瘦素及瘦素受体在妊娠期尖锐湿疣组织中的表达及意义

贾月琴，姜　新，石长珠，朱应玉,谢贞兰，刘　莹

(铜陵市人民医院　1.皮肤性病科;2.病理科,安徽　铜陵　244000)



·临床医学·

瘦素及瘦素受体在妊娠期尖锐湿疣组织中的表达及意义

贾月琴1，姜新1，石长珠1，朱应玉1,谢贞兰2，刘莹2

(铜陵市人民医院1.皮肤性病科;2.病理科,安徽铜陵244000)

目的：探讨瘦素(Ob)及瘦素受体(Ob-R)在妊娠期尖锐湿疣(CA)组织中的表达及意义。方法：采用免疫组化法分别检测24例非妊娠期CA、16例妊娠期CA组织中Ob 及Ob-R表达。结果：Ob及Ob-R表达于角质形成细胞胞质。Ob 及Ob-R在非妊娠期CA组患者组织中呈弱阳性、阳性表达，表达于基底层、棘层和颗粒层；Ob 及Ob-R在妊娠期CA患者皮损组织中呈阳性、强阳性表达，主要表达于基底层、棘层和颗粒层；妊娠期CA组织中Ob及Ob-R表达量高于非妊娠期CA组，差异有统计学意义(P<0.01)；妊娠期CA组皮损中Ob和Ob-R的表达呈正相关关系(r=0.714,P<0.01 )。结论：①非妊娠期CA与妊娠期CA组织的基底层、棘层和颗粒层均有不同程度的Ob及Ob-R表达，可能与CA组织表皮细胞异常增殖过程有关；② Ob及Ob-R在妊娠期CA组织中过度表达，可能促进了妊娠期CA组织表皮细胞的过度增殖。

瘦素；瘦素受体，尖锐湿疣；妊娠

尖锐湿疣(condyloma acuminatum,CA)是由人类乳头瘤病毒(HPV)感染引起的一种良性增生性疾病，主要发生在肛周及外生殖器等皮肤与黏膜处，其组织病理学的主要特征为表皮角质形成细胞过度增殖。临床上，妊娠期CA与非妊娠期CA相比，疣体生长迅速，多点并发、治疗后极易复发。其发生机制尚未完全阐明。有研究表明，Ob与其受体特异性结合，可以作为促有丝分裂剂及非特异性促肿瘤生长因子，促进肿瘤细胞生长和增殖[1-3]。妊娠期CA虽属于良性增生，但其皮损处表皮细胞过度、过快地增殖，具有与实体恶性肿瘤极其相似的生物学特征。研究证实，妊娠期体内多种生理、病理过程与孕妇体内Ob水平升高有关[4-5]。笔者通过检测、分析Ob和Ob-R在非妊娠期CA及妊娠期CA组织中的表达，探讨其在妊娠期CA组织发展过程中的可能作用。

1　资料与方法

1.1组织标本收集我院皮肤性病科2015年1月～2016年1月女性CA患者外阴及肛周皮损组织，均经组织病理学确诊。其中，非妊娠期CA组24例(年龄18～42岁；病程2周～3月)；妊娠期CA组16例(年龄21～36岁，病程2周～2月，孕8～20周)。所有患者就诊前4周内未接受过任何治疗，入选患者均无肥胖症、高血压、糖尿病、乳腺癌等系统性疾病和肿瘤性疾病。每个标本经10%中性福尔马林固定液固定后常规制成蜡块，制成5 μm厚度4张，其中1张进行常规苏木素-伊红(HE)染色,2张行免疫组化染色检测Ob和Ob-R表达，1张PBS液代替一抗作阴性对照。

1.2主要试剂鼠抗人Ob单克隆抗体(sc-28344)、鼠抗人Ob-R单克隆抗体(sc-8391)购自美国Santa Cruz Biotechnology公司,PV-6000免疫组化检测试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3免疫组化二步法检测各组组织中Ob和Ob-R表达石蜡切片常规脱蜡至水化，3%H2O2去离子水室温孵育5 min，以阻断内源性过氧化物酶，PBS冲洗；滴加一抗4℃过夜，PBS洗涤2 min×3次；滴加酶标记的二抗37℃孵育20 min，PBS洗涤2 min×3次；DAB溶液显色，蒸馏水冲洗、复染、脱水、透明封片。用PBS液代替一抗作阴性对照，用已知阳性片作阳性对照。

