白头翁汤及拆方对模型小鼠抗炎作用的实验研究

杨昌文

（三峡大学第一临床附属医院，湖北省宜昌市中心人民医院，湖北　宜昌443000）

白头翁汤及拆方对模型小鼠抗炎作用的实验研究

杨昌文

（三峡大学第一临床附属医院，湖北省宜昌市中心人民医院，湖北宜昌443000）

目的研究白头翁汤及组方药物对小鼠二甲苯耳廊肿胀的抗炎作用，比较几种抗炎效果的差异，为临床提供试验依据。方法采用常规的炎症模型，主要为二甲苯造模进行药效学观察。取昆明种小鼠70只，随机分成7组，分别灌胃白头翁汤、黄连、黄柏、秦皮、白头翁水提物，以阿司匹林为阳性对照，以生理盐水为空白对照。各组于末次给药前测量小鼠右耳厚度，给药后0.5 h在小鼠右耳涂20μL致炎，分别在涂后0.5、1、2、3、4 h测量小鼠右耳厚度，计算肿胀值差异进行组间比较。取小鼠60只，分为白头翁汤组、黄连组、黄柏组、秦皮组、白头翁组、模型对照组，腹腔注射大肠杆菌复制腹泻模型。观察6 h内小鼠的腹泻情况。结果白头翁汤、黄连、黄柏、秦皮、白头翁分别具有一定的抗炎作用。在对抗二甲苯所致的小鼠炎性反应中，其抗炎时间从长到短分布顺序为白头翁汤、黄连＞黄柏＞秦皮、白头翁。白头翁汤组稀便率及平均腹泻次数均低于各拆方组。结论白头翁汤在抗炎方面作用佳，且以黄连、黄柏为主要抗炎物质发挥较好抗炎效果。白头翁汤抗腹泻能力优于各拆方组。

白头翁汤大黄拆方抗炎腹泻小鼠二甲苯

《伤寒论》中白头翁汤主要组成为白头翁、黄连、黄柏、秦皮。全方清热解毒，凉血止痢，为热毒血痢之首选。方中白头翁为君药，性苦寒，归大肠经，效在清热解毒、凉血止痢，其清肠胃之湿热与血分之热毒效甚佳，为治疗热毒血痢之要药［1］。黄连泻火解毒，燥湿厚肠，配合黄柏清热燥湿，两药为臣药，助白头翁以发挥清热解毒治痢之效［2］。秦皮性苦涩而寒，入大肠经，为佐药，既助上述3药清热燥湿，又起收涩止痢之功。另外，白头翁汤中包含的小檗碱、药根碱、巴马汀、白头翁素、秦皮甲素乙素等物质有明确的杀菌、抗炎、解热镇痛及抗癌效果［3］。近来年，随着全方及拆方对治疗尚未溃破的淋巴结核、神经性皮炎、坏死性肠炎、降血糖、抗肿瘤等方法的不断深入研究，本试验对白头翁汤及拆方的抗炎作用进行了初步探讨，为白头翁汤的临床应用提供试验依据。

1　材料与方法

1.1实验动物昆明种小鼠，普通级，共130只，雌雄各半，体质量18～22 g，来源于三峡职业技术学院医学院实验动物中心。

1.2实验药物白头翁汤中白头翁15 g，黄连6 g，黄柏12 g，秦皮12 g。其余各单药组为白头翁50 g，黄连30 g，黄柏50 g，秦皮50 g。回流水提法进行两次提取：第1次，30min，纱布过滤；第2次，20min，纱布过滤。滤液合并静置，取上清液加热浓缩并水浴蒸干。再80℃真空干燥，获得干浸膏备用。最终各组的得膏率为：白头翁汤15.0%，白头翁14.6%，黄连17.7%，黄柏9.8%，秦皮18.0%。最终配制为每种药物1mL溶液中含有1 g生药。所有药材均源于安徽亳州沪谯中药饮片厂，批号：20050922。

1.3试剂与仪器二甲苯（蚌埠化学试剂厂，分析纯，批号030519）；复方阿司匹林肠溶片（南京白敬宇制药有限责任公司，国药准字H32026500）。HH．S-D电热恒温水浴锅，上海跃进医疗器械厂；FA-1004N电子天平，上海天平仪器厂；2K-82B型真空干燥器，上海试验仪器总厂；千分卡尺等。

1.4白头翁汤及拆方对小鼠二甲苯性耳廓肿胀的作用

1.4.1分组与给药小鼠称体质量后随机编号，分成7组，每组各10只。分别是白头翁汤组、黄连组、黄柏组、秦皮组、白头翁组、模型对照组以及阿司匹林组。前5组中药组分别按10g生药/kg灌胃。模型对照组小鼠则予等容积生理盐水灌胃，阳性对照组予以阿司匹林（0.3 g/kg）灌胃。每日1次，共3 d。

