参茸健脑胶囊质量标准研究

张　红　孙婷婷　卫向峰　党秋萍　刘建峰　霍　花

陕西省中医药研究院中药研究所(西安 700700)



参茸健脑胶囊质量标准研究

张红孙婷婷卫向峰△党秋萍刘建峰□霍花▲

陕西省中医药研究院中药研究所(西安 700700)

目的：采用TLC和HPLC-ELSD建立参茸健脑胶囊的质量控制标准。方法：采用薄层色谱法鉴别参茸健脑胶囊中干姜和人参，采用HPLC-ELSD法对人参有效成分人参皂苷Rb1进行定量分析。结果：在薄层色谱中均能检出干姜、人参药材相应的主斑点；人参皂苷Rb1进样量在0.8780～5.2680μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系(r =0.9999)，加样回收率良好，均值为100.08%，RSD为2.35%。结论：所建立的药品质量标准可用于参茸健脑胶囊的质量标准控制。

主题词中药质量检测@参茸健脑胶囊

参茸健脑是西安中医脑病医院临床应用较好的医院制剂，由人参、干姜、黄芪、鹿茸、当归等12味中药组成。该方具有健脾益肾，养血补气，强身健脑的功效，临床用于脑萎缩、脑发育不全、五软等。为更专属、灵敏的控制该制剂的质量，本研究采用薄层色谱法鉴别参茸健脑胶囊中干姜和人参，采用HPLC-ELSD法对人参中人参皂苷Rb1进行含量测定，并在此基础上制定了该制剂的质量标准[1]，现将结果报道如下。

1仪器与试药高效液相色谱仪，超声波提取仪、电子分析天平。人参皂苷Rb1、Re标准品、干姜对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：110704-201223)，甲醇、乙腈为美国Fisher公司产色谱纯，其它均为分析纯试剂。薄层色谱中所用硅胶板为普通硅胶G板。本研究中所用参茸健脑胶囊由西安中医脑病医院药剂科生产(60粒/瓶)。

2方法与结果2.1定性鉴别2.1.1人参定性鉴别[1]：精密称取本品内容物3g，加甲醇50ml，采用超声法提取10min，过滤得提取液，低温挥去溶剂，加水25ml溶解，用三氯甲烷提取2次(25ml/次)，弃去提取液，水溶液用水饱和正丁醇提取2次(25ml/次)，合并提取液，用10%氨试液洗涤2次(30ml/次)，正丁醇液置水浴低温挥去溶剂，加甲醇溶解，定容至2ml，即得供试品溶液。另按处方比例取不含人参的阴性对照药材，同法制成阴性样品溶液。人参皂甙Re、人参皂甙Rb1标准品溶液：2mg/ml(甲醇)。采用TLC法进行鉴别，点样量为5μl，薄层板采用硅胶G薄层板，展开剂为：CHCl3-HCOOH-CH3OH-H2O(15∶40∶22∶10)下层液(低于10℃放置)，显色剂：10%硫酸乙醇溶液溶液，于105℃加热2min至斑点显色清晰。在供试品色谱中，检出人参皂甙Re、人参皂甙Rb1，缺人参阴性样品无干扰。

2.1.2干姜定性鉴别[2]：精密称取本品7.5g，加乙醚20ml，采用超声法提取30min，过滤，滤液低温挥去溶剂，加乙酸乙酯1ml溶解，即得供试品溶液。另按处方比例取不含干姜的阴性对照药材，同法制成阴性样品溶液。再精密称取干姜标准药材1g，同供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。采用TLC法进行鉴别，点样量为5μl，薄层板采用硅胶G薄层板，展开剂：以石油醚(60～90℃)-三氯甲烷-丙酮-甲酸(8∶1∶1∶0.1)，展开后置紫外光灯(365nm)下检视，供试品色谱中检出干姜药材，缺干姜阴性样品无干扰。

2.2样品中人参皂苷Rb1含量测定2.2.1HPLC-ELSD色谱条件：色谱柱：Diamonsil C18；流动相：乙腈-水(31∶69)；ELSD条件(气体流速：2.8 L/min；检测器温度为：105℃)。TPN大于6000(按人参皂苷Rb1色谱峰计算)。

