中年人唾液糖蛋白水平与患龋风险的相关性研究

孙 青，许维刚，赵 越

中年人唾液糖蛋白水平与患龋风险的相关性研究

孙 青，许维刚，赵 越

（常州市口腔医院牙体牙髓科江苏常州213000）

目的：检测35～44岁中年人唾液糖蛋白水平，探讨其与中年人患龋状况之间的相关性，为寻找龋病的生物标志物提供资料。方法：随机抽取常州市口腔医院就诊的200例中年患者进行口腔检查，根据检查结果随机分成两组：①无龋组（DMFT=0），②有龋组（DMFT＞0），抽取无龋组20例，有龋组30例，分别检测两组唾液糖蛋白水平，检查有龋组患龋情况并记录龋失补牙数（DMFT），龋失补牙面数（DMFS），龋蚀指数（CSI）。应用SPSS17.0软件包对试验数据进行统计分析。结果：无龋组唾液糖蛋白水平显著低于有龋组（P＜0.05）；有龋组唾液糖蛋白水平与龋失补牙数（DMFT），龋失补牙面数（DMFS），龋蚀指数（CSI）显著正相关。结论：唾液糖蛋白水平与中年人患龋指数具有相关性。

唾液糖蛋白水平；龋病；中年人；患龋风险；相关性

龋病是WHO重点防治的三大非传染性疾病之一，对人类健康危害严重［1］，根据第三次全国口腔健康流行病学抽样调查结果显示，中年人龋病患病率为88.1%。中年人知识积累增长，经验日益丰富，社会地位趋于稳定，然而人体生理功能却在不知不觉中下降，在社会物质财富日益丰富的当下，这个群体对自身健康状况的关注度也日益增高。人类的唾液执行多种重要的生理功能［2］，由于全唾液样本的收集比血液简单，没有侵入性的操作，唾液是研究人类疾病生物标志物的理想体液。随着人类基因测序的完成和后基因组学时代的到来，蛋白质组学应运而生，龋病是最常见的口腔疾病，大量实验［3-5］致力于唾液中蛋白组学研究，而本文旨在研究唾液蛋白重要的翻译后修饰，分析中年人唾液糖蛋白水平与龋病风险的相关性，以期为中年人龋病筛查和早期防治提供依据。

1　材料和方法

1.1病例选择和分组：随机抽取2014年12月-2016年4月在常州市口腔医院就诊的中年（35～44岁）患者200例，由一名经培训、并经两次标准一致性检验可靠度优的口腔医师，参照世界卫生组织（WHO）《口腔健康调查的基本方法》规定的龋病诊断标准，检查所有患者的患龋情况，并记录龋失补牙数（DMFT），龋失补牙面数（DMFS），龋蚀指数（CSI）。根据检查结果分成两组：①无龋组（DMFT=0），②有龋组（DMFT＞0），随机抽取无龋组20例，有龋组30例，排除性别、年龄和种族偏倚，纳入标准：①全身健康，无系统性疾病；②1月内未使用抗生素或其它可能影响唾液分泌的药物；③牙体硬组织发育良好，无四环素牙、氟斑等发育性疾病；④无重度牙周炎，口腔软组织疾病；⑤非孕期及哺乳期妇女；⑥愿意签署知情同意书。

1.2主要仪器和试剂：离心机（Hitachi Himac，日本），HANGPINGFA2004电子天平（上海跃进医疗器械厂），Medical Freezer -80℃冰箱（三洋，日本），Nanodrop 2000/2000C分光光度计（Thermo Scientific），Bio-Rad电泳仪（Bio-Rad，美国），SDS-PAGE电泳相关试剂；GENMED糖蛋白电泳高碘酸希尔法阿尔新蓝染色试剂盒（GENMED SCIENTIFICS INC，美国）。

1.3方法

1.3.1唾液采集及唾液糖蛋白水平测定：采用标准化全唾液收集方法，于上午9:00-11:00之间收集受试者非刺激性全唾液2ml置于试管内，取样前要求受试者禁食物、饮料和禁止使用口腔护理用品至少2h，样本采集后立即置于冰上，并转移至-80℃保存备用；将唾液样本在4℃离心，去除食物残渣，各取上清液，依照Bradford法，测定蛋白浓度，配制8%的分离胶，分别取上样量100μg，进行SDSPAGE蛋白电泳；电泳完成后，经GENMED 糖蛋白电泳高碘酸希尔法阿尔新蓝染色试剂盒染色；采集图像，用Image J软件进行图像处理和分析，进行数据记录。

1.3.2口腔检查：对两组受试者分别进行口腔检查，综 合 评 估 并 计 算 龋 失 补 牙 面 数 （decayed -missing-filled surface，DMFS）、龋失补牙数（decayed-missing -filled tooth，DMFT）。 对 龋 蚀 指数（caries severity index，CSI）给予计分［6］：无龋为0分，因龋充填为0.5分，继发龋、釉质龋、牙本质浅龋为1分，牙本质深龋或露髓、残冠或残根为2分，若1个牙有多个牙面同时患龋，以其牙面中的最高分为准。计算公式：CSI=龋蚀牙记分总和×100 /（牙数×2×100）。

1.4统计学分析：应用SPSS17.0软件包对实验数据进行统计学分析，计量资料以x¯±s表示 ，两组数值有无差异性采用独立样本t检验，采用Pearson相关分析检验两组数值是否存在的相关性，所有检验均为双侧，P＜0.05为差异具有显著性。

