HER-2与Ki-67在直肠癌组织中的表达及临床意义

张志云　雷新益　吉袒进　杨勇　蒋学军



·论著·

HER-2与Ki-67在直肠癌组织中的表达及临床意义

张志云雷新益吉袒进杨勇蒋学军

目的探讨HER-2与Ki-67在直肠癌组织中的表达及临床意义。方法选取2013年10月至2015年3月接收的80例直肠癌患者，收集切除后的直肠癌组织标本，作为观察组。另外，收集20例健康者肠黏膜组织标本作为对照组。采用免疫组化SP方法对2组标本HER-2与Ki-67的表达进行研究。结果直肠癌组织中的HER-2、Ki67阳性表达率明显高于正常肠黏膜组织，2组比较差异有统计学意义(P<0.05)；HER-2的表达与直肠癌患者的性别、年龄、淋巴结转移情况、肿瘤部位无明显关联(P>0.05)，而与直肠癌患者Dukes分期、细胞分化程度、浸润深度有明显关联(P<0.05)。Ki-67表达与直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、细胞分化程度无显著关联(P>0.05),而与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期有显著关联(P<0.05)。对直肠癌患者组织中HER-2与Ki-67的表达情况进行等级相关分析，发现两者表达呈正相关(r=0.354,P<0.01)。结论直肠癌组织中HER-2与Ki-67蛋白的表达在一定程度上与患者的性别、年龄、肿瘤部位、以及淋巴结转移情况无关，与直肠癌组织细胞分化程度、Dukes分期、浸润深度有关。HER-2和Ki-67表达水平可作为判定直肠癌的生物学指标。

HER-2；Ki-67；直肠肿瘤

直肠癌是由直肠组织细胞发生癌变而形成的，是常见的消化道恶性肿瘤[1]。近年来其发病率和病死率呈上升趋势[2]。由于直肠癌发生癌变的位置底，深入盆腔，解剖关系比较复杂，易造成手术不彻底，术后复发率相对比较高[3]。在我国，直肠癌发病年龄大致居于45岁左右，但近年来，青年人发病的几率有明显上升趋势[4]。关于直肠癌发病的原因目前尚未明确，但与生活环境、饮食习惯、遗传因素密不可分[5]。目前，公认的一种诱因是动物脂肪以及蛋白质摄入量太多，而食物纤维摄入不足等。早期直肠癌患者大多无明显症状[6]。在其生长到一定程度后，便会出现排便习惯改变，便秘、腹泻、血便、脓血便等。到晚期，大便逐渐变细，伴有排便梗阻，体形消瘦。目前关于直肠癌的治疗，需要以外科手术为主，借助于化疗、放疗进行综合治疗[7]。与许多恶性肿瘤类似，直肠癌的发生、发展以及预后尚不明确，为了寻找与直肠癌相关的生物标志物，本研究针对HER-2与Ki-67在直肠癌组织中的表达情况进行统计分析，报告如下。

1　资料与方法

1.1一般资料选取2013年10月至2015年3月我院接收的80例直肠癌患者，收集切除后的直肠癌组织标本，作为观察组。另外，收集20例健康者肠黏膜组织标本作为对照组。观察组男43例，女37例；年龄24～83岁，其中≥60岁47例，<60岁33例；依据国际抗癌联盟直肠癌分期系统标准将所收集的标本进行分类。分化程度：中低分化有54例，高分化26例。淋巴结转移：未转移55例，转移25例。Dukes分期:A+B 48例，C+D 32例。肿瘤部位发生在结肠38例，直肠42例。浸润深度T分期：T1/T2 14例，T3/T4 66例。

1.2方法将收集到的标本用10%甲醛溶液固定后采用常规石蜡包埋，做成5 μm连续切片，采用免疫组化SP法染色，染色步骤严格按试剂盒说明进行。HER-2单克隆抗体、Ki-67单克隆抗体和免疫组化SP试剂盒均购自上海研卉生物科技有限公司。ER-2主要为细胞膜着色，Ki-67为细胞核着色，H把细胞膜或细胞核出现棕黄色颗粒判断为阳性细胞。在光学显微镜镜下随机观察3～5个视野，视野中阳性细胞数<5%计为“-”，5%～25%计为“+”，26%～50%计为“++”，>50%计为“+++”，将“+～+++”判定为阳性表达，将“-”判定为阴性表达。Ki67表达于细胞核，在细胞核呈现棕黄色或棕褐色颗粒，呈弥散分布。在显微镜下选择3～5个视野进行观察，统计阳性细胞百分比。阳性细胞百分比≤5%计0分，6%～25%计1分，26%～50%计2分，51%～75%计3分，>75%计4分。细胞染色强度计分标准：无着色计0分，淡黄色计1分，黄棕色计2分，棕褐色计3分。将两者标准计分相乘后所得数表示阳性表达水平。0～1为阴性“-”，2～3为弱阳性“+”，4～7为阳性“++”，8以上为强阳性“+++”。Ki67表达中将“+++”级判定为阳性高表达组，将“+”和“++”级视为低表达组。另外，用PBS溶液替代一抗作为阴性对照。

