预过滤系统对静注人免疫球蛋白纳米过滤的效率和质量影响

黄捷王炳卢奎林陈品全刘素芳高荣

（1.四川大学 四川成都 610041；2.成都蓉生药业有限责任公司 四川成都 610041）

预过滤系统对静注人免疫球蛋白纳米过滤的效率和质量影响

黄捷1，2王炳2卢奎林2陈品全2刘素芳2高荣1*

（1.四川大学 四川成都 610041；2.成都蓉生药业有限责任公司 四川成都 610041）

本文对静注人免疫球蛋白（以下简称静丙）进行纳米膜过滤时，使用不同预过滤系统对纳米过滤效率和静注人免疫球蛋白产品质量的影响进行了比较，旨在得出不同预过滤系统对静丙进行纳米过滤的效率和主要质量指标的影响。结果：不同的预过滤系统对IVIG纳米过滤的效率影响较大，选择适宜的预过滤系统能够有效提高纳米过滤的效率，且过滤后制品质量检查结果无明显差异（P＞0.05）。结论：选择适宜的预过滤系统，可显著提高静丙纳米过滤效率，且不影响其主要质量指标。

预过滤系统 纳米膜过滤 静注人免疫球蛋白 质量

病毒污染严重威胁血液制品安全性，如何进一步提高制品的安全性始终是人们所关注的问题。目前国内静丙病毒灭活方法主要采用低pH孵放灭活病毒［1-2］、纳米过滤去除病毒、辛酸盐病毒灭活［2］、S/D法病毒灭活和巴氏加温病毒灭活［3］［4］等方法，其中低pH孵放灭活病毒对产品的温度要求较高，一般温度控制在24±1℃，时间为21～24天［5］［6］。纳米膜过滤是根据分子筛原理，按膜孔径大小截流病毒，使目的蛋白通过滤器，大致分为错流（切向）过滤和直流（死端）过滤两种方式，其过滤效率和病毒去除能力取决于蛋白质含量、蛋白聚合物、过滤表面积、pH和温度等影响。本文主要针对温度对纳米过滤的过滤效率和产品主要质量指标的影响进行分析。

1 材料

1.1 静注人免疫球蛋白（pH4）原液1.2 原料

1.2.1 纳米滤芯（0.001m2）

1.2.2 预过滤滤芯：孔径0.2um滤芯、孔径0.1um滤芯、去脂滤芯

1.3 试验设备

1.3.1 恒温水浴箱

1.3.2 100ml、50ml、10ml量筒各三支

1.3.3 滤器完整性测试仪一台

1.3.4 100kg压力氮气钢瓶一个，带高低压力表减压阀一个

1.3.5 快装卡、硅胶管、压力表若干

1.4 检测设备

1.4.1 DMA4100型密度仪，为奥地利安帕通公司产品；

1.4.2 Delta320 pH计，为METTLER TOLEDO公司产品；

1.4.3 液相色谱仪，为Agilent公司产品；

1.4.4 全自动电泳仪，为INTERLAB生产。

2 方法

2.2.1 采用三批静丙原液分别使用孔径0.2um滤芯、孔径0. 1um滤芯、去脂滤芯、孔径0.1um滤芯+去脂滤芯，作为预过滤系统进行纳米膜过滤，过滤温度为18～23℃，过滤时间为6小时，过滤过程中控制压力不超过滤芯厂家规定的压力，并尽量保持三组过滤系统压力一致。收集使用不同预过滤系统过滤后的静丙原液进行纳米过滤时的过滤参数。

2.2.2 采用三批静丙原液分别使用孔径0.2um滤芯、孔径0. 1um滤芯、去脂滤芯、孔径0.1um滤芯+去脂滤芯，作为预过滤系统进行纳米膜过滤，收集使用不同预过滤系统预滤后完成纳米过滤的产品进行检测，检测项目为： pH值、蛋白质含量、纯度、抗补体活性和分子大小分布。

