正交法优化白芍炮制工艺的研究

张永豪

黔东南民族职业技术学院，贵州　凯里　556000



正交法优化白芍炮制工艺的研究

张永豪

黔东南民族职业技术学院，贵州凯里556000

目的：通过正交设计实验法优化白芍炮制工艺，筛选出最佳提取工艺。方法：采用正交试验法，对乙醇提取白芍中芍药内酯苷和芍药苷的工艺条件进行研究，以芍药内酯苷和芍药苷含量为综合考察指标；对炮制方法酒炙、蜜麸制、酒润麸炒等主要影响因素进行考察，用HPLC法分析比较不同炮制法对白芍总苷(芍药内酯苷和芍药苷)含量变化的影响。结果：最终确定的较佳酒炙方法为：闷润时间为60min，炮制酒量为15%(每100g药材加15ml酒)，烘制温度100℃，烘制时间60min；蜜麸炙白芍较佳，蜜麸比例为麦麸：蜂蜜：水=10∶5∶1；酒润后麸炒白芍较佳，用酒量为12%。结论：优选出的炮制方法能有效保证白芍中指标性成分含量，为制定其饮片的质量标准以及临床应用提供依据。

白芍；炮制；正交试验；高效液相色谱法

白芍系毛莨科植物芍药(PaeonialactifloraPall.)的去皮干燥根[1-3]，其性微苦，味苦酸[4]，具有养血柔肝，缓中止痛，敛阴收汗的功能。其主要化学成分为单萜类、三萜类、挥发油类及黄酮类化合物等[5]。白芍的质量控制一般以其主要成分芍药苷(Paeoniflorin)为指示成分，而芍药苷也是主要药效成分[6]。白芍炮制后有效成分的作用是目前临床运用的研究热点之一[7-11]。近年来，对白芍常用的生品、清炒品、麸炒品、酒炒品、醋炒品等炮制方法[12]，通过查阅文献发现，对白芍中芍药苷和芍药内酯苷提取工艺研究报道较多[13-14]，为合理提取白芍有效成分提供了一定支撑。因此，研究拟以芍药苷和芍药内酯苷含量为综合考察指标，采用正交试验方法对炮制影响提取工艺的主要影响因素进行系统深入研究，以期获得能够同时兼顾化学和药效学指标的工艺参数，为白芍药材的深度开发利用提供一定的实验基础，同时也为其他中药炮制品的提取工艺提供科学参考。

1　仪器与试药

1.1仪器高效液相色谱仪(日本岛津)；电子分析天平(AB204-S)；HS10260D型号超声波清洗器(天津恒奥科技公司)；SKP-01型号烘箱(湖北黄石市医疗器械厂)。

1.2试药芍药苷对照品(批号：0736-201117，中国药品生物制品检验所)；芍药内酯苷对照品(批号：0532-201159，中国药品生物制品检验所)；乙腈、甲醇为色谱纯；水为娃哈哈纯净水，绍兴黄酒(浙江古越龙山绍兴酒股份有限公司)，其余试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1样品含量测定方法学考察2.1.1色谱条件色谱柱：Agilent-zorbax C18柱(150mm×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)；检测波长：230nm；柱温：25℃；进样量：10μL。对照品，样品色谱图见图1～3。

2.1.2对照品溶液的制备精密称取芍药内酯苷及芍药苷对照品适量，加甲醇制成20μg/mL的对照品溶液。

2.1.3供试品溶液的制备取白芍药材粉末(过60目筛)约0.1g，精密称定，置50mL容量瓶中，加35mL稀乙醇，密塞，摇匀超声处理30min，放冷，用稀乙醇定容至刻度，摇匀，滤过；取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。2.1.4线性关系考察分别精密吸取芍药苷、芍药内酯苷对照品溶液8μL、10μL、12μL、14μL、16μL，注入液相色谱仪，依法测定，以峰面积为纵坐标，芍药苷、芍药内酯苷浓度为横坐标，绘制标准曲线，分别吸取芍药苷对照品溶液8μL、10μL、12μL、14μL、16μL注入高效液相色谱仪，指标成分体积为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算得芍药苷的回归方程为：y=78491x+27847，R2=0.9992；在0.16～0.32μg范围内呈良好线性关系。芍药内酯苷的回归方程：y=24590x+6374.2，R2=0.999；在0.48～0.96μg范围内呈良好线性关系。

2.1.5精密度试验分别精密吸取芍药苷对照品和芍药内酯苷对照品10μL，按上述色谱条件重复进样6次，计算峰面积的积分值。芍药内酯苷峰面积的RSD=0.67%；芍药苷峰面积的RSD=0.83%。结果表明，仪器精密度良好。

2.1.6稳定性试验取供试品溶液分别在2、4、6、8、10、12h时进样10μL，测定峰面积积分值。芍药内酯苷峰面积的RSD=0.95%，芍药苷峰面积的RSD=1.77%，结果表明供试品溶液在12h内稳定性良好。2.1.7重复性试验精密称取同一样品6份，每份约0.1g，按2.3项下方法制备，按上述方法测定。结果芍药内酯苷峰面积的RSD=1.44%，芍药苷峰面积的RSD=2.05%。表明此方法重复性良好。2.1.8加样回收率试验分别精密称取白芍药材粉末9份，每份约0.05g，按80%、100%、120%分别加入芍药苷和芍药内酯苷对照品溶液，按供试品溶液制备方法处理，按上述色谱条件测定；结果芍药苷和芍药内酯苷平均回收率分别为：102.87%、101.84%，RSD分别为：1.03%、1.08%。见表1、2。

