实时荧光定量聚合酶链式反应与快速培养法在肺炎支原体检验中的应用效果观察

广东省东莞市寮步医院（523400）杨泽敏 唐杏 卢慧兵 邝树华

肺炎支原体主要通过呼吸道进行传染，是儿童发生呼吸道感染的常见病原体。肺炎支原体感染患儿早期如不能得到有效诊治，可能会导致肺外感染[1]。因此，早期诊断在肺炎支原体患儿治疗中尤为重要。临床中对于肺炎支原体的检测方法较多，但是对于各种方法的诊断效果尚不明确[2]。本研究中分别采用实时荧光定量聚合酶链式反应与快速培养法对200例肺炎支原体感染患儿进行检测，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料 选择2013年3月～2015年3月我院接诊的200例疑似肺炎支原体感染的患者进行研究。其中男120例，女80例。年龄为8个月～15岁。平均为6.5±2.3岁。病程为4～30天，平均病程为28.13±4.21天。所有患者均出现剧烈咳嗽等症状，胸部X线检查显示两肺出现片状阴影，患者经大环内酯类药物治疗有效，其余抗生素治疗表现为无效。所有患者均符合小儿支原体肺炎的相关诊断标准[3]。

1.2 方法 全部患儿均在就诊的当日，由护士无菌条件下采集咽拭子，并进行后期的检测操作。快速培养法选择武汉菁华时间科技有限公司生产的试剂盒进行培养，实时荧光定量聚合酶链式反应采用ABI7300实时荧光扩增仪，试剂采用中山大学达安基因股份有限公司生产的肺炎支原体核酸定量检测试剂进行测定。

1.3 观察指标 记录分析两种检测方法的诊断结果，并统计计算两种检测方法的灵敏度、特异度以及诊断的符合率。

1.4 统计学分析 选用SPSS13.0进行统计学分析，计数资料采用卡方检验进行分析，P<0.05表示两组数据有显著性差异。

2 结果

2.1 快速培养法的检测结果分析 快速培养法的检测结果显示：敏感度为83.48%，特异度为75.29%，诊断符合率为80.00%。数据详见附表1。

附表1 快速培养法在肺炎支原体检测中的诊断结果分析

2.2 实时荧光定量聚合酶链式反应的检测结果分析 实时荧光定量聚合酶链式反应的检测结果显示：敏感度为84.31%，特异度为81.63%，诊断符合率为83.00%。数据详见附表2。

附表2 实时荧光定量聚合酶链式反应的检测结果分析

2.3 两种方法联合诊断检测分析 两种方法联合的检测结果显示：敏感度为90.90%，特异度为91.14%，诊断符合率为91.00%。数据详见附表3。

附表3 两种方法联合检测的结果分析

2.4 两种检查手段结果比较 实时荧光定量聚合酶链式反应联合快速培养法诊断的敏感度、特异度及诊断符合率均明显高于两种检测手段的单独检测，差异有统计学意义（P<0.05）。但两种检测手段的结果不完全一致（一致率为76.00%）。数据详见附表4。

附表4 两种检测方法的比较分析

3 讨论

支原体感染导致儿童肺炎在临床中较为常见，临床表现多样，且患者病程较长、病情的轻重程度不一，较易反复。而且，支原体感染的患儿如不及时诊治，甚至会导致多种肺外并发症，严重影响患儿的身心健康[4]。且支原体感染患儿对抗生素治疗不敏感，因此常规治疗会影响患者的病情。临床研究中对于支原体感染检测方式较多，对于血清的特异性抗体及冷凝素的检测是较为常用的检测方式。但由于患者病程的制约，对于患儿的早期诊断较难实现。因此，临床中对于肺炎支原体患儿的早期诊断和治疗成为研究的重点。目前，随着临床检验手段的发展，实时荧光定量聚合酶链式反应联合快速培养法已逐步成为肺炎支原体感染检测的主要手段。快速培养法是近年来发展起来的能够实现对支原体直接检测的方法，通过对咽拭子在高营养成分和生长因子中的培养，可以在12～24h内获取检测结果。操作简便，结果显示准确，较为快速，在患儿发病的初期即可对支原体进行检测，敏感性较好。实时荧光定量聚合酶链式反应是一种通过肺炎支原体体外特异性DNA扩增，产生大量DNA片段的最新研究技术，可以在短时间内使微量核酸片段实现大量扩增，产生百万拷贝，进而大幅度提高了诊断的准确性和敏感性，具有较高的敏感度和特异度。临床研究显示，两种检测手段在检测中均存在一定的误差，但是，由于检测机制不同，因此，它们在对肺炎支原体检测中存在着互补的作用。

本研究显示实时荧光定量聚合酶链式反应联合快速培养法诊断的敏感度、特异度及诊断符合率均明显高于两种检测手段的单独检测。但两种检测手段的结果不完全一致（一致率为76.00%）。表明两种检测手段联合的诊断较单独使用的效果更好，可明显提高诊断效果。

综上所述，实时荧光定量聚合酶链式反应联合快速培养法联合诊断肺炎支原体，效果良好，值得推广。