CD14启动子-159位点基因多态性与中国延边地区原发性高血压左心室肥厚的关系*

金星，崔敬兰，郑寿焕，金光明

（延边大学附属医院医学影像二科，吉林延吉133000）

CD14启动子-159位点基因多态性与中国延边地区原发性高血压左心室肥厚的关系*

金星，崔敬兰，郑寿焕，金光明

（延边大学附属医院医学影像二科，吉林延吉133000）

目的探讨CD14启动子-159位点基因多态性与中国延边地区朝鲜族及汉族人群中原发性高血压左心室肥厚的相关性。方法选取中国延边地区朝鲜族原发性高血压左心室肥厚116例，朝鲜族原发性高血压非左心室肥厚107例及朝鲜族正常对照组108例；汉族原发性高血压左心室肥厚103例，汉族原发性高血压非左心室肥厚100例及汉族正常对照者108例。应用聚合酶链反应多态性技术对正常对照者及所有患者的CD14启动子-159位点基因进行基因型分析。多普勒超声心动图评估并计算其左心室质量指数，并记录体重指数、血压、血糖、血脂、低密度脂蛋白及肌酐等指标。结果在朝鲜族及汉族受试人群中，原发性高血压左心室肥厚组与原发性高血压非左心室肥厚组相比，各基因型分布频率在两组间差异有统计学意义（P<0.05）；在原发性高血压左心室肥厚组中，CD14-159位点CC纯合子基因型频率高于原发性高血压非左心室肥厚组及正常对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论CD14启动子-159（C-T）基因多态性与延边地区朝鲜族及汉族人群原发性高血压左心室肥厚的形成相关，CC基因型是延边地区人群发生原发性高血压左心室肥厚的风险因素。

CD14启动子；民族；基因多态性；原发性高血压；左心室肥厚

近年来，一些研究表明CD14启动子-159位点C-T的多态性与脑卒中、颈动脉硬化、糖尿病肾病等血管病变的发生有密切关系[1-3]，且这种相关性与种族相关。左心室肥厚（left ventricular hypertrophy，LVH）是心脑血管事件的独立危险因素，患者一旦发生原发性高血压左心室肥厚（essential hypertension with left ventricular hypertrophy，EH-LVH），则心力衰竭的风险明显增高[4]。池小钜等[5]研究提示，CYBA C242T多态性可能与中国EH-LVH相关，并认为T等位基因对中国患者存在保护作用。但有关CD14启动子-159位点C-T的多态性与EH-LVH关系的报道并不多。本实验应用聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）技术，研究CD14启动子-159位点基因多态性在延边地区朝鲜族及汉族人群中EH-LVH与本族正常人中的分布，探讨该位点的基因多态性与延边地区朝汉两个民族EH-LVH的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料

选取2012年1月-2014年1月在本院门诊就诊及住院的朝鲜族及汉族原发性高血压（essential hypertension，EH）患者及朝汉对照组人群，最终入选朝鲜族EH患者223例，其中EH-LVH 116例，原发性高血压非左心室肥厚（essential hypertension with non-left ventricular hypertrophy，EH-NLVH）107例；对照组108例。其中，男性184例，女性147例；平均年龄（58.47±9.63）岁。汉族最终入选EH患者203例，其中EH-LVH 103例，EH-NLVH 100例；对照组108例。其中，男性175例，女性136例；平均年龄（59.17±9.55）岁。所有人员均为中国延边地区人群。EH诊断标准依据《中国高血压防治指南》2005版，即坐位收缩压（systolic blood pressure，SBP）≥140 mmHg和（或）舒张压（diastolic blood pressure，DBP）≥90 mmHg。排除以下任一情况：继发性高血压、冠状动脉粥样硬化性心脏病（冠心病）、先天性心脏病、瓣膜性心脏病和其他器质性心脏病，糖尿病、恶性肿瘤、免疫系统疾病以及药物引起的肝肾功能异常也需排除。所有纳入标准的受试者均签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1临床资料采集清晨空腹抽取静脉血，测定生化指标，并记录受试者年龄、体重指数（body mass index，BMI）、SBP、DBP、空腹血糖（fasting plasma glucose，FBG）、三酰甘油（Triglyceride，TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白（low-density lipoprotein-cholestero，LDL-C）和肌酐（creatinine，Cr）等，BMI=体重（kg）/[身高（m）]2。