表1　芍药苷加样回收试验结果

表2　芍药内酯苷加样回收试验结果

2.2酒炙正交实验设计

2.2.1方法根据炮制工艺，传统锅炒法难以实现对温度的控制，将传统的锅炒改用烘箱烘制，选择可能影响酒炙白芍饮片质量的四个因素：闷润时间、酒量、烘制温度、烘制时间，选用L9(43)正交实验，见表3。各组分取净白芍片，实验安排表依照《中国药典》(2010版)酒白芍项下炮制。

表3　正交实验因素水平表

2.2.2结果取上述酒炙正交试验项下样品按2.1.3项溶液的制备方法制成各供试品溶液。按上述色谱分离条件，进样10μL，测定峰面积，计算含量，结果见表4。

2.2.3结论经SPSS对下表数据分析知，因素B炮制酒量在水平3下对芍药苷的含量存在统计学差异(P<0.05)。根据实验结果分析，最佳的炮制方法为：闷润时间为60min，炮制酒量为15%(每100g药材用15ml酒)，烘制温度100℃，烘制时间60min。酒炙后提高白芍有效成分的提取，通过正交试验优选较佳酒炙白芍的炮制品，对提高药物的疗效具有一定意义。

2.2.4验证实验根据酒炙正交试验得出最佳酒炙炮制条件为2.2.3项结论。取白芍生品按照最佳酒炙炮制条件进行处理，然后取样品按2.1.3项溶液的制备方法制成各供试品溶液。按上述色谱分离条件，进样10μL，测定峰面积，计算含量，结果见表5。

表4　酒炙正交实验结果

表5　酒炙正交实验的验证实验结果

2.3蜜麸制白芍实验

2.3.1方法先用麸∶蜜∶水为10∶10∶1、10∶5∶1、10∶2∶1制不同比例的蜜麸，取10%蜜麸(每100g药材用蜜麸10g)，依照《中国药典》(2010版)麸炒炮制项下进行炮制，用中火将炒锅加热至麸下烟起，即可投入药材，迅速均匀翻动，炒至药材表面黄色或深黄色，取出，摊开晾凉。

2.3.2结果取上述蜜麸炙实验项下样品按2.1.3项溶液的制备方法制成各供试品溶液。按上述色谱分离条件，进样10μL，测定峰面积，计算含量，结果见表6。

2.3.3结论从实验结果可知，用10∶5∶1的蜜麸炒制白芍，其炮制品的芍药内酯苷和芍药苷含量较高，由此可优化和选择白芍的炮制方式。

表6　蜜麸炙白芍实验结果　(n=2)

2.4酒润麸炒白芍实验

2.4.1方法取白芍药材，先将待炮制品分别用12%、15%黄酒闷润60min，再用10%麦麸(每100g药材用麦麸10g)照“麸炙法”项下进行炮制，即得。

2.4.2结果取上述酒润后麸炒项下样品按2.1.3项溶液的制备方法制成各供试品溶液。按上述色谱分离条件，进样10μL，测定峰面积，计算含量，结果见表7。

2.4.3结论从实验结果可知，用12%的酒量，使白芍在酒润后麸炒后，其炮制品的芍药内酯苷和芍药苷含量最高；可多方面增加白芍的炮制方法，从中优选最佳方式。

表7　酒润后麸炒白芍实验结果　(n=2)

3　讨论

实验为使炮制温度便于控制,采用烘箱进行炮制。供试品酒白芍中芍药苷的提取方法按照《中国药典》(2010版)超声提取法进行提取；此外还可用回流提取方法，同时对一批样品进行两种提取方法制得两组供试品溶液，经HPLC法测定，其芍药苷和芍药内酯苷含量各有差异，经过统计学处理提取率基本一致，根据提取工艺的复杂性，故选择超声提取法。本文通过正交试验优化白芍炮制，优选炮制品，以提高药物疗效。试验结果表明，为临床选用蜜麸炒白芍及制定麸炒白芍饮片的质量标准提供了依据并确定了最佳炮制工艺方法；酒润后麸炒白芍结合两种辅料的优点，使炮制过后的白芍更有利于临床使用；探讨白芍的炮制方法，通过正交试验设计进行验证分析，优化出较佳炮制工艺，有利于提高白芍有效成分的提取；优选出的炮制方法能有效保证白芍中指标性成分含量，为制定其饮片的质量标准以及临床应用提供依据。

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(编辑：陶希睿)

The research of radix paeoniea alba processing method

ZHANG Yonghao

Qiaodongnan National Polytechnic,Kaili 556000,China

Objective The orthogonal experimental method radix paeoniae alba was optimized processing technology, selected the best extraction process.By orthogonal test, the ethanol extract of paeonia lactiflora lactone and paeoniflorin in radix paeoniae alba process conditions were studied, with peony lactone glycosides and paeoniflorin content as a comprehensive indicator;Bran system for main processing method of wine, honey and wine embellish bran Fried is intended to explore the main influence factors, using HPLC analysis and comparison of different processing method on radix paeoniae alba total glycosides (paeonia lactiflora lactone and paeoniflorin content changes.Results Better wine for the final main method is: boring time for 60min, processing capacity of 15% (per 100g medicine plus 10ml wine), baking temperature of 100℃, bake time 60min;Honey bran main root of herbaceous peony better bran ratio of wheat gluten: honey: water = 10∶5∶1;After wine embellish bran Fried radix paeoniae alba better use alcohol is 12%.Conclusion Optimization of processing methods can effectively guarantee the major ingredient content in radix paeoniae alba, to develop its yinpian quality standards, and provide evidence for clinical use.

Radix paeoniae alba,Processing;The orthogonal experiment.High performance liquid chromatography

2016-05-21

张永豪(1987-)，男，苗族，在读研究生，助教，研究方向为中药学及民族药苗提取，分析及产品开发等研究。E-mailL:501209935@qq.com

R284

A

1007-8517(2016)16-0023-04