散养淮南王土鸡J亚群禽白血病的诊断

王 云，乔宗骏，王国科 ，梁雄燕

（1.长江大学，湖北 荆州 404025；2.重庆市忠县畜牧兽医服务中心马灌镇站，重庆 忠县 404317）

散养淮南王土鸡J亚群禽白血病的诊断

王 云1，乔宗骏2，王国科1，梁雄燕1

（1.长江大学，湖北 荆州 404025；2.重庆市忠县畜牧兽医服务中心马灌镇站，重庆 忠县 404317）

对湖北省某农户散养的12周龄淮南王土鸡病鸡进行剖检，发现病鸡肝脏有白色肿瘤；心肌增厚，有疑似肿瘤赘生物；脾脏萎缩，切面呈暗色。用J亚群禽白血病病毒（ALV-J）特异性引物进行PCR检测，扩增出了约545 bp的条带，病鸡组织内含有ALV-J病毒核酸序列，表明该病例为ALV-J感染。

淮南王土鸡；J亚群禽白血病；PCR检测；诊断

J亚群禽白血病是由禽白血病病毒第10个亚群J亚群禽白血病病毒 （ALV-J）引起的肿瘤性疾病，广泛存在于世界各地鸡群。该病毒是1989年由英国开普敦家禽研究所的Payne首先于肉种鸡中发现的，早期的病例报道主要是针对肉鸡［1］。我国1999年首先在内蒙古自治区发现肉鸡J亚群禽白血病，2002年和2005年分别首次报道海兰褐蛋鸡群和中国地方鸡种J亚群白血病［2-7］。近年来，J亚群禽白血病在我国不断蔓延，呈现出跨区域传播趋势及宿主扩大化现象，首先由肉鸡蔓延到蛋鸡，进而波及我国地方性鸡种，这不仅对我国养鸡业造成了严重的危害，而且也给我国地方鸡群种质资源保护提出了更严峻的挑战［8-9］。

2015年10月湖北省某农户散养的淮南王土鸡，鸡群整体消瘦，明显达不到预期体重标准，12周龄时出现零星死亡。剖检病鸡可见，肝脏有白色肿瘤；心肌增厚，有疑似肿瘤赘生物；脾脏萎缩，切面呈暗色。通过J亚群禽白血病病毒特异性PCR检测确诊为ALV-J感染。

1 材料与方法

1.1 试验材料及处理湖北省某农户散养的淮南王土鸡病鸡。剖检病鸡取具有典型病变的组织，-70℃保存备用。

1.2 主要试剂rTaq DNA聚合酶、dNTP Mixture试剂等PCR试剂为宝生物工程（大连）有限公司产品。DNA提取相关试剂，由笔者所在实验室配制。ALV-J 特异性引物 H5/H7［10］分别位于 pol基因和env基因上，目标片段545 bp，由武汉擎科创新生物科技有限公司合成。

H5：5′-GGATGAGGTGACTAAGAAAG-3′

H7：5′-CGAACCAAAGGTAACACACG-3′

1.3 试验方法

1.3.1 临床观察与剖检：观察和记录鸡群临床症状，并取具有典型临床症状的病鸡进行剖检，观察组织器官病变情况，取具有典型病变的组织，用于提取DNA进行PCR检测。

1.3.2 ALV-J特异性PCR：模板DNA制备参照文献［11］进行。 PCR 采用 25 μL 反应体系，即 10×buffer 2.5 μL，25 mmol/L 的 Mg2＋1.5 μL， 10 pmol/μL的上、下游引物各 1 μL， 模板 DNA 1 μL，2.5 mmol/L 的 dNTP 1 μL，5 U/μL 的 Taq 酶 0.25 μL， 去离子水16.75 μL。循环条件为预变性94℃3 min，94℃30 s，56 ℃ 30 s，72 ℃ 40 s；30 个循环；72 ℃终末延伸10 min。

2 结果与分析

图1 病鸡的临床症状及病理变化

图2 ALV-J特异性PCR检测

2.1 临床症状和剖检病变临床观察发现，病鸡体形消瘦，鸡冠苍白，部分鸡眼睑粘连（见图1 A）。剖检病鸡可见，肝脏肿大，呈暗红色，肝表面和切面可见颗粒状白色肿瘤结节（见图1 B）；心脏一侧明显肿大，切开心肌明显增厚（见图1 C）。

2.2 ALV-J特异性PCR结果以病鸡组织DNA为模板，用ALV-J异性引物H5/H7进行PCR，结果从2只鸡的DNA中均扩增出了大小约为545 bp的条带，与预期片段大小相符（见图2），表明这些鸡体内均含有ALV-J病毒核酸序列。

3 讨论

J亚群禽白血病最早由英国开普敦家禽研究所的Payne于1989年在肉种鸡中发现，该病是主要引起肉鸡和肉种鸡比传统的禽淋巴细胞白血病发病率和死亡率更高的髓细胞瘤性白血病［1］。我国在1999年首次发现J亚群肉种鸡禽白血病病例，随后全国各地20多个省市相继报道肉种鸡鸡群发生ALV-J感染［2］。2002年徐镔蕊等首次报道我国海兰褐蛋鸡J亚群禽白血病病例，随后其他学者相继在山东、湖北、广东蛋鸡中发现血管瘤型ALV-J病例［4-8］。 2005 年以来，先后在山东、广西、江西等地的地方品种鸡群中发现ALV-J感染病例［5-7］。这表明近年来J亚群禽白血病在我国不仅有区域蔓延趋势，更有宿主扩大化的趋势，不仅严重威胁了养禽业的生产，同时也对保护我国地方禽种资源提出了更严峻的挑战。

