一测多评法测定枣仁安神胶囊中丹参酮ⅡA、五味子醇甲与五味子醇乙的含量

尹创

(宿州市食品药品检验所，安徽 宿州　234000)



一测多评法测定枣仁安神胶囊中丹参酮ⅡA、五味子醇甲与五味子醇乙的含量

尹创

(宿州市食品药品检验所，安徽 宿州234000)

目的建立枣仁安神胶囊中丹参酮ⅡA、五味子醇甲与五味子醇乙含量的一测多评方法。方法采用高效液相法测定丹参酮ⅡA与五味子醇甲和五味子醇乙间的相对校正因子，考察其重现性，比较计算值与测得值的差异。结果用一测多评法对6批枣仁安神胶囊中丹参酮ⅡA、五味子醇甲与五味子醇乙进行测定，与外标法实测值基本一致。结论该方法可靠，结果准确，可用于枣仁安神胶囊的质量控制。

酸枣仁;五味子;丹参;色谱法,高压液相;回收率

枣仁安神胶囊由醋五味子、炒酸枣仁、丹参3味药材制得,该药具有养血安神、补心养肝等功效,临床常用心血不足所致的失眠、健忘、心烦、头晕；神经衰弱症等症状[1]。其中酸枣仁具有养心安神之功效；五味子具有生津敛汗、敛肺滋肾、宁心安神之功效，常用与酸枣仁配伍使用治疗心悸、怔忡及失眠等症状[2-4]。 据文献报道[5-7]，枣仁安神胶囊主要含有酸枣仁皂苷A、五味子醇甲、丹参酮ⅡA、五味子醇乙、酸枣仁皂苷B等成分，目前，对枣仁安神胶囊成分研究较多，但各种研究方法中均牵涉到多种对照物质，这不仅增加实验成本，且实验操作过程繁琐容易引入更多误差。王智民等[8]最早提出一测多评法，有效地解决对照物质繁多等缺陷，在中药检验领域得到很好地推广，大大地缩减检验成本和提高工作效率。本研究以丹参酮ⅡA为参照物，建立参照物与五味子醇甲和五味子醇乙之间的校正因子，并对相对校正因子加以验证，然后利用校正因子计算药品中五味子醇甲和五味子醇乙的含量，并利用数学统计方法比较一测多评法与外标法之间差异，得出一测多评法准确、简便、快捷等结论。此方法最终实现以单一对照物质(丹参酮ⅡA)同时对枣仁安神胶囊多种有效成分进行质量控制，这为评价和考察枣仁安神胶囊质量提供全新参考模式，以便今后更好地控制枣仁安神胶囊的质量。

1　仪器与试药

Agilent 1260高效液相色谱仪(美国安捷伦公司；检测器：1260VWD；色谱工作站：Agilent ChemStation for LC systems)；液相色谱柱：Sunfire ODS (4.6 mm×250 mm,5 μm)；JE703CE型电子天平(梅特勒仪器公司；D=0.1 mg)。枣仁安神胶囊，规格为每袋装0.45 g，共6个批次；丹参酮ⅡA对照品(110766-200619，100.0%)，五味子醇甲对照品(110857-201010，99.4%)均购自中国药品生物制品检定所；五味子醇乙对照品(58546-54-6)，购自北京万佳首化生物科技有限公司。乙腈为色谱纯，水为纯化水，其它试剂为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件流动相：A-乙腈,B-0.1醋酸,梯度洗脱程序：0～20 min,乙腈比例48%→35%；20～70 min,乙腈比例35%→80%，检测波长定为250 nm，进样量：10 μL。

2.2混合对照品溶液的制备分别精密称取丹参酮ⅡA、五味子醇甲、五味子醇乙对照品(P2O5真空干燥24 h)各适量，加甲醇溶解并稀释制成每1 mL含丹参酮ⅡA 20 mg、五味子醇甲30 mg和五味子醇乙35 mg的混合对照溶液，用0.22 μm微孔滤膜滤过，即得。

2.3供试品溶液的制备[1]取本品内容物适量，研细，取细粉约1 g ，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率500 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用70%甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.4阴性样品溶液的制备按处方制备缺少研究三种目标成分的阴性样品，按“2.3”项下同法操作，制得阴性供试品溶液。

2.5线性关系的考察按“2.1”项下色谱条件，调节液相色谱仪，精密吸取5、10、15、20、25、40、50μL注入色谱仪，记录色谱图，见图1，以进样量为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，得到线性方程分别为：丹参酮ⅡA ：Y=6.68X+2.68，R2=0.999 3(n=7)；五味子醇甲：Y=3.14X+1.48，R2=0.999 5(n=7)；五味子醇乙：Y=4.65X+3.01，R2=0.999 6 (n=7)。结果表明，丹参酮ⅡA、五味子醇甲和五味子醇乙进样量分别在0.113～1.035、0.156～1.598、0.168～1.668 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。

A.对照品

B.样品

C.阴性样品

注：1.五味子醇甲；2.五味子醇乙；3.丹参酮Ⅱ A。

图1HPLC色谱图

2.6稳定性试验取同一批枣仁安神胶囊，按“2.3”项下供试品制备方法制备，室温放置0、5、8、15、20、24 h后进样，记录色谱图，结果丹参酮ⅡA、五味子醇甲和五味子醇乙峰面积的RSD分别为0.6%、0.6%和0.2%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.7精密度试验取混合对照品溶液10 μL，按“2.1”项下色谱条件，连续进样6针，测定峰面积，结果丹参酮ⅡA、五味子醇甲、五味子醇乙峰面积的RSD分别为0.3%、0.2%和0.7%，结果表明仪器的精密度良好。

