石斛多糖对肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞抗肿瘤作用的影响

薛达冰

（广西医科大学基础医学院 广西南宁 530021）

石斛多糖对肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞抗肿瘤作用的影响

薛达冰

（广西医科大学基础医学院 广西南宁 530021）

目的：探讨石斛多糖对肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞抗肿瘤作用的影响。方法：利用石斛多糖和肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）共同作用荷瘤小鼠，测量小鼠的肿瘤重量和观察小鼠的生存期。结果：石斛多糖和肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）共同作用能明显抑制小鼠的肿瘤生长和延长小鼠的生存期。结论：石斛多糖能加强肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的抗肿瘤作用。

细胞毒性T淋巴细胞 石斛多糖 抗肿瘤

随着肿瘤生物治疗技术的发展，科学研究发现，在体外诱导出肿瘤特异性的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）能产生明显的抗肿瘤效应［1］，现在这种技术已经成为肿瘤生物治疗领域的新方法［2］。现在对于肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞的抗肿瘤研究主要集中在如何加强其杀伤肿瘤的功能。赵永灵等研究表明，石斛多糖能够提高T淋巴细胞活性以及数量［3］。本文将探讨石斛多糖对细胞毒性T淋巴细胞（CTL）抗肿瘤作用的影响，以期能发现一种提高细胞毒性T淋巴细胞抗肿瘤的新药物。

1 材料与方法

1.1 主要试剂和细胞

磷酸缓冲液、RPMI-1640细胞培养基、胎牛血清、青霉素、链霉素、小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（mGM-CSF）、小鼠白细胞介素-4（mIL-4）、石斛多糖、小鼠肝癌细胞系H22。

1.2 实验方法

处死小鼠后，取出股骨，冲洗出骨髓中的细胞，收集细胞，裂解红细胞后，在六孔板中加入10%胎牛血清的RPMI-1640培养基和50 ng/ml重组小鼠GM-CSF、5ng/ml重组小鼠IL-4，第八天加入利用液氮反复冻融法制备的小鼠肝癌细胞抗原，然后在细胞培养箱内继续培养18h，收集细胞用于后续的实验。

无菌条件下处死小鼠后，取出小鼠的脾脏，制备单个脾细胞悬液，采用密度梯度离心法获得单个核细胞。使用无菌的尼龙棉纯化T淋巴细胞。将使用含IL-2的RPMI-1640完全培养基将T淋巴细胞重悬成2×106个/ml，于六孔板中进行培养，并加入2×105个/孔的负载肝癌细胞抗原的树突状细胞刺激T细胞增殖分化，37℃，5%CO2细胞培养箱中培养6天，收集T淋巴细胞作为肿瘤特异细胞毒性T淋巴细胞用于后续实验。

小鼠皮下接种小鼠肝癌细胞，待肿瘤长到5 mm直径时将小鼠随机分为4组，每组10只，分别设肿瘤特异CTL及灌胃石斛多糖组，另设注射PBS对照组，石斛多糖对照组，肿瘤特异CTL组。治疗方法为肿瘤特异CTL每周腹腔注射2×106个/只，共治疗三次，石斛多糖每天灌胃0.3g·kg-1，灌胃两周。四周后观察治疗效果，用电子天平测量肿瘤的重量。记录小鼠生存期。

1.3 统计学处理

统计学处理 采用 SPSS13.0统计软件进行统计学数据分析，计量数据使用（±s）表示，组与组之间用方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 小鼠肿瘤重量及生存期

由表1结果可知，细胞毒性T淋巴细胞联合石斛多糖治疗组小鼠的肿瘤重量明显比空白对照组、单用石斛多糖组、单用细胞毒性T淋巴细胞组轻，并且细胞毒性T淋巴细胞联合石斛多糖治疗组小鼠的生存期明显比空白对照组、单用石斛多糖组、单用细胞毒性T淋巴细胞组要长。

表1 不同的治疗方案的荷瘤小鼠的肿瘤重量及生存期（±s）

表1 不同的治疗方案的荷瘤小鼠的肿瘤重量及生存期（±s）

注：与对照组比较，*P＜0.05；与石斛多糖组比较，▲P＜0.05；与CTL组比较，△P＜0.05

组别 　n 　　重量 （g） 　　生存期（d a y s）对照组 　1 0 　4 . 6 6 ± 0 . 1 1 　8 5 . 8 0 ± 1 . 1 7石斛多糖组 　1 0 　4 . 3 1 ± 0 . 1 0 * 　9 1 . 3 0 ± 1 . 0 7 * C T L组 　1 0 　3 . 9 1 ± 0 . 1 2 *▲ 　9 6 . 2 0 ± 0 . 8 4 *▲石斛多糖和C T L组 　1 0 　3 . 5 0 ± 0 . 0 8 *▲△ 　1 0 2 . 8 0 ± 1 . 4 9 *▲△

3 讨论

肿瘤细胞能够在体内不断的恶性增殖，主要的原因在于它能够逃避免疫系统的识别，使得体内不能产生特异杀伤肿瘤的细胞毒性T淋巴细胞。在体外利用肿瘤抗原冲击树突状细胞，能够诱导出肿瘤特异性的细胞毒性T淋巴细胞。体外获得的细胞毒性T淋巴细胞回输到体内后，能够提高体内的抗肿瘤免疫反应。有学者研究发现石斛多糖具有抑制肿瘤的细胞生长［4］以及提高机体免疫力［5］的作用。本文利用石斛多糖与肿瘤特异性的细胞毒性T淋巴细胞共同作用于荷瘤小鼠，发现荷瘤小鼠的肿瘤重量比其它对照组明显轻，小鼠的生存时间比其它对照组明显长。以上结果说明利用石斛多糖可以提高肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞抗肿瘤的效果，这也为临床使用肿瘤特异性细胞毒性T淋巴细胞为基础的肿瘤免疫治疗提供一个新的方向。

［1］Steinman R M， Banchereau J. Taking dendritic cells into medicine ［J］.Nature 2007， 449（7161），419-426.

［2］Banchereau J， Palucka AK. Dendritic cells as therapeutic vaccines against cancer［J］.Nat Rev Immunol 2005，5（4），296-306.

［3］Zhao YL ，Wang SL ，Li XY .Studies on the polysaccharides of Dendrobium aphyllum［J］.ActaBotYunnan 1994，16，392-396.

［4］马国祥，徐国钧.鼓槌石斛及其化学成分的抗肿瘤活性作用［J］.中国药科大学学报，1994，25（3），188-189.

［5］宋宁，陆瑛，邱明华.球花石斛多糖免疫调节作用的研究［J］.天然产物研究与开发，2006，18，445-448.

R73

A

1674-2060（2016）02-0192-01

薛达冰（1989-），男，广西北海人，在读硕士，研究方向：肿瘤生物治疗。