电针治疗对颞下颌关节紊乱综合征大鼠颞下颌关节内炎症因子TNF-α、IL-1β的影响

王晶，刘明，唐纯志.广州中医药大学第二临床医学院，广东 广州 50405 .广州中医药大学针灸康复临床医学院，广东 广州 50405

电针治疗对颞下颌关节紊乱综合征大鼠颞下颌关节内炎症因子TNF-α、IL-1β的影响

王晶1，刘明2，唐纯志2
1.广州中医药大学第二临床医学院，广东 广州 510405 2.广州中医药大学针灸康复临床医学院，广东 广州 510405

目的：观察电针治疗对颞下颌关节紊乱综合征大鼠颞下颌关节内炎症因子肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）的影响。方法：通过拔除大鼠右上颌磨牙，人为造成大鼠偏侧咀嚼，建立大鼠颞下颌关节紊乱综合征（TMD）模型。实验分电针组、空白组、模型组3组，按组进行相应的干预然后收集血清和组织匀浆采用酶联免疫吸附反应（ELISA）法检测TNF-α、IL-1β水平。结果：与空白组血清炎症因子含量进行比较，模型组血清内IL-1β、TNF-α含量大幅升高（P＜0.05）；与模型组比较，电针组血清内IL-1β、TNF-α含量降低（P＜0.05）。与空白组颞下颌关节组织匀浆中炎症因子的含量进行比较，模型组中IL-1β、TNF-α的含量升高（P＜0.05）；与模型组比较，电针组颞下颌关节组织匀浆中IL-1β、TNF-α含量降低（P＜0.05）。结论：电针能够有效降低大鼠血清中IL-1β、TNF-α等促炎因子的表达水平，抑制模型大鼠颞下颌关节炎的指数，具有一定抗炎消肿镇痛作用。

颞下颌关节综合征；电针治疗；炎症因子；大鼠

颞下颌关节紊乱综合征（temporomandibularjoint dysfunction syndrome，TMJDS），又称颞下颌功能紊乱病（temporomandibular disorders，TMD），该疾病包括了颞下颌关节和颌面肌肉的症状，主要有颞下颌关节弹响、颌面部疼痛与下颌运动障碍，同时可伴有耳部、肩颈部和头部的疼痛。TMJDS目前已被世界卫生组织（WHO）列为影响人类健康的第四位口腔流行病，诊断的依据是患者的临床症状或体征，发病较为隐匿，其症状可以轻到患者意识不到这是一种疾病，也可以重到疼痛难忍，张口受限，不能正常咀嚼。TMJDS的人群发病率约为25%～60%［1］，对人类正常生活的影响与日俱增。TMJDS可在其血清和关节液中发现肿瘤坏死因子 -α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）的存在，作为炎症因子参与的关节炎症反应和髁上组织的分解破坏的过程已被多数学者认可［2～4］。TMJDS多为各种原因引起颞下颌关节周围肌群痉挛而造成局部疼痛，张口运动障碍，通过电针的电流刺激可以明显解除咀嚼肌痉挛，调节神经兴奋性，改善韧带和关节的紧张度，使症状消除。为探讨电针治疗与血清及关节组织匀浆中TNF-α、IL-1β含量之间的关系，本研究提取实验大鼠血清和颞下颌关节及组织匀浆采用血清酶联免疫吸附法（ELSA）进行炎症因子检测，现将结果报道如下。

1　材料与方法

1.1实验材料选用SPF级SD大鼠共30只，雌雄各半，体重180～220 g，大鼠身体状况良好，牙列完整，无牙齿磨耗以及牙颌畸形。动物合格证号：44005800000881，许可证号：SYXK（粤）2013-0001，购自广州中医药大学实验动物中心，由广州中医药大学实验动物中心饲养。饲养期间给予啮齿类动物标准颗粒饲料（由实验动物中心提供）及自由饮水。

1.2药物及试剂注射用头孢拉定（由广州中医药大学卫生所提供，规格1.0 g，10瓶装，批号：31001202）；IL-1β、TNF-α ELISA试剂盒，武汉新启迪生物科技有限公司，批号分别为：EIA05874r、EIA06460r。