1.4.2观察指标小鼠右耳厚度应用千分卡尺测3次取平均值作为正常值。末次给药后30 min，每只小鼠右耳背均匀涂抹二甲苯20μL，再计时，于涂二甲苯后0.5、1、2、3、4 h准时测量每只小鼠右耳厚度3次，取平均值记录。以肿胀度表示炎症程度：肿胀值=肿胀后右耳厚度-肿胀前右耳厚度。肿胀值为致炎前后厚度差。1.5白头翁汤及拆方对小鼠大肠杆菌致腹泻的作用

1.5.1分组与给药60只小鼠称体质量后随机编号，每组各10只，分别为白头翁汤组、黄连组、黄柏组、秦皮组、白头翁组、模型对照组。各组按10 g生药/kg灌胃药物，白头翁汤组灌胃全方药液，黄连组灌胃单方黄连药液、黄柏组灌胃单方黄柏药液、秦皮组灌胃单方秦皮药液、白头翁组灌胃单方白头翁药液、模型对照组灌胃生理盐水。每日1次，共3 d。

1.5.2大肠杆菌致腹泻模型参照赵荣山等的方法，末次给药后禁食水12 h后，每只小鼠按0.2 mL/10 g体质量腹腔注射108个/mL的大肠杆菌菌液，以建立大肠杆菌致腹泻模型。造模4h后开始动物开始出现腹泻症状，致泻率100%。

1.5.3观察指标造模后将小鼠入铺有滤垫纸的单独动物笼内，观察6 h内小鼠的腹泻情况，每30分钟更换一次滤垫纸，计数滤垫纸上粪便次数。小鼠粪便分为5种：（1）正常粪便；（2）粪便基本成形，含水多；（3）不成形粪便；（4）水样便；（5）血液便。（1）（2）判定为正常，（3）（4）（5）判定为腹泻。计算各组小鼠腹泻数及稀便率。稀便率（%）=每只小鼠稀便数/每只小鼠总便数×100%。

1.6统计学处理应用SPSS17.0统计软件分析。计量资料以（表示，组间采用t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结　果

2.1白头翁汤、黄连、黄柏、秦皮、白头翁提取物对小鼠二甲苯性耳廓肿胀的作用比较见表1。据表中数据统计分析可见，白头翁汤组、黄连组在4 h的实验中与对照组相比较，均差异显著（P＜0.01）。阿司匹林组和黄柏组持续在2 h内与对照组相比较，差异极显著。在第3小时差异显著（P＜0.05或P＜0.01），到第4小时差异不显著（P＞0.05）。秦皮组和白头翁组在1 h内与对照组相比较，差异极显著。第2小时时差异显著（P＜0.01），之后差异不显著（P＞0.05）。结果表明，白头翁汤组、黄连组、黄柏组、秦皮组、白头翁组，均有抗炎作用。白头翁汤组、黄连组抗炎作用持续较长，黄柏组与阳性对照组抗炎作用相似，持续时间较短。秦皮组、白头翁组抗炎持续时间低于阳性对照组。

表1　白头翁汤、黄连、黄柏、秦皮、白头翁提取物对小鼠二甲苯性耳廓肿胀的作用（μm，

表1　白头翁汤、黄连、黄柏、秦皮、白头翁提取物对小鼠二甲苯性耳廓肿胀的作用（μm，

与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

组别n剂量（g/kg）　正常耳厚度　二甲苯致小鼠耳廓肿胀值0.5 h 1 h 2 h 3 h 4 h模型对照组10-238.82±22.81 106.52±19.87 114.87±29.96 80.87±21.17 66.63±19.54 42.57±22.43阿司匹林组10 0．3 240.45±23.73 56.75±24.62**50.28±30.54**40.18±13.32**34.86±32.74*32.97±29.87*白头翁汤组10 10 238.75±22.73 60.05±18.90**44.54±18.42**30.54±19.47**30.23±17.87**24.43±15.86**黄连组10 10 234.08±21.73 58.27±33.54**40.19±16.37**32.93±14.76**28.37±27.86**24.32±18.35**黄柏组10 10 236.78±18.45 54.91±25.57**42.75±17.54**38.39±17.50**32.34±28.68*28.27±17.5秦皮组10 10 238.44±22.45 58.67±40.45**54.67±13.59**42.85±28.61**3.66±32.06 32.34±14.86白头翁组10 10 232.81±21.54 66.78±19.41**54.37±19.94**42.87±37.45**38.07±22.46 30.23±17.53