1.2.2超声心动图检查采用德国Seimens公司S2000彩色多普勒超声诊断仪，探头频率1.7～3.4MHz，测定左心室舒张末期内径（Left ventricular end-diastolic diameter，LVEDD）、舒张期室间隔厚度（Diastolic ventricular septal thickness，DVST）、舒张期左心室后壁厚度（diastolic left ventricular posterior wall thickness，DLVPWT）。计算左心室质量（left ventricular mass，LVM）和左心室质量指数（left ventricular mass index，LVMI）。根据Devereux公式计算[6]。LVH定义为：男性LVMI>125g/m2，女性LVMI>120g/m2。

1.2.3基因型检测提取DNA后进行PCR扩增，正向引物：5'-GCCTCTGACAGTTTATGTAATC-3'，反向引物：5'-GTGCCAACAGATGAGGTTCAC-3'（美国Promega公司）。之后取PCR扩增产物10μl，用限制性内切酶AvaⅡ酶切（美国Promega公司）CD14基因-159位点，待反应终止后，电泳并经紫外灯判断结果拍照。

1.3统计学方法

采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，等位基因和基因型频率用χ2检验，各分组间临床指标比较用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

经Hardy-Weinberg平衡定律检验，CD14启动子-159位点基因型分布符合遗传平衡定律，符合等位基因频率在人群中的分布。

2.1CD14基因型分析

CD14 PCR扩增产物经酶切后基因型有3种，CC型（497 bp），CT型（497、353和144 bp），TT型（353和l44 bp）。测序结果表明该位点存在C-T的基因多态性。见图1、2。

图1　CD14启动子-159位点基因型2%琼脂糖凝胶电泳图

图2　CD14启动子-159位点基因型测序图

2.2朝鲜族患者各组间CD14基因型、等位基因及CC VS CT+TT基因型比较

采用χ2检验，发现朝鲜族患者CD14启动子-159位点基因型在EH-LVH、EH-NLVH及对照组中的分布差异有统计学意义（P<0.05）；等位基因频率在各组人群中的分布差异无统计学意义（P>0.05）；朝鲜族患者CD14启动子-159位点CC基因频率与CT+TT基因频率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1　朝鲜族各组间CD14-159位点各基因型、等位基因及CC VS CT+TT基因型频率分布例（%）

2.3汉族患者各组间CD14基因型、等位基因及CC VS CT+TT基因型比较

采用χ2检验，发现汉族患者CD14启动子-159位点基因型在EH-LVH、EH-NLVH及对照组中的分布差异有统计学意义（P<0.05）；等位基因频率在各组人群中的分布差异无统计学意义（P>0.05）；汉族患者CD14启动子-159位点CC基因频率与CT+TT基因频率比较，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2　汉族各组间CD14-159位点各基因型、等位基因及CC VS CT+TT基因型频率分布例（%）

2.4朝鲜族、汉族EH-LVH组及EH-NLVH组中CC基因型和CT+TT基因型分布

采用χ2检验，发现朝鲜族、汉族EH-LVH组及EH-NLVH组中CC基因型和CT+TT基因型分布差异有统计学意义（P<0.05），证明朝鲜族、汉族EH-LVH组及EH-NLVH组中CC基因型和CT+TT基因型分布相似。见表3。

表3　CC基因型和CT+TT基因型比较例

2.5一般临床资料比较

采用t检验，在朝鲜族和汉族人群中，EH-LVH组、EH-NLVH组和对照组3组比较，受试者在年龄、体重、BMI、FBG、TC、TG、LDL及Cr差异无统计学意义（P>0.05）。EH-LVH组和EH-NLVH组的SBP、DBP要高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。见表4、5。

表4　朝鲜族患者各组间临床资料比较（±s）

表4　朝鲜族患者各组间临床资料比较（±s）

组别年龄/岁体重/kgBMI/（kg/m2）SBP/mmHgDBP/mmHg EH-LVH（n=116）59.211±10.42269.533±12.61524.122±4.357163.404±16.28796.616±10.281 EH-NLVH（n=107）60.128±10.33068.549±11.37524.205±5.001147.590±14.30488.857±11.798对照组（n=108）56.472±9.77166.505±10.16322.187±5.455120.336±13.01968.545±16.207 t值2.1123.8971.9877.0318.892 P值0.7930.3330.1390.0190.005组别FBG/（mmol/L）TC/（mmol/L）TG/（mmol/L）LDL/（mmol/L）Cr/（mmol/L）EH-LVH（n=116）5.704±1.3354.405±1.3331.496±0.6752.799±0.78755.494±35.210 EH-NLVH（n=107）5.823±1.3264.427±1.4551.459±0.8022.711±0.80553.452±39.917对照组（n=108）5.594±1.0904.343±1.7731.511±0.5752.542±1.17647.336±17.507 t值3.5562.9882.0531.2483.051 P值0.2910.1300.9960.8960.549