1.3主要仪器电针治疗仪（青岛鑫升实业有限公司）；SPX型智能生化培养箱（宁波江南仪器有限公司）；MultifugellR酶标仪（美国Thermo公司）；Wellwash 4MK2自动洗板机（美国Thermo公司）；Ascent高速离心机（美国Thermo公司）、匀浆机IKA-WERKE（德国GMBH责任有限公司）；超低温冰箱702（美国Thermo公司）。

1.4实验分组与TMJDS模型制备30只大鼠随机分为电针组、空白组、模型组各10只。模型组和电针组参照张娟等［5］拔牙造成咬合紊乱，从而改变关节负荷造成TMJ损伤，和付斌等［6］拔牙创愈合模型的实验方法，建立大鼠TMJDS模型。肌肉注射10%水合氯醛（0.35 mL/100 g）麻醉后，仰卧固定四肢，另用固定绳勾住大鼠的上下切牙并往上下方向拉开暴露大鼠口腔，进行口腔消毒，用拔牙挺作为拔牙工具。拔牙方法为首先用探针分离大鼠牙龈然后用止血钳和镊子寻找并固定磨牙位置，确定位置后用微创拔牙挺挺松右上颌3颗磨牙，然后用镊子和止血钳将磨牙分别拔出。肌肉注射头孢拉定防止感染。上述处置完成后大鼠全部苏醒，从实验当天起即喂食常规鼠料和水。

1.5电针治疗造模2周后进行电针治疗，针刺取穴为“下关”、“太阳”穴，穴位定位参照李忠仁主编的《实验针灸学》，太阳穴位于外眼角后方颞窝中，下关穴位于颞下颌关节下方，用30号0.5寸华佗牌毫针针尖向下斜刺0.5～1.0 cm。导线连接双侧“太阳”和“下关”穴，治疗强度1 mA，频率10 Hz，脉宽1 ms，刺激15 min，每天1次，治疗时间为2周，模型组和空白组大鼠每天抓握5min，抓握方式同电针组治疗时的抓握方式，抓握方式为常规抓取方法，主要作用为排除治疗组的抓握干扰。

1.6血清样本制备末次治疗后禁食不禁水24 h，用眼眶后静脉丛真空采血管采血法进行采血，每只大鼠采血1.5 mL。真空采血管配样分离血清，离心速度3000 r/min。采集完血清后放入-80℃冰箱保存备用。

1.7组织匀浆样本制备采血后断颈处死大鼠，剪头取出颞下颌关节及组织，按组织重量与生理盐水1∶9的质量分数混合用匀浆机进行研磨后制成匀浆液，3000 r/min离心15 min，温度4℃，取上清液1mL冻存于-80℃冰箱内备用。

1.8炎症因子TNF-α、IL-1β的采集和检测取出血清和组织匀浆待测样本和ELISA试剂常温解冻，严格按照ELISA试剂盒说明书进行操作。

1.9统计学方法采用SPSS19.0 for Windows软件进行统计学处理，根据对资料的分析，多组均数的比较采用单因素方差分析，计量资料以（±s）表示，组间比较方差齐时选择LSD法，方差不齐时选择Dunnetts T3法；检验水准α=0.05。

2　结果

2.1各组大鼠血清IL-1β、TNF-α表达比较见表1。与空白组血清炎症因子含量进行比较，模型组血清内IL-1β、TNF-α含量大幅升高（P＜0.05）；与模型组比较，电针组血清内IL-1β、TNF-α含量降低（P＜0.05）。

2.2各组大鼠组织匀浆IL-1β、TNF-α表达比较见表2。与空白组颞下颌关节组织匀浆中炎症因子的含量进行比较，模型组中IL-1β、TNF-α的含量升高（P＜0.05）；与模型组比较，电针组颞下颌关节组织匀浆中IL-1β、TNF-α含量降低（P＜0.05）。

表1　各组大鼠血清IL-1β、TNF-α表达比较（±s）　mmol/L

表1　各组大鼠血清IL-1β、TNF-α表达比较（±s）　mmol/L

与空白对照组比较，①P＜0.05；与模型组比较，②P＜0.05

组别空白组模型组电针组n 10 10 10 IL-1β 39.45±27.44 259.60±64.55①130.50±31.52①②TN F-α 113.50±24.07 390.75±7.79①238.62±13.84①②