2.8加样回收率试验取已知含量的同一批枣仁安神胶囊6份，分别加入一定量的丹参酮ⅡA、五味子醇甲、五味子醇乙对照品，按“2.3”项下方法制备，依法操作，计算各成分回收率，结果见表1～3。

表1　丹参酮ⅡA回收率测定结果(n=6)

表2　五味子醇甲回收率测定结果(n=6)

表3　五味子醇乙回收率测定结果(n=6)

2.9相对校正因子计算本研究以丹参酮ⅡA为内参物，分别计算五味子醇甲、五味子醇乙校正因子，计算公式[5]为：f=fs/fi=AsCi/AiCs。式中As代表内参物峰面积，Ci为待测成分浓度，Ai为待测成分峰面积，Cs为内参物浓度。分别精密量取混合对照溶液5、10、15、20、25、40 μL依法测定，计算出五味子醇甲和五味子醇乙的校正因子平均值分别为1.365和4.023，RSD分别为0.5%和0.8%。

2.10相对校正因子的重现性考察

2.10.1高效液相色谱仪及色谱柱考察考察的高效液相色谱仪型号分别为：UltiMate 3000、SHIMADZU LC-10tvp和Waters 2695-2489；色谱柱种类及型号分别为：Thermo HypersilBDS C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)、Agilent ZORBAX 300StableBond SB-C18(4.6 mm×250 mm，4.5 μm)和Shim-pack VP-ODS C18(4.6 mm×250 mm，5 μm),结果：五味子醇甲及五味子醇乙相对校正因子差异较小，RSD分别为0.5%和0.1%，该方法适合不同型号仪器和色谱柱，耐用性强。可以得出，一测多评法可用做检测枣仁安神胶囊中丹参酮ⅡA、五味子醇甲和五味子醇乙含量，方法简便、快捷、准确、可靠。见表4。

2.10.2色谱峰专属性考察准确定位目标成分是本研究的前提，目前定位方式有相对保留时间值法和保留时间差值法，本研究采用相对保留时间值法进行峰定位。在紫外光谱图定性前提下，以丹参酮ⅡA峰为参考峰，分别计算五味子醇甲和五味子醇乙的相对丹参酮ⅡA峰的保留时间，并对两相对保留时间用不同高效液相色谱仪和色谱柱来考察其耐用性。结果，五味子醇甲和五味子醇乙相对保留时间值分别为0.4%和0.2%，误差很小，可以得出，不同高效液相色谱仪和色谱柱对相对保留时间值影响甚微，三种成分相对位置(色谱峰中相对保留时间)比较稳定。因此，在已知丹参酮ⅡA保留时间的前提下，可以准确定位五味子醇甲和五味子醇乙色谱峰，进而可以采用一测多评法计算各组分含量，能更好地控制枣仁安神胶囊质量。

2.11样品测定取枣仁安神胶囊6批，按照“2.2”项下方法制备，分别采用外标法和一测多评法测定并计算丹参酮ⅡA、五味子醇甲和五味子醇乙含量，结果见表5。经成组t检验，两组差异无统计学意义，可以认为两种方法测得结果基本一致，一测多评法可以作为枣仁安神胶囊考察这三种成分的质控方法。

表5　样品的测定结果

3　讨论

3.1关于波长选择为选择较佳检测波长，实验采用紫外分光光度法全波长扫描混合对照溶液发现，本品在250 nm及270 nm附近有较强紫外吸收。但采用270 nm波长进行试验时发现，五味子醇甲和五味子醇乙峰不能完全分离，而使用250 nm分离度完好，且其吸收强度能达到定量分析要求，所以本研究选择250 nm波长为实验波长。

3.2关于流动相选择流动相选择中，共考察甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%磷酸溶液及乙腈-0.1%磷酸溶液等诸多流动相，结果只有采用乙腈-0.1%冰醋酸溶液三个对照物质才同步出现信号并实现完全分离，但是五味子醇乙保留时间过长，所以最终采用梯度洗脱程序。通过了解三种物质理化性质，样品提取介质选取甲醇，通过比较浸泡法和超声法两种方法，最后采用超声30 min即可完全实现成分提取，达到实验制备要求。

目前，一测多评法在中药材及饮片质量评价中应用广泛[7-11]。一测多评法(QAMS)有着简便、快速、经济合理等诸多优点，在对照品不易得到的情况下，能实现用一种对照品测定多种成分的目的，更好地考察和控制药品质量。本研究采用丹参酮ⅡA为对照，同时测定枣仁安神胶囊中多种有效成分的含量，这对评价和考察枣仁安神胶囊质量提供全新参考模式，以便今后更好地控制枣仁安神胶囊的质量。

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Content determination of Tanshinone ⅡA，Schisandrol A，Schisandrol B in Zaoren Anshen Capsules by quantitative analysis of multi-components by single-marker

YIN Chuang

(SuzhouInstituteforFoodandDrugControl,Suzhou,Anhui234000，China)

ObjectiveTo develop a method of quantitative analysis of multi-components by single marker(QAMS) for determination of Tanshinone ⅡA，Schisandrol A，Schisandrol B in Zaoren Anshen Capsules.MethodsBased on the HPLC,the relative correction factor of Tanshinone ⅡA was determined using magnolol as an internal reference substance.The method was evaluated for reproducibility,and the difference between calculated and measured values was compared.ResultsThe quantitative results of six batches of Zaoren Anshen Capsules by QAMS was basically consistent with that by external standard method.ConclusionsThe QAMS method was reliable and accurate,which might be used for the quality control of Zaoren Anshen Capsules.

Semen ziziphi spinosae;Schisandra chinensis;Salvia miltiorrhiza;Chromatography,high pressure liquid;Retrieving rate

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.08.020

2016-03-09，

2016-06-11)