭草、大血藤、杜仲、覆盆子、金樱子、仙茅、淫羊藿；骨碎补、补骨脂、桑葚、何首乌、沙苑子、人参、枸杞子、菟丝子、黄精、冬虫夏草及鹿茸等味药组成。杜仲和银杏叶等具有活血化瘀之效，对生殖系统的供血状况有良好改善作用。菟丝子、鹿茸、淫羊藿等有温补肾阳作用，可有效促进性腺激素与雄性激素样，改善增强生精功能，提高精子活力及密度。诸药并用具有滋阴壮阳，补肾益精之功效。生精胶囊还可以促进性器官发育，提高精子数量及活力，降低精子畸形率的作用。本研究主要观察生精胶囊对精子DNA断裂率、精子顶体完整率及行体外受精结局的临床疗效。

近年来,顶体酶活力及精子膜功能完整性已成为评价精子功能的重要指标，且精子顶体完整率与顶体内酶的含量及活力明显相关。学者发现在常规精液分析结果正常的不明原因不育的男性患者中,有13%的患者精子与透明带结合异常，还有28%患者精子与透明带结合正常，但透明带诱发顶体反应缺陷，对这部分患者如采用IVF治疗，受精率很低甚至完全不受精[5]。现国内已有大量关于使用生精胶囊等治疗少弱精子症的报道[6-8]，但生精胶囊对精子顶体完整率临床疗效的报道却很少。近10年来,顶体指数、顶体完整率和精子DNA完整率均可作为选择行辅助生殖技术的重要依据。本研究发现生精胶囊可以提高精子顶体完整率,且疗效显著。

精子DNA完整率已成为评估男性不育的重要参数之一。有学者认为DFI值是临床妊娠的显著预测因子[9]。国内外研究表明，精子DNA和染色质的损伤与男性不育和女性自然受孕率降低有明显的关联[10-11]。精子DFI与精液参数显著相关，包括精子活力、能动性、形态等[12]。DFI水平增加与男性的年龄有关,它能影响精子能动性；DFI=10%可以被认为是一个评估体外受精妊娠率的关键，但它行IVF优胚率和受精率等无显著相关[13]。有人持不同观点，DFI水平影响常规体外受精的受精率、优胚率及妊娠率[14]。王英俊等[15]通过精子染色质扩散试验，检测精子DNA完整率并观察精子DNA 完整率对辅助生殖结局的影响，发现DFI对预测IVF妊娠结果起作用。Jiang等[16]探讨精子染色质完整性测试的预测价值(SCIT)在辅助生殖技术(ART)的关系，并通过精子染色质完整性(SCI)分析IVF-ET和ICSI技术的结果，发现单精子注射的临床妊娠率显著高于高水平DFI组体外受精妊娠率,高、低DFI组之间在行体外受精或ICSI技术结局没有显著差异。Zhang等[17]进行荟萃分析全面了解和评估精子DNA碎片之间的关系指数(DFI)和体外受精(IVF)或胞浆内精子注射(ICSI)技术治疗妊娠结局，发现DFI对体外受精或ICSI技术结局的预测价值并没有在荟萃分析得到证实，仍需进一步设计研究更好的解决这个问题。本研究发现应用生精胶囊可以有效降低DFI,提高精子DNA完整率。

在小鼠运动实验研究中证明，生精胶囊具有促进性器官发育，促进睾丸细胞增殖，提高生精功能，多方位改善精子质量(精子数量、密度、活力、活率，精子畸形率)，增强精子生育能力作用[18]。生精胶囊中的枸杞子能影响下丘-垂体-性腺轴功能，可增强生殖系统功能，有抗氧化、抗衰老作用；黄芪能改善血液流变各项特性，可提高造血功能，使细胞的生理代谢作用增强，促进核酸、蛋白质的合成，抗氧化，还能增加精子线粒体活性，提高精子ATP含量[19]。故此生精胶囊可能是通过提高患者整体的精子质量，继而也提高了精子顶体完整率和精子DNA完整率。

近30年来，随着对体外受精-胚胎移植技术的不断深入研究，发现其结局与很多因素相关。有学者报道年龄、基础促卵泡生成素值、促性腺激素用量、人绒毛膜促性腺激素日孕酮 /雌二醇值、移植出血量、获卵数、受精率、胚胎累积评分、移植胚胎数是影响体外受精-胚胎移植临床妊娠的重要因素[20]。本研究发现口服生精胶囊可以提高男性不育患者行IVF-ET的受精率、优胚率及临床妊娠率。生精胶囊提高体外受精妊娠率的作用机制可能是：生精胶囊可以有效地提高精液量、精子活力、密度、正常形态百分率、精子DNA完整率及精子顶体完整率，从而提高了行体外受精时的受精率和优质胚胎率，进而提升了临床妊娠率。