表1不同预过滤系统进行纳米过滤时静丙过滤流速、过滤量（N=3）

表2 不同预过滤系统的滤过液流速之间两两比较结果

2.2.3 过滤完毕的滤芯进行完整性检测，确保过滤有效性。

表3 不同预过滤系统的过滤量之间两两比较结果

表4 不同预过滤系统进行纳米过滤时静丙原液质量指标（N=3）

3 结果

3.1 使用不同预过滤系统进行预过滤后对静丙纳米过滤效率的影响

3.2 使用不同预过滤系统进行预过滤后对静丙纳米过滤后产品质量的影响

采用不同预过滤系统进行纳米过滤，静丙主要质量指标进行统计分析，结论均无显著差异（P＞0.05）。

采用不同预过滤系统进行纳米过滤后，所用纳米膜滤芯进行完整性检测均合格，证明使用不同的预过滤系统，纳米膜过滤有效性能够得到确保。

4 讨论

4.1 纳米过滤控制参数 选择适宜的预过滤系统，能够有效去除静丙原液中的一些小颗粒物质，增加过滤速度和过滤量，提高了生产效率；但同时，由于预过滤系统对产品有一定的耗损，不能无限制的添加，因此，通过本实验确认最佳的预过滤系统为孔径0.1um滤芯+去脂滤芯。

4.2 产品原液过滤效率分析 从表1，表2，表3的统计数据表明， 使用孔径0.2um滤芯作为预过滤系统与使用孔径0.1um滤芯、去脂滤芯和孔径0.1um滤芯+去脂滤芯作为预过滤系统在纳米过滤滤过液流速和纳米过滤滤过量上有显著差异；孔径0.1um滤芯与去脂滤芯作为预过滤系统，在纳米过滤滤过液流速和纳米过滤滤过量上无显著差；孔径0.1um滤芯、去脂滤芯作为预过滤系统与孔径0. 1um滤芯+去脂滤芯作为预过滤系统，在纳米过滤滤过液流速和纳米过滤滤过量上有显著差异，在纳米过滤滤过液流速和纳米过滤滤过量上有显著差异。孔径0.1um滤芯+去脂滤芯作为预过滤系统的滤过液流速和纳米过滤滤过量均是各预过滤系统中最高的，说明选择适宜的预过滤系统对纳米过滤的过滤效率有提高，实际生产中可以选择孔径0.1um滤芯+去脂滤芯作为预过滤系统，能够有效提高纳米过滤的效率。说明选择适宜的预过滤系统对纳米过滤的过滤效率有提高，实际生产中可以选择孔径0.1um滤芯+去脂滤芯作为预过滤系统，能够有效提高纳米过滤的效率。

4.3 产品原液主要质量指标 从表4的统计数据表明，使用不同预过滤系统进行预过滤后，再进行纳米过滤的静丙原液纯度均达到98.5%以上，符合《中国药典》标准。使用不同预过滤系统进行预过滤后再进行纳米过滤的静丙原液的pH值、蛋白质含量、抗补体活性、分子大小分布无显著差异（P＞0.05）。

综上对比分析，采用孔径0.1um滤芯+去脂滤芯进行预过滤后再进行纳米过滤的静注人免疫球蛋白，较使用孔径0.1um滤芯、孔径0.1um滤芯、去脂滤芯作为预过滤系统过滤后再进行进行纳米过滤的静注人免疫球蛋白的生产效率显著提高。采用不同预过滤系统进行预过滤后再进行纳米过滤的静丙原液的主要质量指标无显著差异。

结论

静注人免疫球蛋白纳米过滤使用孔径0.1um滤芯+去脂滤芯进行预过滤后再进行纳米过滤，过滤时间不超过6小时，过滤效率明显提高，且过滤后制品质量检查结果无明显差异。表明选择适宜的预过滤系统进行预过滤后再进行纳米过滤能提高过滤效率，同时不影响静脉注射用人免疫球蛋白的质量。

［1］代旭兰，陈海等.纳米膜过滤技术在提高人血浆制品安全性方面的应用，中国输血杂志 2009年06期.

［2］王剑锋，英志芳等.辛酸盐灭活静注人免疫球蛋白中脂包膜病毒效果验证的研究.微生物学免疫学进展，2011年第2期.

［3］宋清爽等.血液制品病毒灭活及去除工艺进展，生物技术通讯2012年04期，627-630页. ［4］张延莹，李宏昊，姜燕.血液制品灭活及去除病毒工艺，中国生化药物杂志 2002年04期.

［5］Robert E. Inactivation of hepatitis C virus in low pH intravenous immunoglobulin. Biologicals（1994）22.13-19.

［6］王玉等.冻干低pH 静注免疫球蛋白酸孵放灭活病毒方法的验证，中国输血杂志 1997年，第十卷，第四期，181-184页.

R917

A

1674-2060（2016）02-0013-02

黄捷（1977—），女，汉族，四川成都人，四川大学生命科学学院2012级在职研究生，现从事于血液制品行业，就职于成都蓉生药业有限责任公司，具有15年的生产及质量管理工作经验。

高荣