表5　汉族患者各组间临床资料比较

3 讨论

动脉内中膜厚度的增厚及硬化斑块形成是冠心病、脑血管疾病的重要发病预测指标[7-8]。CD14主要表达在单核巨噬细胞表面，通过刺激单核-巨噬细胞系统释放多种炎症细胞因子，加速蛋白质糖化产物的形成并导致其在血管内堆积，引起血管平滑肌细胞增生和内中膜增厚；其次，通过合成胶原蛋白Ⅲ[9]或者直接作用于管壁细胞，增加血管细胞外基质[10]，引起纤维组织增生及钙质沉着，使内中膜增厚、血栓形成，最终导致动脉硬化及硬化斑块的形成[11-12]。

EH患者外周血管阻力的增高及冠状动脉粥样硬化斑块的形成均可以造成大动脉弹性下降，导致心肌缺血，使心脏前、后负荷增大。为代偿提高心脏的排血量，只能通过增加心肌收缩力和增大心室舒张末期容量来完成，前者导致心肌细胞发生纤维化使心肌肥厚，后者导致心肌细胞发生重构使心腔扩张，当上述改变超过机体的代偿能力时，会引起心肌顺应性及心脏舒张功能下降，最终导致收缩功能下降引发心力衰竭。

虽然不同种族和不同地域之间在遗传背景上的差异是导致疾病易感性不同的一个重要因素，但不可否认的是，环境、生活习惯及其他因素也在疾病的发生过程中起着十分重要的作用。延边朝鲜族地区是中国最大的朝鲜族聚集地，居住人口主要为朝鲜族和汉族，民族团结紧密，生活及饮食习惯也相互渗透、影响，在延边地区居住的汉族人群也多喜食朝鲜族的传统饮食。传统的朝鲜族饮食主要特点就是盐分及糖分所占比例较高，如泡菜等，而高盐高糖饮食则普遍被认为是导致高血压发病的重要原因。因此，笔者假设是环境因素导致了朝汉两个不同民族在CD14-159位点基因多态性分布上出现相似点并共同拥有相同的EH-LVH易感基因，即纯合子CC基因型。

在本研究中，笔者对延边地区朝鲜族和汉族人群CD14启动子上游-159位点进行基因型的调查。研究表明，CD14启动子上游-159位点C-T基因多态性与延边地区朝鲜族及汉族人群EH-LVH相关，其中纯合子CC基因型是延边地区人群发生EH-LVH的遗传学风险因素。

4 结论

CD14启动子-159（C-T）基因多态性与延边地区朝鲜族及汉族人群EH-LVH的形成相关，CC基因型是延边地区人群发生EH-LVH的风险因素。

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（申海菊编辑）

Correlation between CD14 promoter gene-159（C-T）polymorphism and essential hypertension with left ventricular hypertrophy in China Yanbian area*

Xing Jin，Jing-lan Cui，Shou-huan Zheng，Guang-ming Jin
（Department of Radiology，the Affiliated Hospital of Yanbian University，Yanji，Jilin 133000，China）

Objective To investigate the correlation between CD14 promoter gene-159（C-T）polymorphism and essential hypertension with left ventricular hypertrophy（EH-LVH）in Korean and Han populations of China Yanbian area.Methods In the two case-control research，one contained 331 volunteers which were all Korean nationality patients including 116 EH-LVH and 107 EH-NLVH and 108 normal controls，the other contained 311 volunteers which were all Han nationality patients including 103 EH-LVH and 100 EH-NLVH and 108 normal controls.CD14 promoter gene-159（C-T）polymorphism was analyzed by polymorphism chain reaction.Left ventricular mass index was measured and calculated by echocardiography.Body mass index，blood pressure（BP），fasting blood glucose，triglycerides，total cholesterol，low-density lipoprotein and creatinine were recorded.Results There was a difference in genotype distribution frequency between the EH-LVH group and the EH-NLVH group of both Korean and Han patients（P＜0.05）.The CC homozygous genotype frequency of the CD14-159 locus in the EH-LVH group was significantly higher than that in the EH-NLVH group andthe normal control group both in Korean and Han populations（P＜0.05）.Conclusions The distribution of CD14 promoter gene-159（C-T）polymorphism has a significant correlation with EH-LVH both in Korean nationality and Han nationality of China Yanbian area.The CC genotype is a susceptible gene for EH-LVH in Yanbian area.

CD14 promoter-159 gene；nationality；polymorphism；essential hypertension；left ventricular hypertrophy

R 544.11

A

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.17.010

1005-8982（2016）17-0049-05

2016-03-10

国家自然科学基金（No：30560054）

金光明，E-mail；jgm920@sina.com；Tel：13844318641