张晓玉, 张修彦, 詹纯列(广州军区广州总医院动物实验中心, 广州 510010)
新西兰兔脏器参数、血液指标、心率、心室压的性别间比较
张晓玉, 张修彦, 詹纯列
(广州军区广州总医院动物实验中心, 广州 510010)
目的 测定并比较普通级新西兰兔脏器参数、血液指标、心率及心室压。方法 取70~80日龄普通级新西兰兔60只,雌雄各半,饲养一周后,精确称量体质量后,采集动脉血用于测定血液生理生化及血气指标; 呼吸支持情况下开胸进行心室压测定; 解剖取各脏器并称量。结果 性别间比较: 胸腺、肺的脏器系数差异显著(P<0.05或P<0.01); 血液指标中,嗜酸性细胞百分率、中性粒细胞百分率、单核细胞百分率、淋巴细胞百分率、中性粒细胞、单核细胞、红细胞平均体积、平均血红蛋白量、血清白/球蛋白、血糖、补体C3、谷氨酰转肽酶、pH值、pH温度校正、血氧饱和度差异均显著(P<0.05或P<0.01); 左心室舒张压、右心室舒张压差异有显著性意义(P<0.05)。结论 普通级新西兰兔部分脏器系数,血液生理生化、血气以及心室压指标性别间存在差异,用于相关实验研究时应注意。
普通级新西兰兔; 脏器参数; 血液学指标; 心室压
新西兰兔常用于心脑血管研究、免疫抗体制备、过敏反应实验、解热药研究、生殖生理实验等。相对于标准化啮齿类动物而言,普通级新西兰兔在实际应用中质量控制的影响因素较多,针对其生物学特性的测定尚不够全面、及时。目前,仅有少量研究报道不同微生物级别和或品种兔的生长发育、脏器重量、脏器系数、血液生理生化指标、血液酸碱值与血气分析、呼吸及心率等指标中的一项或几项进行测定和比较,饲料对普通级新西兰兔血液指标的影响以及肺动脉高压模型兔中心室压变化的分析等[1-4]。本实验全面测定并比较了70~80日龄不同性别的普通级新西兰兔主要脏器参数、血液生理生化及血气、心率及心室压指标,为其使用提供详实的基础数据,以弥补以往文献和教材中数据之不足。
1.1 实验动物
70~80日龄普通级新西兰兔雌雄各30只, 由信华实验动物养殖场提供[ SCXK(粤)2014-0023], 饲养于广州军区广州总医院动物实验中心普通环境[SYXK(粤)2014-0100], 适应性饲养1周后用于实验。
1.2 仪器及试剂
体质量和脏器称量仪器: 德国赛多利斯BSA124S型电子天平,称量范围: 0.1 mg~120 g。血生理生化测定的仪器: 日本光电MEK-7222型全自动血细胞分析仪、美国IL GEM premier 3000型全自动血气分析仪、日本日立7020型全自动生化分析仪、美国贝克曼Allegra 64R型台式高速冷冻离心机。心室压测定仪器及试剂: 上海奥尔科特ALC-V8型小动物呼吸机、北京微信斯达Pclab-430C型生物医学信号采集处理系统、北京微信斯达PY-2型血压传感器、BD-24G静脉留置针、体积分数3%戊巴比妥钠注射液、25 000 U/mL肝素钠生理盐水注射液。
1.3 方法
1.3.1 体质量和脏器重量的测定 实验前禁食12 h,禁水1 h, 耳缘静脉采血及心室压测定后放血处死,立即剖取脑、脑垂体、甲状腺、胸腺、心、肺、肝、胃、脾、左肾、右肾、肾上腺、睾丸/子宫、附睾/卵巢, 并用滤纸吸干组织表面水分后称重, 记录数据, 计算脏器系数[(脏器重量/体质量)×100%]。
1.3.2 血液样品检测 耳缘动脉采血, 其中约1 mL注入EDTA二钾抗凝管,用全自动血细胞分析仪检测22项血常规指标; 约2 mL注入肝素抗凝管, 用全自动血气分析仪检测23项血气指标; 约2 mL注入不抗凝普通采血管,室温静置30 min, 3 000 r/min离心10 min,分离血清,用全自动生化分析仪检测21项血生化指标。
1.3.3 左右心室压测定 新西兰兔称重后耳缘静脉注射戊巴比妥钠(1 mL/kg),麻醉后固定,进行气管插管,打开小动物呼吸机进行辅助呼吸。做开胸手术前,耳缘静脉注射肝素钠生理盐水注射液(1 000 U/kg),进入胸腔后调整人工呼吸机的潮气量到双侧肺脏膨起适度为止。打开心包膜,将与压力换能器连接好的留置针直接插入心尖处,并立即收回针尖,将套管部分继续插入左心室内,观察套管中血液颜色和泵出节奏,数值稳定后记录心率真、左心室压。调整套管针针尖, 穿过心室隔到达右心室, 收回针尖, 将套管部分继续插入右心室,观察套管中血液颜色和泵出节奏, 记录右心室压。