ALV-J主要侵害机体的骨髓造血细胞，引起骨髓细胞瘤病变，对机体免疫系统损害较大，即便是近年出现的蛋鸡感染血管瘤性J亚群禽白血病也往往伴有髓细胞瘤发生。ALV-J感染鸡群血清学情况比较复杂，可出现无病毒血症无抗体（V-，A-）、无病毒血症有抗体 （V-，A＋）、有病毒血症有抗体（V＋，A＋）、有病毒血症无抗体（V＋，A-），4 种血清学类型［12］，因此抗体检测往往很难准确判断鸡群的带毒和感染情况，确定鸡群是否带毒必须通过IFA或PCR检测方法进行病原检测。该研究在剖检的基础上进一步通过ALV-J特异性PCR，确诊了散养的淮南王土鸡为ALV-J感染，表明湖北的部分淮南王土鸡鸡群已存在ALV-J感染，应引起土鸡养殖者的重视，在引进鸡苗时需要提高警惕，并采取相应措施，确保引进健康鸡苗，保证鸡群健康，以预防ALV-J的感染，从而减少经济损失。

［1］PAYNE L N，BROWN S R，BUMSTEAD N，et al．A novel subgroup of exogenous avian leukosis virus in chickens［J］.Gen Virol，1991，72（pt4）：801-807.

［2］赵振华，顾玉芳，王风龙，等．禽骨髓细胞瘤病的病理学初报［J］.动物医学研究进展，1999，20（3）：85-86．

［3］杜岩，崔治中，秦爱建．从市场商品肉鸡中检测出J亚群白血病病毒［J］.中国家禽学报，1999（1）：1-4．

［4］徐镔蕊，董卫星，何召庆，等．间接荧光抗体法快速诊断海兰褐蛋鸡J亚群禽白血病的研究［J］.中国兽医杂志，2002（9）：7-9．

［5］成子强，张利，刘思当，等．中国麻鸡中发现禽J亚群白血病［J］.微生物学报，2005，45（4）：584-587．

［6］石梦霞，王培坤，韦平，等．广西地方品种鸡临床血管瘤型禽白血病的诊断［J］.中国家禽，2015，37（2）：68-70．

［7］李海琴，刘林秀，季华员，等．江西地方品种鸡禽白血病病毒感染状况的研究［J］.江西农业大学学报，2015，37（2）：314-317．

［8］杨玉莹，梁雄燕，余连喜，等．湖北蛋鸡群血管瘤型ALV-J血清学检测和PCR诊断 ［J］.湖北农业科学，2011，50（6）：1211-1213．

［9］李拓凡，多婷，梁雄燕，等．J亚群禽白血病病毒env基因主要功能区和EGFP基因在SSff9细胞中的融合表达［J］.中国家禽，2015，37（11）：23-26．

［10］SMITH L M，BROWN S R，HOWES K，etal．Developmentand application ofpolymerase chain reaction（PCR）tests for the detection of subgroup J avian leukosis virus［J］.Virus Research，1998，54（1）：87-98.

［11］梁雄燕，杨玉莹，顾玉芳，等．湖北部分肉种鸡群J亚群禽白血病血清学调查及PCR检测［J］.湖北农业科学，2009，48（11）：2636-2638．

［12］赵振华，杨玉莹，成子强．禽白血病［M］．北京：中国农业出版社，2006：52-80．

Diagnosis of Subgroup J Avian Leukosis of Scatter-feed Huainanwang Native Chicken

WANG Yun1，QIAO Zong-jun2，WANG Guo-ke1，LIANG Xiong-yan1
（1.Yangtze University，Jingzhou 404025，China；2.Animal Husbandry and Veterinary Medicine Service Center of Maguan Township in Zhong County of Chongqing，Zhong County 404317，China）

The diseased 12-week-old scatter-feed Huainanwang native chickens in a farm were anatomized.The white tumor was found in liver of the diseased chicken;The myocardium was found thickened and suspected tumor vegetation was found;The splenatrophy was observed and the color of the section was dark.The suspected case was molecularly diagnosed by PCR assay using specific primers of subgroup J avian leukosis virus.A specific DNA band with the size of 545 bp was obtained,indicating that the tissues of the diseased chicken were positive for subgroup J avian leukosis virus.In a conclusion,the suspected case was pathologically and molecularly diagnosed as infection of subgroup J avian leukosis virus.

Huainanwang native chicken；subgroup J avian leukosis；PCR assay；diagnosis

S858.31

A文章顺序编号：1672-5190（2016）01-0028-02

2016－01－08

王云（1986—），男，硕士研究生，主要研究方向为临床兽医学。

梁雄燕（1982—），男，实验师，博士，主要研究方向为动物病原分子生物学。

（责任编辑：钱英红）