2　结果

2.1直肠癌组织与正常肠黏膜组织中HER-2、Ki67阳性的表达情况分析比较直肠癌组织中HER-2、Ki67阳性表达率明显高于正常肠黏膜组织，2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1　直肠癌组织与正常肠黏膜组织中HER-2、Ki67强阳性的表达情况分析比较　例(%)

2.2直肠癌组织中HER-2阳性表达与临床病理特征的分析比较HER-2的表达与直肠癌患者的性别、年龄、淋巴结转移情况、肿瘤部位无明显关联(P>0.05)，而患者Dukes分期、细胞分化程度、浸润深度有明显关联(P<0.05)。细胞分化程度越低，阳性表达率越高，随着Dukes分期的升高,HER-2蛋白在直肠癌组织中表达增多，浸润程度越深，阳性表达率越高。见表2。

表2　直肠癌组织中HER-2阳性表达与临床病理特征的分析比较　例(%)

2.3直肠癌组织中Ki67表达情况与临床病理特征的分析比较Ki-67表达与直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、细胞分化程度无显著关联(P>0.05),而与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期有显著关联(P<0.05)。见表3。

2.4直肠癌组织中Ki67表达、HER2表达相关情况分析比较对80例直肠癌患者组织中 HER-2与Ki-67的表达情况进行等级相关分析，发现两者的表达呈正相关(Spearman相关系数为r=0.354，P<0.01)。见表4。

2.5直肠癌组织中Ki67、HER2表达与正常组织的病理切片比较分析Ki67表达于细胞核，在细胞核呈现棕黄色或棕褐色颗粒，呈弥散分布。ER-2主要为细胞膜着色，Ki-67为细胞核着色，所以把细胞膜或细胞核出现棕黄色颗粒判断为阳性细胞。见图1～5。

表3　直肠癌组织中Ki67表达情况与临床病理特征的分析比较　例(%)

表4　直肠癌组织中Ki67表达、HER2表达相关情况分析比较　例(%)

图1　正常直肠腺体Ki-67局灶阳性(免疫组化×200)

3　讨论

近年来，随着人们生活水平的不断提高以及饮食结构的变化，我国直肠癌的发病率呈上升趋势，逐年增多。直肠癌的发病与直肠癌组织细胞的生长、增殖、分化、凋亡等相关基因蛋白失调有关[8]。HER-2归属于生长因子受体家族，其表达主要开始于胚胎发育时期，到成年后，正常组织中，对HER-2基因的检出率非常低[9]。HER-2基因对细胞的正常增殖分化起到一定的作用，在正常情况下，HER-2处于非激活状态。当其受到人体内某些因子刺激以后，其调控和表达机制失常，进而被激活。关于HER-2的表达与结肠癌的关系，国内外相关的文献报道不太一致，很多报道认为HER-2在直肠癌组织中的阳性表达率底，仅为0.5%～5%，而且直肠癌组织HER-2的表达与患者体内淋巴结转移、Dukes分期、细胞分化程度无关[10]。

图2　直肠癌细胞Ki-67弥漫阳性(免疫组化×200)

图3　正常直肠腺体HER-2阴性(免疫组化×200)

图4　直肠癌细胞HER-2阴性(免疫组化×200)

图5　直肠癌细胞HER-2阳性(免疫组化×200)

Ki67抗原是Gerdes等从增殖细胞中发现的，主要定位于细胞核。目前，是学术界比较认可的细胞核增殖标记物，与细胞周期有密切关联[11]。在细胞凋亡的G1期、S期、M期都有表达。在细胞进行有丝分裂的过程中，起着维持DNA结构的作用。细胞核在进行增殖的过程中，抗原Ki-67表达，能够快速准确的反映出恶性肿瘤的细胞增殖情况，并与多种恶性肿瘤的生长、凋亡、转移及预后有关联[12]。关于Ki-67的表达与直肠癌临床病例的关系的研究存在差异[13]。一种研究认为：Ki-67表达的阳性表达与患者性别、年龄、Dukes分期、细胞分化程度、血管浸润深度有关[14]。另一种研究认为：Ki-67的阳性表达与Dukes分期、淋巴结是否转移有关，与患者年龄、性别等病理类型无关[15]。