[1]刘嘉茵，陈子江．不孕不育症诊断标准的制定[C]//中华医学会第十次全国妇产科学术会议妇科内分泌会场:妇科内分泌学组、绝经学组、计划生育学组论文汇编，2012：2012．

[2]荀建宁，朱闽．生精胶囊治疗少精子不育症的临床研究[J]．中国性科学，2009，18(7)：14-15．

[3]曹跃龄，杨配兰，张琼芬．西药配合生精胶囊治疗男性少精、弱精症60例疗效观察[J]．云南中医中药杂志，2010，31(12)：31-32．

[4]朱德元．精胶囊治疗男性少精、弱精的临床观察及用药体会[J]．当代医学，2011，17(36)：143．

[5]邱卓琳，褚庆军，毛向明，等．不同生精功能障碍无精子症患者行ICSI后胚胎发育潜能的研究[J]．中华男科学杂志，2012，18(5)：432-435．

[6]柳建明，姜辉，洪锴，等．弱精子症大鼠模型的建立及左旋肉碱对其改善作用的相关研究[J]．中国男科学杂志，2010，24(3)：29-32．

[7]季明勇，黄明孔，孟衍建，等．生精胶囊联合左旋肉碱治疗少弱精子症的疗效评价[J]．中华男科学杂志，2011，17(9)：856-858．

[8]巩鸿文，宋宏晗，秦晓芹，等．生精胶囊治疗男性少弱精子症45例临床分析[J]．中国男科学杂志，2011，25(7)：59-60．

[9]Jiang H,He RB,Wang CL,et al.The relationship of sperm DNA fragmentation index with the outcomes of in-vitro fertilisation-embryo transfer and intracytoplasmic sperm injection[J].J Obstet Gynaecol,2011,31(7):636-639.

[10]Giwercman A,Lindstedt L,Larsson M,et al.Sperm chromatin structure assay as an Independent predictor of fertility in vivo:a case-control study[J].Int J Androl,2010,33(1):e221-e227.

[11]韩士广，鄂伟，郭廷超，等．早期自然流产与精子DNA完整率的相关性研究[J]．中国性科学，2010，19(7)：4-5,13．

[12]Chi HJ,Chung DY,Choi SY,et al.Integrity of human sperm DNA assessed by the neutral comet assay and its relationship to semen parameters and clinical outcomes for the IVF-ET program[J].Clin Exp Reprod Med,2011,38(1):10-17.

[13]方力,楼丽君,叶英辉,等.精子DNA碎片率与男性年龄、精子活动力和体外受精结局关系的研究[J].中华医学遗传学杂志,2011,31(4):432-435.

[14]Tandara M,Bajic A,Tandara L,et al.Sperm DNA integrity testing:big halo is a good predictor of embryo quality and pregnancy after conventional IVF[J].Andrology,2014,2(5):678-686.

[15]王英俊，李大文．精子DNA完整率对IVF/ICSI妊娠结局的影响[J]．第三军医大学学报，2012，2(2)：183-185．

[16]蒋欢欢,贺小进,宋兵,等.精子染色质完整性对IVF/ICSI临床结局的预测价值[J].中华男科学杂志,2011,17(12):1083-1086.

[17]Zhang Z,Zhu L,Jiang H,et al.Sperm DNA fragmentation index and pregnancy outcome after IVF or ICSI:a meta-analysis[J].J Assist Reprod Genet,2015,32(1):17-26.

[18]马静，许池军，李仕先，等．生精胶囊补肾壮阳作用的实验研究[J]．中国实验方剂学杂志，2001，7(6)：39-40．

[19]梁培育，李浩勇，肖劲逐，等．添加黄芪注射液对人精子线粒体功能的影响[J]．中国男科学杂志，2004，18(3)：11-13．

[20]罗国群，马文敏，邓伟芬．影响体外受精-胚胎移植临床妊娠因素的分析[J]．中国妇幼健康研究，2007，18(2)：93-95．

广西卫生厅科研课题(Z2014191,Z2011435)；广西医疗卫生适宜技术与开发课题(S201421-03)。作者简介：何泳志(1988-)，在读硕士，主要从事生殖男科专业的研究。△

，E-mail:Lidawendavid@aliyun.com。

R698+.2

B

1671-8348(2016)26-3688-04

2016-02-22

2016-04-26)