表2　各组大鼠组织匀浆IL-1β、TNF-α表达比较（±s）mmol/L

表2　各组大鼠组织匀浆IL-1β、TNF-α表达比较（±s）mmol/L

与空白对照组比较，①P＜0.05；与模型组比较，②P＜0.05

3　讨论

近年来，对TMJDS病因机制的研究已集中在神经免疫学尤其是各种促炎细胞因子的解释，而IL-1β、TNF-α是TMJDS病因和发展中最主要的致炎细胞因子［7］。电针治疗对TMD模型大鼠血清和颞下颌关节组织匀浆中炎性因子的影响，通过检测3组大鼠血清发现，电针治疗能有效降低TMD模型大鼠血清中炎性因子IL-1β和TNF-α的含量，抑制局部炎症反应，进而控制TMJDS的病变过程。

TMJDS患者可引起颞下颌关节非特异性炎症反应，关节内炎症因子高表达是TMJDS的一个主要病理变化，抑制炎症因子的表达在缓解和治疗炎症反应的过程中起关键作用。各种伤害性刺激均可引发关节组织内感觉神经元合成和释放多种炎性神经肽，从而刺激周围组织的多种细胞合成释放IL-1β、TNF-α为主的多种致炎细胞因子加重局部炎症反应。中医学理论认为TMJDS属于痹症、颊痛、颔痛等范畴，临床主要表现为疼痛，而治疗痛症乃中医传统针灸之强项，临床常用电针疗法来针对性治疗TMJDS，电针治疗能够发挥其通经活络、镇静止痛的优势，电针对TMJDS的治疗效果已得到临床的广泛认可［8］。综上所述，电针治疗能够有效降低TMJDS大鼠血清和颞下颌关节中IL-1β、TNF-α的含量，降低促炎因子的表达水平，从而提高大鼠抗炎因子的表达水平。本研究的实验结果表明电针治疗干预后电针组大鼠的炎症因子IL-1β、TNF-α含量明显降低（P＜0.05），差异有统计学意义（P＜0.05）。电针治疗能够降低TMJDS大鼠颞下颌关节内的炎症因子IL-1β、TNF-α的含量，从而有效降低IL-1β、TNF-α等促炎因子的表达水平，提高IL-1β、TNF-α等抗炎因子的表达水平。由炎症因子的对比可见，电针治疗可明显抑制大鼠颞下颌关节内的炎症指数，具有一定的抗炎消肿、镇静止痛的作用。降低颞下颌关节内血清中IL-1β、TNF-α的含量可能是电针治疗TMJDS抗炎镇痛的作用机理之一。

［1］Wabeke KB，Hansson TL，Hoogstraten J，et al.Temporomandibular joint clicking：A literature overview［J］. J Craniomandib Disord Facial Oral Pain， 1989， 3：163.

［2］Takahashi TT，Kondoh M，Fukuda Y，et al.Proin flammatory cytokines detectable in synovial fluid from patients with temporomandibular disorder［J］.Oral Surg OralMed OralRadiolEndod，1998，85：135-141.

［3］傅开元，马绪臣，张震康，等.颞下颌关节紊乱综合征关节液白细胞介素1活性及其临床意义［J］.北京医科大学学报，1993，25：403-405.

［4］Kubota E，Kubota T，Matsumoto J，et al.Synovial fluid cytokines and proteinases as markers of temporoman dibular joint disease［J］.J Oral Maxillofac Surg，1998，56：192-198.

［5］张娟，张志光.颞下颌关节紊乱病实验动物模型的研究进展［J］.国外医学口腔医学分册，2005，32（6）：446-448.

［6］付斌，曾芸婷，唐国华.锂盐对大鼠拔牙创愈合的影响［J］.中国口腔颌面外科杂志，2012，10（1）：13-17.

［7］梁芮溦.IL-1在颞下颌关节紊乱病发病机制中作用的研究进展［J］.中华口腔医学研究杂志：电子版，2008，2（6）：628-632.

［8］徐凯，电针围刺治疗颞下颌关节功能紊乱综合征疗效观察［J］.上海针灸杂志，2010，29（5）：303-304.

（责任编辑：骆欢欢，李海霞）

R684

A

0256-7415（2016）07-0290-03

10.13457/j.cnki.jncm.2016.07.123

2016-02-11

王晶（1970-），女，副主任医师，主要从事急危重症工作。

唐纯志，E-mail：jordan664@163.com。