糕点中富马酸二甲酯检测方法的研究

梁宝爱　杨凯

1（国家农副加工产品及白酒质量监督检验中心，山西太原030012）

2（山西省食品质量安全监督检验研究院，山西太原030012）

糕点中富马酸二甲酯检测方法的研究

梁宝爱1*杨凯2

1（国家农副加工产品及白酒质量监督检验中心，山西太原030012）

2（山西省食品质量安全监督检验研究院，山西太原030012）

富马酸二甲酯（Dimethyl fumarate，DMF），又称反丁烯二酸二甲酯，为白色片状或粉末状结晶，易升华，易溶于乙酸乙酯、氯仿、丙酮和醇类。富马酸二甲酯是上世纪80年代开发的一种防霉剂，可抑制多种霉菌且具有抗真菌能力，曾被广泛应用于鱼、肉、蔬菜等食品中。后经试验表明，富马酸二甲酯易水解生成甲醇，对人体的眼睛、皮肤有刺激作用，长期接触会发生皮肤过敏甚至溃烂，经食道吸入可能会对人体肠道、内脏产生腐蚀性损害，特别是对儿童的成长发育造成极大伤害。富马酸二甲酯于2009年被我国食品整治办列入《食品中可能违法添加的非食用物质名单（第二批）》，严厉打击违法添加非食用物质。目前文献报道中关于富马酸二甲酯的常用检测方法有气相色谱法、气相色谱-质谱联用法和高效液相色谱法。为防止不法食品企业继续违法添加非食用物质，建立快速、高效、准确的富马酸二甲酯检测方法对食品行业的监管和健康发展有很重要的意义。

1　材料与方法

1.1材料

富马酸二甲酯，纯度99.5%，0.25 g，德国Dr. Ehrenstorfer GmbH；甲醇，色谱纯；乙酸铵，分析纯；四丁基溴化铵，分析纯。

1.2主要仪器

Agilent1260高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测器（DAD），美国Agilent公司；KQ5200DE数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；有机相滤膜，13 mm×0.22 μm，上海兴亚净化材料厂；微孔滤膜，孔径0.45 μm，有机系滤膜。

1.3试验方法

1.3.1标准溶液和试剂溶液的配制

富马酸二甲酯标准储备液：准确称取富马酸二甲酯标准物质0.100 5 g，用甲醇充分溶解，并稀释定容于100 mL的容量瓶中，配制成浓度为1.00 mg/mL的标准储备液，贮存于0℃～4℃冰箱中，使用时用甲醇稀释成标准工作液。

标准工作液（10.0 μg/mL）：准确吸取1.00 mL标准储备液至100 mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，贮存于0℃～4℃冰箱中，该溶液每毫升含富马酸二甲酯标准物质10.0 μg，有效期14 d。

乙酸铵缓冲溶液（0.02 mol/L，含0.008 mol/L四丁基溴化铵）：称取1.54 g乙酸铵，2.60 g四丁基溴化铵以适量水溶解后，加水至1 000 mL，过孔径0.45 μm滤膜。

1.3.2样品前处理

准确称取制备均匀的糕点试样5.0 g（精确至0.01 g）于50 mL具塞比色管中，加入10 mL甲醇，用超声波萃取20 min后冷却至室温，再超声20 min，冷却后用甲醇定容至25 mL，混匀，上清液经孔径0.45 μm滤膜过滤后，进样测定。

1.3.3色谱条件

色谱柱Eclipse XDB-C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；柱温：30℃；流动相：甲醇+乙酸铵溶液（55+45，V/V）；流速：1.0 mL/min；波长：230 nm；进样量：10 μL。

根据保留时间定性，外标峰面积法定量。

1.3.4标准曲线的制作

准确吸取标准工作液1.0 mL、2.0 mL、4.0 mL、6.0 mL、10.0 mL至10 mL容量瓶中，分别用甲醇定容至10 mL。富马酸二甲酯标准溶液质量浓度分别为1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、4.0 μg/mL、6.0 μg/mL、10.0 μg/mL，经孔径0.45 μm微孔滤膜过滤后分别注入液相色谱仪中，测定相应的峰面积，以标准工作液的质量浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

1.3.5试样的测定

将制备好的试样溶液注入液相色谱仪中，得到峰面积，根据标准曲线确定待测液中富马酸二甲酯的含量。

1.3.6结果计算

试样中富马酸二甲酯含量公式：

式中：X——试样中富马酸二甲酯的含量，mg/kg；

c——由标准曲线求出样液中富马酸二甲酯的质量浓度，μg/mL；

V——样液最终定容体积，mL；

m——样品质量，单位为克，g；

1 000——换算系数。

2　结果与讨论

2.1检测波长的选择

取一定浓度的标准溶液在190 nm～400 nm波长范围内扫描，结果显示在220 nm处富马酸二甲酯紫外吸收最强，同时考虑到甲醇在210 nm左右对紫外的最大吸收，为了减少甲醇的干扰故选择检测波长为230 nm。