2.2.2样品溶液制备：对照溶液制备：根据文献中的方法，精密称取人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成0.3512mg/ml的对照品溶液，备用。供试溶液制备[3-4]：取本品适量，精密称取约3g，采用索氏提取器，用氯仿提取3h，弃去提取液，再精密加入50ml正丁醇，放置12h后采用超声法提取30min，滤过，精密量取续滤液25ml，低温水浴蒸干，甲醇溶解，定容至5ml，即得。空白对照样品溶液的制备：取除人参以外的处方中其它药材，按照本制剂制备工艺制备阴性样品，精密称量适量阴性样品，按上述方法制备阴性对照样品溶液，作为实验需要。

2.2.3系统适用性实验:在2.2.1色谱条件下对对照品溶液、供试品溶液以及阴性样品溶液进行测定，供试品中人参皂苷Rb1色谱峰分离度好，阴性样品没有干扰，故确定流动相比例为乙腈-水(19∶81)。

2.2.4线性范围考察:分别精密吸取0.3512mg/ml的人参皂苷Rb1对照溶液2、4、6、8、10、12μl，测定，绘制标准曲线，得回归方程y=2.0908x+5.0599，r =0.9999，人参皂苷Rb1在0.8780～5.2680μg范围内，从结果来看，实验中的峰面积值与进样量呈线性关系。

2.2.5精密度实验:吸取人参皂苷Rb1对照溶液10μL，连续进样5次，分别测定，RSD为1.3%。

2.2.6稳定性实验:取样品适量，制备供试品溶液1份，分别放置0、2、4、6、8、10h测定其峰面积并计算含量，测得RSD为1.64%。表明本样品溶液在10h内稳定。

2.2.7重复性实验:取样品适量，制备供试品溶液5份，精密吸取10μl，注入液相色谱仪，测RSD为1.95%，表明该方法重现性良好。

2.2.8加样回收实验:按照设计方法，精密称取已知含量(0.7431 mg/g)的样品共6份，将样品置于三角瓶中，然后对6份样品分别精密加入人参皂苷Rb1对照品(0.439g/ml) 2.25、2.25、1.8、1.8、2.7、2.7ml，按照供试品制备方法制成加样回收供试品溶液，分别测定，实验结果见表1。从试验结果可以看出，人参皂苷Rb1回收率在95～100%之间，平均回收率为100.08%；实验结果显示RSD为2.35%，加样回收率良好。

表1　人参皂苷Rb1回收试验结果(n=6)

2.2.9样品测定:三批样品分别精密称取适量，按“重现性试验”项下方法制备供试品溶液，测定，结果见表2。

表2　样品含量测定结果

3讨论参茸健脑胶囊是西安中医脑病医院根据中医辨证论治的理论和实践并经临床反复验证总结出的中药复方制剂[5]。本研结果显示人参和干姜的主斑点清晰可见，阴性对照无干扰，定性鉴别方法专属性强。人参为君药，人参皂苷Rb1为人参中主要有效成分，临床研究表明其具有提高机体免疫活性、促进学习记忆能力、抗疲劳、抗肿瘤的作用，另外还具有脑缺血损伤、神经损伤保护作用。含量测定色谱结果显示人参皂苷Rb1能与其他成分良好的分离且保留时间适合，阴性对照无干扰，能够准确的反映出产品的内在质量。在人参供试品制备过程中对正丁醇超声提取时间进行了考察，实验结果表明正丁醇提取40min人参皂苷Rb1基本可提取完全，因此确定提取次数为40min。本研究所建立的方法可作为质量控制标准。

[1]汝秋明，楚云杰. 舒神灵胶囊质量标准研究[J].中国现代中药，2014，16(2)：145-146.

[2]彭飞城，丁野，郑金凤，等. 附子理中丸(浓缩丸)质量标准的建立[J].中国药师，2013，16(2)：256-257.

[3]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版(一部)[S].北京: 中国医药科技出版社，2010：284.

[4]李琼，曾锐，杨学森.参芪胶囊质量标准研究[J].时珍国医国药，2014，25(1)：100-101.

[5]Liang W, Ge S, Yang L, et al. Ginsenosides Rb1 and Rg1 promote proliferation and expression of neurotrophic factors in primary Schwann cell cultures[J]. Brain Res, 2010, 1357: 20-21.

(收稿2016-02-22；修回2016-04-13)

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▲沈阳军区总医院北方医院(沈阳 110034)

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10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.065