液相色谱—串联质谱联用技术测定酒类产品中γ—氨基丁酸

伊芳

摘要 建立液相色谱—四极杆串联质谱联用技术，测定酒类产品中γ-氨基丁酸。结果表明：γ-氨基丁酸的浓度在0.01～0.50 mg/L范围内呈现良好的线性关系，相关系数r2=0.999 1。食品中γ-氨基丁酸的检出限为0.003 mg/L，加标回收率在85%以上。该方法快速、灵敏、准确。

关键词 γ-氨基丁酸；酒类；液相色谱-四极杆串联质谱联用技术

中图分类号 TS262.2；TS261.7 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）06-0272-02

γ-氨基丁酸（GABA）是一种天然存在的非蛋白组成氨基酸，广泛分布在动植物体中，是很重要的抑制性神经递质，可改善脑、肾、肝等器官的生理活性，还能促进人体内氨基酸代谢的平衡，调节免疫功能。γ-氨基丁酸在2009年经卫生部批准为一种新资源食品，能够被应用于饮料、巧克力及其制品、烘烤食品、糖果、可可制品等食品中，但不用于婴幼儿食品。《国家食品安全标准食品添加剂使用标准（GB2760-2011）》将γ-氨基丁酸列入“表B.3允许使用的食品用合成香料名单”，并规定：食品用香料、香精在各类食品中按生产需要适量使用。因此，γ-氨基丁酸在食品行业得到更广泛的研究和应用。在酒类产品中，γ-氨基丁酸也得到了广泛研究，酒中添加适当剂量的GABA，起到镇定、醒酒、促进乙醇代谢、增加饮用者酒量的作用。葡萄酒和果酒中添加适当剂量的GABA，配制成GABA酒，可以满足更多消费群体的需求，如适合女性、中老年人群、白领人士享用的中高档花色果酒中可以添加GABA。

GABA具有对电化学、紫外、可见光不灵敏的特点，对其测定不能使用直接测定的方法。关于GABA 的测定，近年来国内外有氨基酸分析仪测定[1-3]、柱层析荧光测定法、比色法[4]、薄层法[5]、纸电泳法[6]、毛细管电泳法[7]、离子色谱法[8]、高效液相色谱法[9- 10]、液质联用法[11]等。但酒基体比较复杂，一般由生物发酵而成，干扰较严重。本文探索液相色谱—质谱联用法测定酒类中γ-氨基丁酸含量的方法，该技术无须衍生化等特殊条件，精密度和准确度符合要求。

1 材料与方法

1.1 试验仪器和试剂

试验用液质联用仪：液相色谱四极杆串联质谱（电喷雾电离源（ESI））安捷伦6410，液相色谱系统包括自动进样器。

试验试剂：γ-氨基丁酸标准样品（含量为99%，SIGMA公司生产），甲醇（色谱纯）。

1.2 仪器分析条件

1.2.1 液相色谱条件。流动相组成：0.1%乙酸水溶液+甲醇（4+6，体积比）；流速：200 μL/min；注射体积：20 μL；柱温：26 ℃。

1.2.2 质谱条件。离子源：电喷雾离子源（ESI）；扫描方式：正离子扫描；检测方式：多反应监测（MRM）；干燥气温度：350 ℃；干燥气流速：10 L/min；雾化器压力；275.8 kPa；毛细管电压：4 000 V。

1.3 试验方法

白酒：直接移取1 mL试样过0.22 μm滤膜；葡萄酒和果酒：移取5 mL试样冷冻离心（10 000 r/min，15 min，2～4 ℃），取上清液过0.22 μm滤膜，根据其含量直接或稀释液相色谱—质谱/质谱测定。

2 结果与分析

2.1 γ-氨基丁酸分析条件确定

γ-氨基丁酸化分子量103，在液质里选择正离子模式，得到母离子[M+1]为103.9，在一定碰撞电压和能量下，失去NH3得到子离子M/Z：86.9，再失去1个H2O得到子离子M/Z：68.9，具体碰撞条件见表1，母离子和子离子在液质中形成见图1，色谱图见图2。

2.2 前处理方法

γ-氨基丁酸在白酒含量较低，一般直接过0.22 μm滤膜进样测定。葡萄酒和果酒冷冻离心（10 000 r/min，15 min，2～4 ℃），去除部分酒石酸盐类、单宁、果胶、色素等，取上清液过0.22 μm滤膜，根据其含量直接或稀释进样。

2.3 线性关系和检出限

配制不同浓度梯度的γ-氨基丁酸溶液，其浓度分别为0.01、0.02、0.04、0.10、0.20、0.50 mg/L。在试验设定条件，将γ-氨基丁酸的质量浓度（mg/L）作为横坐标X，将γ-氨基丁酸的峰面积作为纵坐标Y进行线性回归，确定回归方程为Y=177.4X，回归系数r2=0.999 1，具有良好的线性关系。当信噪比（S/N）=3时，仪器检出限为0.003 mg/L。

2.4 方法的精密度和回收率

取不含γ-氨基丁酸的白酒10 mL作为空白基质，分别添加5 mg/L标液0.08、0.20、0.40 mL共3组，每组6份，进行平行试验。按照试验方法进行前处理和仪器分析测定，计算回收率和精密度试验数据，结果见表2。

从表2可以看出，采用该方法能够使回收率达到85%以上，相对标准偏差RSD小于6%。采用该方法能够获得较高的测量精密度和准确度。

2.5 樣品测定

依据《国家食品安全标准 食品添加剂使用标准（GB2760-2014）》，化学合成的γ-氨基丁酸可作为在食品生产中能够作为香料使用，但要控制使用量和使用范围。在白酒中，γ-氨基丁酸是按生产需要适量使用。在市场抽取白酒样品近50组，运用液相色谱—四极杆串联质谱联用技术测定，共检出5组样品含有γ-氨基丁酸，含量为0.1～0.8 mg/L。

3 结论

运用液相色谱—四极杆串联质谱联用技术测定酒类中γ-氨基丁酸，当浓度在0.01～0.50的范围内，表现出良好的线性关系。该方法具有前处理方法简单、测定过程快速、灵敏度高、测定结果准确等优点。

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