正交试验优选五指毛桃中补骨脂素的提取工艺

叶碧颜　彭小敏　邓广海

1.广州市天河区中医医院，广东　广州　510665；2.广东省中医院，广东　广州　518021



正交试验优选五指毛桃中补骨脂素的提取工艺

叶碧颜1彭小敏2邓广海2

1.广州市天河区中医医院，广东广州510665；2.广东省中医院，广东广州518021

目的：考察五指毛桃中补骨脂素的最佳提取方式。方法：采用正交试验优选提取条件，应用Kromasil 100-5-C18 色谱柱(250 mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇-水(55∶45)，流速为1.0mL/min，检测波长为246nm，柱温为30℃。结果：采用50%甲醇的超声处理40min，补骨脂素的溶出度最大；补骨脂素的线性范围为83.39～1334.18μg(r=0.9997)，样品的加样回收率为103.36%，RSD为2.17%。结论：本方法简便快速，回收率、重复性良好，可用于五指毛桃中补骨脂素的提取与检测。

五指毛桃；补骨脂素；正交试验；高效液相色谱法

五指毛桃又名土北芪、五指牛奶、南芪，为桑科植物粗叶榕(FicushirtaVahl.)的干燥根。广泛分布于广东、广西、云南等地，具有舒筋通络、益肺止咳、健脾利湿的功效[1]，是岭南常用药之一。长期以来，学者对五指毛桃的药用历史沿革、物种演化、生态环境、药理活性、化学成分及质量标准的制定等都进行过研究，但研究不够深入细致[2-4]，《广东省中药材标准》对五指毛桃的质量控制仅限于性状鉴别和TLC鉴别。为进一步完善五指毛桃的基础研究，实验对五指毛桃中补骨素的提取方式进行优化，采用正交试验优选出最佳的提取条件，为五指毛桃的开发利用提供了一定的实验依据。

1　仪器和材料

1.1仪器Agilent1260高效液相色谱(配备自动进样仪)；BS110S万分之一天平(赛多利斯)；BS200S-WEI千分之一天平(赛多利斯)；XP26百万分之一天平(METTlER TOlEDO)；HWS28型恒温水浴锅(上海一恒科技有限公司)。

1.2材料补骨脂素对照品(批号：110739-200511，中国药品生物制品检定所 )。五指毛桃由广东河源金源绿色生命有限公司提供。甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1检测波长的选择取对照品溶液经过Agilent 1260 DAD检测器紫外全波长扫描，补骨脂素在 246nm吸收比较强，作为检测波长。

2.2色谱条件色谱柱：Kromasil 100-5-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-水(55∶45)；流速：1.0 mL/min；检测波长：246nm；柱温：30℃，进样量：10μL。在此色谱条件下补骨脂素及五指毛桃样品的色谱图见图 1～2 。

2.3对照品溶液的制备取补骨脂素对照品适量，精密称定，分别加甲醇制成250μg/mL的溶液，即得。2.4线性关系考察分别吸取补骨脂素对照品溶液0.5、1、2、4、8、12、165脂，按上述色谱条件进行测定，进样，记录对照品峰面积，X为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得补骨脂素标准曲线：A=0.6867x+ 1.181，r=0.9997。

2.5精密度实验精密吸取同一样品溶液，按上述色谱条件，连续进样6次，以补骨脂素峰面积积分值计算，峰面积的RSD依次为0.84%，表明该方法精密度良好。

2.6重复性实验取同一批样品6份，分别按供试品制备方法制备6份样品溶液，以峰面积积分值计算，补骨脂素峰面积的RSD依次为 2.28%，表明该方法重复性良好。

2.7稳定性实验精密吸取同一样品溶液，按上述色谱条件，在12h内，分别于1、2、4、8、12h测定，测得补骨脂素峰面积的RSD分别为2.34%，表明样品溶液在12h内稳定。