2.2白头翁汤、黄连、黄柏、秦皮、白头翁提取物对小鼠大肠杆菌致腹泻的作用比较见表2。白头翁汤组稀便率及平均腹泻次数均低于各拆方组（P＜0.05）。

表2　白头翁汤、黄连、黄柏、秦皮、白头翁提取物对小鼠大肠杆菌致腹泻的作用比较（

表2　白头翁汤、黄连、黄柏、秦皮、白头翁提取物对小鼠大肠杆菌致腹泻的作用比较（

与模型对照组比较，*P＜0.05；与白头翁汤比较，△P＜0.05。

组别　稀便率（%）平均腹泻次数2 h 4 h 6 h模型对照组78.20 6.51±2.01 8.23±3.10 12.19±3.99白头翁汤组10 50.78*3.53±0.2*4．88±1．08*6．26±2．17*黄连组10 59.91*△5.88±1.18 6.51±2.34*△7.29±2.97*△n 10黄柏组10 62.13*△5.56±1.07 6.37±2.78*△8.90±3.23*△秦皮组10 67.85*△6.01±1.25 7.55±2.34△10.21±3.17*△白头翁组10 58.23*△4.59±0.98*6.02±2.01*△8.74±3.00*△

3　讨　论

白头翁汤由白头翁、黄连、黄柏以及秦皮组成。方药简洁，但各药配伍严谨，临床疗效经历年来验证，屡试不爽［4］。白头翁汤现代多项研究表明其具有较好的抗炎止痢作用。部分研究者将其进行体外抑菌研究，结果证实白头翁汤在治疗痢疾中的作用佳，主要抑制痢疾杆菌，包括志贺氏、施氏、福氏以及宋内氏菌［5］。而也有研究证实，其在抑制金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌的作用方面效果也极佳［6］。其抗炎作用即表现在对大鼠多种实验性浮肿及肉芽消炎效果显著。炎症是机体应对创伤进行的防御反应，主要由血管与细胞的应答组成。旨在消灭与清除损伤出现的各种致炎因子，帮助损伤修复［7］。

炎症是机体应对创伤进行的防御反应，主要由血管与细胞的应答组成。旨在消灭与清除损伤出现的各种致炎因子，帮助损伤修复。二甲苯炎性造模的机制为：二甲苯可促进组织中肥大细胞等释放组胺、5-羟色胺等血管活性胺类，局部组织出现中微血管扩张，通透性增加。同时，机体其他来源的细胞和血浆中炎症介质，可进一步增加血管活性，造成组织液外渗，出现水肿。此外，炎症发生过程中血管内皮细胞自身损伤，可造成部分血液外渗，进一步加重肿胀程度。炎症、感染以及败血症的发生均与NO合酶相关，损伤的血管表达NO合酶，可引发NO的大量产生，致使血管扩张通透性增加而水肿。白头翁汤中主要提取成分有白头翁素、小檗碱和秦皮乙素。研究显示白头翁素和小檗碱在抑制NO水平方面效果最佳。而黄连、黄柏中提取物以小檗碱、药根碱为主，在抑制NO的同时，也可抑制对组胺引起的小鼠皮肤毛细血管通透性增加，是有效的抗炎成分。秦皮中含有的七叶苷、秦皮苷类以也具有抗炎作用，其中秦皮乙素可在调控微血管功能方面发挥作用，可有效降低NO生成以及阻碍细胞间黏附分子，从而在抗炎方面作用较佳［8-10］。

本试验中采用的白头翁汤中白头翁清热解毒，黄柏泻火除蒸、黄连泄火解毒、秦皮可收涩止痢。复方中的白头翁、黄柏对腹泻均有一定的抑制效果。但白头翁清热解毒，凉血治痢，对腹泻的抑制效果相比黄柏更为显著，在复方中起到了君药的作用，而黄柏清热燥湿、泻火解毒，在复方中作为白头翁的臣药起到辅助白头翁抗腹泻的作用，因此复方中的各味中药通过配伍加强了白头翁原有的抗腹泻作用，能够有效抑制大肠杆菌引起的腹泻。

本试验综合比较可以得出，对抗二甲苯所致的小鼠炎性反应中，各药物组的抗炎时间由长至短顺序为：白头翁汤、黄连＞黄柏＞秦皮、白头翁。因此，可初步得出本实验研究中白头翁汤抗炎作用的发挥主要依赖于黄连、黄柏的作用。

本项试验中为公正评定各种药物的的抗炎作用，单用时采用同等剂量。试验过程中发现黄连在此剂量时可导致实验后多数小鼠死亡，其机理有待进一步研究，也说明黄连在白头翁汤中剂量最小是有一定道理的。

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R285.5

A

1004-745X（2016）09-1737-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.09.029

2015-05-14）