2.2流动相及比例的选择

分别选取乙酸铵和四丁基溴化铵、乙酸钠和四丁基溴化铵作为缓冲溶液进行试验。试验结果表明，流动相对组分的分离没有明显差异，因乙酸钠和四丁基溴化铵还需调节pH，故选择操作相对简便的乙酸铵和四丁基溴化铵作为缓冲溶液。

分别对甲醇-缓冲溶液按不同体积比（55∶45、30∶70）进行试验。试验结果表明，当体积比为55∶45时峰形最好。

2.3样品前处理的优化

分别用氨化甲醇和甲醇作为提取溶剂对加标样品进行前处理，进行6次测定，其回收率甲醇为102.2%，氨化甲醇为89.3%。故选择甲醇作为样品提取剂。

2.4标准曲线和线性范围

将富马酸二甲酯储备液用甲醇稀释配制成质量浓度为1.0 μg/mL、2.0 μg/mL、4.0 μg/mL、6.0 μg/mL、10.0 μg/mL的标准溶液，在1.3色谱条件下测定，对色谱峰面积x和对应的富马酸二甲酯质量浓度y进行线性回归，得线性方程y=22.485 03x-0.326 15（R2=0.999 97）。测定结果表明，在1.0 μg/mL～10.0 μg/mL的范围内，峰面积与质量浓度呈线性关系，符合定量要求。富马酸二甲酯标准曲线如图1所示。

图1　富马酸二甲酯标准曲线图

2.5加标回收试验和精密度试验

选取不同基质无本底值的糕点样品6批次，进行3水平添加回收试验，每个添加水平取6个平行样。同时与现有标准方法NY/T 1723—2009《食品中富马酸二甲酯的测定高效液相色谱法》进行比较，试验结果见表1。

表1　糕点中富马酸二甲酯的加标回收率及相对偏差

由表1可见，根据GB/T 27404—2008实验室质量控制规范，本方法的相对标准偏差（RSD）均符合要求，其回收率在82.5%～106.8%，准确度和精密度均满足富马酸二甲酯的检测要求。而NY/T 1723—2009方法回收率均低于80%，精密度相对较差，且对于该标准方法的检出限加标也无法检出。2.6方法检出限

方法的检出限和定量限为方法灵敏度的指标，将标准溶液连续稀释后进行不同样品、空白样品的加标回收，以3倍信号噪声比对应的质量浓度为检出限，以10倍信号噪声比所对应的质量浓度为定量限。根据不同样品的基质效应，加入1.0 μg/mL的标准溶液进行分析测定，得S/N=2.9，同时将添加5.0 mg/kg的样品进行测定，得S/N=2.5。因此，该方法检出限为5.0 mg/kg。

3　结论

通过大量试验，本方法采用高效液相色谱法测定糕点中的富马酸二甲酯，对糕点进行前处理方法的确认、方法线性范围、方法检出限、精密度加标回收及现有方法比较等一系列试验，结果表明，该方法线性范围宽、准确度高、重现性好，快速、灵敏，适用于糕点中富马酸二甲酯含量的测定。

［1］陈明，梁春穗，黄伟雄.广式月饼中富马酸二甲酯残留量测定方法［J］.中国卫生检验杂质，2011，11（1）：45.

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［3］阚周密，王建阳，王戏丹.气相色谱—质谱联用法测定食品中富马酸二甲酯的含量［J］.食品科学，2007，28（1）：247-249.

［4］郑晓冰，赵质创，肖晓槟.高效液相色谱法测定食品中的富马酸二甲酯［J］.化学分析计量，2011，20（3）：23-25.

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Study on the detection methods ofdimethyl fumarate in pastry

LIANGBaoai1*YANGKai2

1（National farm products and liquor quality supervision and inspection center，Shanxi Taiyuan 030012，China）
2（Shanxi province food quality satety supervision and inspection institute，Shanxi Taiyuan 030012，China）

采用高效液相色谱法测定糕点中的富马酸二甲酯。试验结果表明，该方法的检出限为5.0 mg/kg，线性范围为1.0 μg/mL～10.0 μg/mL（R2=0.999 97），加标回收率为82.5%～106.8%，相对标准偏差（RSD）＜3.0%。该方法能快速、准确的测定糕点中富马酸二甲酯的含量。

糕点；富马酸二甲酯；检测；高效液相色谱

A method for the determination ofdimethyl fumarate（DMF）in pastrywas studied.The results show that the detection limit of the method was 5.0 mg/kg，the linear was 1 μg/mL～10 μg/mL（R2=0.999 97），the recovery rate was 82.5%～106.8%and the relative standard deviation（RSD）is less than 3.0%.This method can determine the dimethyl fumarate in pastry rapidlyand accurately.

pastry；dimethyl fumarate；detection；HPLC

TS213.2+3

A

1673-6044（2016）03-0058-03

10.3969/j.issn.1673-6044.2016.03.016

*梁宝爱，女，1963年出生，1983年毕业于太原理工大学分析专业，正高级工程师。

2016-07-26