2.8回收率实验精密称取样品6份，每份约0.25g，依次精密加入补骨脂素对照品溶液(121ug/mL)1mL按样品制备方法制备样品溶液，按上述色谱条件进行测定，计算回收率。补骨脂素平均加样回收率分别为103.36%(RSD=2.17%),表明本方法准确可靠。

3　正交试验优化提取工艺条件

在单因素试验的基础上，为了获得最佳工艺条件，利用正交试验法，以提取方式(A)、提取时间(B)及提取溶剂(C)作为3个考察因素，选取3个水平进行试验。采用L9(34)正交表进行正交试验设计，来确定超声提取的最佳提取条件。见表1、2。

表1　五指毛桃提取方式考察正交试验因素水平表

表2　L9(34)正交试验设计及结果

由表2的极差分析结果可以看出，RC>RA>RB，3个因素对五指毛桃中的补骨脂素的影响大小依次为：提取溶剂>提取方式>提取时间。在试验设计范围内，优化得到五指毛桃的最佳提取工艺为A2B2C1，即50%甲醇，超声处理40min，五指毛桃中补骨脂素溶出度最大。

4　讨论

归纳前期化学成分所采用的提取方法[5]，采用正交试验对五指毛桃中补骨脂素的提取方式进行研究，并采用HPLC法测定其含量，为完善五指毛桃提的质量标准提供实验依据。本方法简便快速，回收率、重复性良好，可用于五指毛桃中补骨脂素的提取与检测。

[1] 现代中药学大词典编委会.现代中药学大词典[M]. 北京：人民卫生出版社，2001:371.

[2] 温玲,吴华碧,刘沙,等. 广东不同地区野生或市售五指毛桃中补骨脂素含量的测定[J]. 药物研究, 2008, 5(35): 29-30.

[3] 李明,陈志维,黎玉翠,等. HPLC法测定五指毛桃中补骨脂素和芹菜素的含量[J].中药新药与临床药理, 2009, 20(1): 52-4.

[4] 席萍,黄耀海,黄月纯,等.五指毛桃药材高效液相指纹图谱的实验研究[J]. 时珍国医国药,2009,20(3): 572-3.

[5] 钟兆健,宋粉云,李书渊,等.五指毛桃质量标准的研究[J].中国实验方剂学杂志, 2005, 11(5): 12-4.

(编辑：陶希睿)

In the Different Extracuion Methods on Five Fingers Wild Peach Scurfpea Fruit Contains Test Research

YE Biyan1PENG Xiaomin2DENG Guanghai2

1.Guangzhou Tianhe District Hospital of Traditiond Chinese Medicine,Guangzhou 510665,China;2.Thadituonal Chinese Medicine Hospital of Guangdong Province,Guangzhou 518021,China

Objective To investigate the best extraction method s of Psoralen in Radix Fici simplicissimae. MethodsThe Radix Fici Hirtae by Soxhlet extraction and heat reflux extraction and ultrasonic treatment in three ways to carry on the inspection, at the same time, the effects of the optimal extraction time, the best extraction solvent.Using 100-5-C18 Kromasil (250 mm x 4.6mm, 5 m) chromatography column, the mobile phase was methanol water (55∶45), the flow rate was 1 mL/min, the detection wavelength was 246nm, the column temperature was 30.Resultusing 50% methanol ultrasonic treatment for 40 minutes, the maximum dissolution of psoralen. The calibration range of psoralen was 83.39～1334.18μg (r=0.9997), the recovery rate of sample was 103.36%,RSDwas 2.17%。Conclusion This method is simple and rapid recovery, good reproducibility, can be used to analyze the content of Psoralen in Radix Fici simplicissimae.

Radix Fici Hirtae; Psoralen; Extraction; HPLC

2016-05-27

广东省中医药管理局-五指毛桃质量标准规范化的研究(20152144)。

叶碧颜，女，汉族，主管中药师。

R284

A

1007-8517(2016)16-0027-02