1.4结果判定参照文献[6]的方法，免疫组化染色以包膜或胞质棕黄色着色为阳性细胞,根据阳性细胞染色强度和百分比确定Ob、Ob-R在各组组织中的半定量分级：① 按细胞着色强度，无染色为0分(阴性)，浅黄色为1分(弱阳性)，黄色为2分(阳性)，棕黄色为3分(强阳性)；②按阳性细胞百分比，0分为无阳性细胞，1分为阳性细胞数<25%，2分为阳性细胞数25%～50%，3分为阳性细胞数51%～75%，4分为阳性细胞数>75%。根据上述两项分值的乘积判定结果，0分为阴性，1～4分为弱阳性(+)，6～8分为阳性()，9～12分为强阳性()。采用Image J图像分析软件，对染色阳性的切片进行半定量分析。在相同条件下对同一批染色切片进行图像采集，每张切片随机取5个高倍(×400)镜视野，测定每张图像的平均光密度值(average optical density,AOD),以每张切片5个视野平均光密度值的平均值作为该张切片测量值。

2　结果

2.1一般临床资料的可比性分析非妊娠期CA组与妊娠期CA组患者年龄、病程差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性(表1)。

表1两组间年龄、病程的比较

组别例数年龄/岁病程/周非妊娠期CA组2428.58±5.8528.67±17.08妊娠期CA组1626.88±3.8827.50±12.48t值1.0250.234P值>0.05>0.05

2.2Ob的表达Ob表达于角质形成细胞的胞质，呈棕黄色颗粒。Ob在非妊娠期CA组织中呈弱阳性表达，表达于基底层、棘层和颗粒层(图1a)。在妊娠期CA组织中呈阳性、强阳性表达，主要表达于基底层、棘层和颗粒层(图1b)。图像分析显示AOD值在非妊娠期CA组、妊娠期CA组分别为0.211±0.019和0.272±0.014。统计学分析显示：非妊娠期CA组与妊娠期CA组患者Ob表达量差异具有统计学意义(t=<10.795,P<0.01)。

a：Ob在非妊娠期CA组织中的弱阳性表达；b：Ob在妊娠期CA组织中的阳性表达。

图1不同时期CA组织中Ob的表达(PV-6000×400)

2.3Ob-R的表达Ob-R表达于角质形成细胞的胞浆，呈棕黄色颗粒。Ob-R在非妊娠期CA组织中呈弱阳性表达，表达于基底层、棘层和颗粒层(图2a)。在妊娠期CA组织中呈阳性表达，主要表达于基底层、棘层和颗粒层(图2b)。图像分析显示AOD值在非妊娠期CA组、妊娠期CA组分别为0.220±0.018和0.301±0.021。统计学分析显示：非妊娠期CA组与妊娠期CA组之间Ob-R表达量差异有统计学意义(t=<13.086，P<0.01)。

2.4妊娠期CA组患者皮损中Ob和Ob-R表达的相关性分析直线相关分析显示妊娠期CA组患者皮损中Ob和Ob-R的表达呈正相关(r=0.714,P<0.01)。

a：Ob-R在非妊娠期CA组织中的弱阳性表达；b：Ob-R在妊娠期CA组织中的强阳性表达。

图2不同时期CA组织中Ob-R的表达(PV-6000×400)

3　讨论

妊娠并发CA是皮肤科医生面临的较为棘手的问题，疣体生长迅速，采用冷冻、微波或二氧化碳激光等物理治疗后，疣体极易复发。研究认为可能与以下因素有关：①妊娠期机体细胞免疫功能下调，削弱了机体的抗病毒能力，可能促进了HPV病毒的复制；②妊娠期体内内分泌状态及激素水平的变化，可能是妊娠期CA组织过快增殖的重要原因之一。但其确切的机制尚未完全阐明。