图1　唾液糖蛋白水平检测结果

2.2有龋组唾液糖蛋白水平与龋病指数的相关分析：有龋组唾液糖蛋白水平与DMFT显著正相关（r=0.937，P＜0.01），与DMFS显著正相关（r=0.900，P＜0.01），与CSI显著正相关（r=0.968，P＜0.01）。见图2～4。

图2　有龋组唾液糖蛋白水平与DMFT显著正相关

图3　龋组唾液糖蛋白水平与DMFS显著正相关

图4　有龋组唾液糖蛋白水平与CSl显著正相关

2　结果

2.1唾液糖蛋白水平检测结果，见图1。对两组数据分别进行单样本Kolmogorov-Smirnov检验，结果显示两组数据符合正态分布，将两组数据采用独立样本t检验，有龋组唾液糖蛋白水平（4615682.77±1282831.862）显著高于无龋组（4482270.55±820844.542）（P＜0.01）。

3　讨论

近年来，新兴的生物学技术已经将唾液诊断的范围从口腔扩展到全身系统，唾液中大量生物标志物可用于检测癌症、糖尿病、自身免疫性疾病等［7-9］多种疾病，然而目前确定的多数疾病标志物都是血清中的成分，不是唾液腺产生的内源性蛋白［10］。人类唾液蛋白质组织工程开始之后，很多研究致力于将龋病的流行情况和唾液的蛋白质组学关联起来，但是已有的研究结果不尽一致［11-13］。Jagtap等［11］通过对人类唾液中上清液的蛋白质分析发现，低丰度区蛋白可能是龋病相关唾液蛋白。鄢国伟等［12］用ESI-MS /MS 分析法探索唾液蛋白组与龋病的关系，其结果显示高龋组蛋白量显著高于无龋组，两组之间差异表达蛋白包含基质金属蛋白酶9、黏蛋白7、乳铁蛋白、碳酸酐酶6、天青杀素、冷凝集素等。Denny等［13］研究发现，青年人非刺激性唾液中糖蛋白寡糖基团水平和种类与龋损程度有相关性，从而认为个体对龋病的易患性可能与唾液糖蛋白寡糖基团有关。

由于唾液成分进入口腔后就暴露于宿主和微生物来源的各种酶，有可能被降解，从二维凝胶电泳可以看出，腮腺和颌下腺分泌物的蛋白质组学特征和全唾液并不相同［14］。本实验对唾液蛋白翻译后修饰即糖蛋白水平的研究规避了唾液蛋白大量的变化和异质性，对象是全唾液更适合临床采样和反映口腔内的实际情况。同时排除了种族差异，人种和地域的差别可能导致唾液基因型、蛋白表型和翻译后修饰的不同［15］。本研究结果显示：有龋组唾液糖蛋白水平显著高于无龋组，有龋组糖蛋白水平与龋病指数显著正相关。有可能的机制是：糖基化是最重要的翻译后修饰，多糖是自然界中最丰富和结构变化最为多样的分子，通过现代糖组学分析技术，它们的功能和对人类疾病的影响越来越清晰［16］。唾液中多糖修饰的蛋白，与口腔中定植的微生物之间的相互作用最为密切，牙齿表面获得性膜中的糖蛋白可能能够提供附着位点，促进细菌定植，有助于龋病的发生，与Denny，Zehetbauer等［15，17］研究结果一致：龋病的风险标志物可能从糖蛋白中发现。Denny等［15］研究报道唾液粘蛋白的糖基化模式与儿童患龋史具有很强的相关性。也有可能唾液中特定的蛋白是与宿主个体间的基因表达有关系［15］。

综上所述，本实验运用经典的蛋白质组学技术，研究唾液蛋白主要的翻译后修饰，更符合全唾液的情况；和二维电泳、SELDI-TOF-MS质谱相比，本研究采用的技术相对简单，高通量、耗时短、不需要鉴定多个蛋白，降低了检测费用。研究结果提示中年人唾液糖蛋白水平和患龋指数具有相关性，有望为开发检测龋病风险的新技术提供资料。

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编辑/李阳利

Relationship between dental caries and salivary glycoprotein in middle-aged people

SUN Qing， XU Wei-gang， ZHAO Yue
（Department of Endodontics， Changzhou Stomatogical Hospital， Changzhou 213000，Jiangsu，China）

ObjectiveTo explore the relationship between dental caries and salivary glycoprotein in middle-aged people （35 - 44 years old）， in order to find caries biomarkers.Methods200 middle-aged patients （35 - 44 years old） from Changzhou stomatogical hospital were randomly selected for oral examination. The patients were divided into two groups according to the examination. result ①no caries group （DMFT = 0），②the caries group （DMFT＞0）， 20 patients were randomly selected from group ①， 30 patients were randomly selected from group ②. They were tested for salivary glycoprotein level.The decayedmissing-filled surface （DMFS）， decayed-missing-filled tooth （DMFT）， caries severity index （CSI） in both groups were recorded. All statistical analyses were performed using SPSS17.0 software package.ResultsSalivary glycoprotein level in noncaries group was significantly lower than caries group （P＜0.05）. There was significant positive correlation between salivary glycoprotein level and DMFT， DMFS， CSI.ConclusionA negative correlation was found between salivary glycoprotein level and caries activities in middle-aged people（35 - 44 years old）.

salivary glycoprotein level； dental caries； middle-aged people； the risk of dental caries；relationship

R782.7

A

1008-6455（2016）09-0065-03

2016-07-21

2016-08-23