1.4 统计学分析
数据处理采用SPSS19.0 统计软件进行,数据以平均数±标准差表示, 性别间比较采用t检验, P<0.05为差异有统计学意义。
2.1 主要脏器参数
雌雄脏器重量心、肝2项指标差异显著(P<0.05),体质量,脑、胸腺、胃重量4项指标差异极显著(P<0.01); 雌、雄胸腺、肺脏器系数差异显著(表1)。
表 1 雄性与雌性普通级新西兰兔主要脏器参数
2.2 血常规
雌、雄性粒细胞(NEUT)、单核细胞(MONO)、NEUT%、淋巴细胞(LYMPH) %、MONO %、红细胞平均体积(MCV)、平均血红蛋白量(MCH) 7项指标的差异极显著,血小板压积(PCT)、嗜酸性粒细胞(EO) %的差异显著(表2)。
2.3 血液生化
雌、雄A/G、血糖(GLU)、补体C3三项指标的差异显著; 谷氨酰转肽酶(GGT)的差异极显著(表3)。
2.4 血气分析
雌雄pH、pH温度校正(pHT)、血氧饱和度(SaO2) 三项指标差异显著(表4)。
表 2 雄性与雌性普通级新西兰兔血常规
表 3 雄性与雌性普通级新西兰兔血液生化
表 4 雄性与雌性普通级新西兰兔血气分析
2.5 心率、心室压
雌雄左心室舒张压LVD P、右心室舒张压(RVDP) 二项指标差异显著(表5)。
表 5 雄性与雌性普通级新西兰兔心率、心室压
实验动物的脏器重量及脏器系数受品种、体质量、性别、年龄等因素的影响[1-5]。有报道[6],家兔的脏器系数雌雄间差异不明显,而本文结果显示雄性新西兰兔肺的脏器系数显著高于雌性(P<0.05),雌性胸腺的脏器系数显著高于雄性(P<0.05),而胸腺是免疫系统中重要的中枢淋巴器官。普通级新西兰兔相对SPF级新西兰兔而言,受环境因素影响大,机体的免疫应答反应更加多样。作者通过血液生理、生化、血气检测表明,雌兔的淋巴细胞百分率、EO百分率、血清白/球蛋白值极显著显著或地高于雄兔; 雄兔的NEUT、MONO、NEUT百分率、MONO百分率、补体C3值极显著或显著地高于雌兔。这些免疫相关细胞及因子的差异是否能反映出雌雄之间免疫功能的差异还有待免疫细胞的进一步测定[7]。
22项血常规指标中,MCV、MCHC、MCH是反映红细胞形态特征的指标。雄性MCV、MCH均在正常参考值范围内显著低于雌性,与丁雷等[8]测定结果稍有不同。PCT的变化由PLT、MPV的变化引起,与凝血作用有关。岳秉飞等[9]报道10周龄的雌兔PLT明显高于雄兔,而本实验结果显示雄性PCT显著高于雌性。21项血生化指标中, GGT是临床上评估肾脏和肝脏功能的常用指标,而以往文献中少有检测,结果显示雌兔GGT极显著低于雄兔; 雌雄间GLU差异的主要原因可能是血液样品离体时间及动物禁食时间的影响[10,11]。血气分析是判断机体呼吸功能及酸碱平衡的重要指标, 雌、雄兔23项血气指标比较中,雌性pH值与SaO2显著低于雄性且差异存在一致性: 血液pH下降,CO2分压升高,Hb与氧的亲和力降低,SaO2降低。此外,实验动物的血液学指标也受测定方法、仪器设备和样本量等因素的影响[12],在实验过程中应注意排除。心室压是反映和评价心脏收缩与舒张功能的重要指标,实验人员易受到操作因素的影响,在测定心室压过程中出现误差,因此提供新西兰兔的正常值具有重要意义。结果显示,新西兰兔左心室、右心室舒张压性别间存在显著差异[13,14]。
比较而言,本实验在前人[1-4]测定新西兰兔脏器重量、脏器系数及血液生理生化的基础上,补充并比较了脑垂体、甲状腺、胸腺、附睾、卵巢的脏器参数, GGT、AMY、补体C3/C4、其他12项血气指标及心室压的基础数据和性别间差异。
[1] 袁进, 顾为望, 张嘉宁, 等. SPF级和普通级新西兰兔主要脏器系数的比较[J]. 中国比较医学杂志, 2006, 16(12):749-751.