Ob是一种由肥胖基因编码、由脂肪细胞分泌的多肽类激素，含167个氨基酸，通过与Ob-R特异性结合发挥多种生物学功能，如调节摄食、能量代谢，生长，促进细胞增殖、血管生成，参与肿瘤形成等[7]。研究证实，Ob及Ob-R参与了口腔鳞状细胞癌、乳腺癌、食管癌、子宫内膜癌等多种恶性肿瘤的发生与发展[8-11]。

本研究结果显示，①Ob及Ob-R在非妊娠期CA组患者皮损组织中呈弱阳性表达，表达于基底层、棘层和颗粒层；②Ob及Ob-R在妊娠期CA患者皮损组织中呈阳性、强阳性表达，表达于基底层、棘层和颗粒层；③两组Ob及Ob-R表达量差异有统计学意义(妊娠期CA组Ob及Ob-R表达量高于非妊娠期CA组)；④Ob与Ob-R在两组组织中的表达位置、表达量及表达趋势相一致。据此，笔者推测，①非妊娠期CA与妊娠期CA组织基底层、棘层和颗粒层内存在的Ob及Ob-R，可能与CA组织表皮细胞异常增殖有关；②Ob及Ob-R在妊娠期CA组织表皮细胞中过度表达，可能促进了妊娠期CA疣体处表皮细胞过快、过度增殖。究其原因，应与孕妇增加的脂肪组织及胎盘的旁分泌或内分泌产生大量Ob有关[4]。

目前研究认为，Ob与Ob-R特异性结合后主要通过Janus激酶/信号传导及转录活化子(janus kinase/signal transducers and activators of transcription,JAK/STAT)途径发挥促细胞增殖作用[12]。Ob-R本身无酪氨酸激酶活性，当Ob与其结合后，可活化JAK激酶，使受体胞内域的酪氨酸残基磷酸化，Ob-R与蛋白酪氨酸磷酸酶相互作用后，使STAT分子的酪氨酸被磷酸化，磷酸化的STAT分子可形成同源或者异源二聚体，后者被易位释放到细胞后，与相应靶基因启动子结合而激活相应基因转绿与表达，并最终启动细胞增殖过程[12]。

综上所述，笔者认为妊娠期CA疣体的过快、过度增殖可能与Ob及Ob-R在表皮细胞内的过度表达有关，但其具体作用机制尚有待于进一步研究。

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Expression and implications of leptin and leptin receptor in the epidermis of pregnant women with condyloma acuminatum

JIA Yueqin,JIANG Xin,SHI Changzhu,ZHU Yingyu,XIE Zhenlan,LIU Ying

Department of Dermatology & STD，Tongling People′s Hospital,Tongling 244000,China

Objective： To investigate the expression and implications of leptin (Ob) and leptin receptor (Ob-R) in the epidermis of pregnant women with condyloma acuminatum(CA).Methods:Immunohistochemical technique was used to detect the Ob and Ob-R in the genital condylomata in 24 non-pregnant women and 16 pregnant women,respectively.Results:Ob and Ob-R were primarily expressed in the cytoplasm of keratinocytes,and present in positive expression or weak expression in the basal cell layer,prickle cell layer and stratum granulosum of warts in the non-pregnant women,whereas positive or strong expression in the epidermic warts in pregnant women.Pregnant women had higher expression of Ob and Ob-R than their counterparts(P<0.01),and Ob expression was positively correlated with that of Ob-R in CA tissues in pregnant women(r=0.714,P< 0.01).Conclusion:Ob and Ob-R expressed to a certain extent in basal cell layer,prickle cell layer and stratum granulosum of warts in both pregnant and non-pregnant women suggests that the two proteins are associated with the abnormal proliferation in the epidermic cells of CA,and over-expression of Ob and Ob-R in pregnant women may be attributable to the excessive proliferation of the epidermic cells in CA during pregnancy.

leptin;leptin receptor;condyloma Acuminatum;pregnancy

1002-0217(2016)05-0470-03

铜陵市临床医学实验室科技计划资助项目(铜科[2015]40号)；铜陵市卫计委科研立项项目(铜卫科[2015]2号)

2016-03-01

贾月琴(1975-)，女，副主任医师，(电话)13655623108，(电子信箱)jyq1976@163.com.

.25;R 752.53

A

10.3969/j.issn.1002-0217.2016.05.019