本研究显示，直肠癌患者组织中HER-2阳性表达率与健康者正常肠黏膜组织比较，直肠癌患者组织阳性表达率31.25%，高于正常肠黏膜组织的15%，差异明显。关于HER-2的表达与结肠癌的关系，此次研究发现，直肠癌中的HER-2阳性表达率与患者的性别、年龄、淋巴结转移情况、肿瘤部位无明显关联，而与患者的Dukes分期、细胞分化程度、血管浸润深度有明显关联。研究表明细胞分化程度越低，阳性表达率越高，随着Dukes分期的升高,HER-2蛋白在直肠癌组织中表达增多。血管浸润程度越深，阳性表达率越高。这充分证实,HER-2蛋白的高表达率，与肿瘤的侵袭性有关，表达率越高，侵袭性越强。Her-2的高表达率在直肠癌的产生、发展中起重要作用。

直肠癌组织中Ki-67阳性表达率与正常肠黏膜组

织相比较，强阳性表达率63.75%显著高于正常肠黏膜组织5%。Ki-67的表达与直肠癌患者的性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤部位、细胞分化程度无显著关联，而与肿瘤浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期显著相关。研究结果表明,K-i67蛋白的高表达，对结直肠癌的诊断和黏膜癌变的监视有重要意义,对结直肠癌早期发现有非常高的医学价值。直肠癌患者组织中HER-2与Ki-67的表达呈正相关。

综上所述，HER-2、Ki-67表达与直肠癌的Dukes分期、浸润深度以及进展有关，在直肠癌的产生、增殖过程中起着非常重要的作用,提示将HER-2、Ki-67的表达作为直肠癌诊断的生物学指标。对HER-2、Ki-67的联合检测，可作为判断直肠癌肿瘤恶性程度的依据，对临床指导治疗直肠癌具有重要作用。

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14王欢,马法库,刘斌,等.结直肠癌组织中DCLK1+/Ki67-肿瘤干细胞样细胞的形态和分布.中国组织工程研究,2015,14:1575-1579.

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Expression and clinical significance of HER-2 and Ki-67 in colorectal cancer tissues

ZHANGZhiyun,LEIXinyi,JITanjin,etal.

DepartmentofAnorectumSurgery,DongfengGeneralHospitalAffiliatedtoHubeiMedicineCollage,Hubei,Shiyan442008,China

ObjectiveTo investigate the expression and clinical significance of HER-2 and Ki-67 in colorectal cancer tissues.MethodsEighty patients with colorectal cancer who were admitted into our hospital from October 2013 to March 2015 were served as observation group,whose ablated colorectal cancer tissues were collected as specimens,and the other 20 healthy subjects were served as control group,whose intestine mucous membrane tissues were collected as specimens.The expression levels of HER-2 and Ki-67 were detected by immunohistochemistry (SP).ResultsThe expression levels of HER-2 and Ki67 in observation group were significantly higher than those in control group (P<0.05). The expression levels of HER-2 were not correlated to patient’s sex,age, lymph node metastasis, tumor’s location (P>0.05),which were closely related with Dukes staging of colorectal cancer, cell differentiation degree, tumor's infiltration depth (P<0.05). The expression levels of Ki-67 were not correlated to patient’s sex,age, tumor’s size and location, cell differentiation degree (P>0.05),however,which were closely associated with tumor’s infiltration depth, lymph node metastasis and Dukes staging (P<0.05). The expressions HER-2 were positively correlated to those of Ki-67(r=0.354,P<0.01).ConclusionThe expressions of HER-2 and Ki-67 protein in colorectal cancer tissue are not correlated to patient’s sex and age, tumor location, lymph node metastasis at some extent,however,which are closely related with cell differentiation of colorectal cancer tissue,Dukes staging, tumor’s infiltration depth.The expression levels of HER-2 and Ki-67 can be regarded as biological parameters for the diagnosis of colorectal cancer.

HER-2;Ki-67;colorectal cancer

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.19.002

442008湖北省十堰市，湖北医药学院附属东风总医院结直肠肛门外科

雷新益，442008湖北省十堰市，湖北医药学院附属东风总医院；

E-mail：181137822@qq.com

R 735.37

A

1002-7386(2016)19-2891-04

2015-12-07)

项目来源：湖北省自然科学基金资助项目(编号：2014CDB07152)