[2] 李英.SPF级新西兰实验兔生物学特性的研究[D]. 广州: 第一军医大学, 2004:28-30.
[3] 恽时锋. 实验型封闭群新西兰兔与应用有关的生物学特性研究[D]. 南京: 南京农业大学, 2003:48-45.
[4] 李增强, 孙淑华, 孟金萍, 等. 无菌兔、SPF兔和普通兔脏器系数的比较 [J]. 中国比较医学杂志, 2009, 19(1):37-40.
[5] 张修彦, 詹纯列, 肖育华, 等. SPF级Balb/c小鼠脏器质量、脏器系数、血常规、血生化指标的测定与比较[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2011, 15(41):7734-7737.
[6] 田小芸, 赵志刚, 恽时锋, 等. 先天性白内障大鼠主要脏器重量与脏器系数[J]. 实验动物与比较医学, 2014, 34(5): 386-388.
[7] 吴旭颖, 田玉书, 吴金峰, 等. BALB/cA-nu小鼠主要脏器参数、血生理生化指标和免疫细胞的测定[J]. 中国比较医学杂志, 2014, 24(5):41-46.
[8] 韩芬茹. 四种实验动物脏器质量系数的测定[J]. 畜牧兽医杂志, 2006, 4(25):1-3.
[9] 田小芸, 尤金炜, 董敏, 等. 先天性白内障大鼠血液生化及血液流变学分析[J]. 中国比较医学杂志, 2014, 24(3):20-24.
[10] 丁雷. 新西兰兔血液学参数的研究[D]. 哈尔滨: 东北林业大学, 2010:19-31.
[11] 岳秉飞, 程水生, 杨果杰, 等. 不同周龄大耳白兔血液生理生化指标的测定[J]. 中国兽药杂志, 2000, 35(3):17-21.
[12] 赵晓红. 血液标本存放时间对生化检验结果的影响研究[J]. 中国保健营养, 2013, (4):2127.
[13] 柯斌, 秦鉴, 张俊杰. 短期禁食对大鼠生理生化指标的影响[J]. 时珍国医国药, 2011(22):2778-2780.
[14] 郑凤娇, 傅泳航, 刘光泽, 等. HBV转基因小鼠血液生理生化指标检测分析[J]. 解放军医学杂志, 2011, 36(9):970-972.
[15] 王新. 阿托伐他汀对兔肺动脉高压的作用及对白介素-6水平的影响[D]. 石家庄: 河北医科大学, 2012:13-20.
[16] 董浩然. 新西兰兔心衰心气虚证模型的建立及其基因芯片数据分析[D]. 广州: 广州中医药大学, 2013:18-20.
Comparison on Organ Parameter, Blood Parameter,Heart Rate and Ventricular Pressure between Male and Femele New Zealand White Rabbit
ZHANG Xiao-yu, ZHANG Xiu-yan, ZHAN Chun-lie
(Animal Experiment Center, Guangzhou General Hospital of Guangzhou
Military Command of PLA, Guangzhou 510010, China)
Objective To determine and compare the parameters of organ and blood, heart rate and ventricular pressure in New Zealand white rabbit. Methods A total of 60 New Zealand white rabbits about 70-80 days old were fed for a week. Weight of rabbit and main organ, blood physiological and biochemical index and blood gas, ventricular pressure and heart rate were determined on respiratory supportmale and female rabbits (P<0.05 or P<0.01). Percentage of eosinophils, neutrophils, mononuclear cell and lymphocyte, neutrophils, mononuclear cell, mean corpuscular volume, average amount of hemoglobin,serum albumin /globulin, blood glucose, complement C3, glutamyl- transpeptidase, value of pH,temperature correction pH, oxygen saturation differences were significant (P<0.05 or P<0.01). The left and right ventricular diastolic blood pressure differences were also significant(P<0.05). Conclusion Some of the organ coefficient, blood physiological and biochemical index, blood gas analysis and ventricular pressure exist significant difference between male and female New Zealand white rabbit, it should be paid attention in related research.
New Zealand white rabbit; Organ parameter; Blood parameter; Ventricular pressure
Q95-33
B
1674-5817(2016)01-0032-05
10.3969/j.issn.1674-5817.2016.01.006
2015-06-19
广东省科技计划基础条件建设项目(2012B060300022)
张晓玉(1989-), 女, 硕士, 研究方向: 人类疾病动物模型的开发利用。E-mail: zhxiaoyu11@163.com
詹纯列(1963-), 男, 主任医师, 研究方向: 实验动物与人类疾病动物模型。E-mail: 1513508151@qq.com