野生和人工培育陕重楼对荷瘤小鼠实体瘤及免疫因子的影响*

宋延平　许建秦　张宇晨　王　磊　赵林涛

陕西省中医药研究院(西安 710003)



野生和人工培育陕重楼对荷瘤小鼠实体瘤及免疫因子的影响*

宋延平许建秦▲张宇晨△王磊△赵林涛

陕西省中医药研究院(西安 710003)

目的: 探讨野生和人工培育陕产重楼的抑瘤及免疫作用。方法: 采用小鼠移植瘤模型,观察野生和人工培育陕重楼水提液灌胃14d对小鼠H22实体瘤瘤重及血清中IL-2、TNF-a、NK的活性的影响。结果:野生陕重楼及人工培育陕重楼2.46、1.23、0.615g/kg剂量对小鼠H22实体瘤均表现出明显抑瘤作用，2.46、1.23g/kg剂量使血清中NK含量明显提高，野生陕重楼2.46、1.23g/kg明显提高荷瘤小鼠血清TNF-α含量。结论: 野生和人工培育陕重楼对小鼠H22实体瘤均有明显抑制作用、可明显提高NK含量，提高血清中TNF-α含量。

主题词重楼实验，动物免疫因子@实体瘤

重楼具有很高的药用价值，最早以蚤休之名载于《神农本草经》，具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊作用，用于疔肿痈肿，咽喉肿痛，跌扑伤痛，惊风抽搐[1]。陕产重楼主要是百合科植物七叶一枝花 Paris polyphylla Smith var.chinensis (Franch.) Hara 的干燥根茎，又名灯台七，分布于秦岭、太白山等地区[2]。目前，陕西药市上供应的基本为野生重楼，但野生重楼繁殖率低，两年发育一次，生长速度缓慢，加之过分采挖，野生重楼供不应求[3]。近来我们培育了一些人工陕重楼，但培育出的人工陕重楼药用价值如何，并没有经过药效研究，本文就野生和人工培育陕重楼的抗肿瘤及免疫作用进行了初步的研究。

1材料1.1动物KM小鼠，由西安交大及第四军医大学实验动物中心提供，雌雄兼用，合格证号：No.6100170000538、No.0015413、No.0015425。小鼠H22细胞株，由第四军医大学实验动物中心引进。

1.2仪器注射用环磷酰胺(山西普德药业股份有限公司)；普通光学显微镜( 日本olympus公司)；SW-CJ-2D型双人净化工作台(苏州净化设备有限公司)。ELISA酶联免疫反应试剂盒(南京建成生物科技有限公司)。

1.3试药野生重楼(七叶一枝花)购自西安市药材市场，人工培育陕重楼由陕西省宝鸡市太白县塘口村药材培育基地提供，均由陕西中医药大学药学院生药教研室王继涛高级实验师鉴定,均制成1g/ml水提液。药典规定重楼人用量为3～9g，平均用量为6g，按人和小鼠的体表面积换算成小鼠的剂量1.23g/kg，即为小鼠所用的中剂量，则大剂量与小剂量分别为2.46g/kg、0.615g/kg。

2方法按文献[4-6]方法，取小鼠90×3只，每批实验单一性别，随机分为8组，分别为荷瘤对照组20只、环磷酰胺组10只(30mg/kg ip)、野生陕重楼2.46、1.23、0.615g/kg剂量组各10只(ig)和人工培育陕重楼2.46、1.23、0.615g/kg剂量组各10只。将瘤株复苏，接种，选取接种7～10d的健康瘤源小鼠，断颈处死，制备瘤细胞悬液(1×107/ml)，以上均无菌操作。每只小鼠右前肢腋窝皮下接种0.2ml瘤细胞悬液。次日给药，除环磷酰胺隔天给药外，其他各组每天给药1次，连续给药14d。末次给药后次日，小鼠麻醉后按眼球摘除法取血，离心取上清，用酶联免疫测定法(ELISA试剂盒操作)测定血清中IL-2、TNF-a、NK的活性。处死小鼠，剖取瘤块称重，计算抑瘤率。抑瘤率=(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%。实验重复3次，每次实验检测一项免疫指标。

3结果与对照组比较，野生及人工陕重楼2.46、1.23、0.615g/kg剂量均能明显减小瘤体的重量(P<0.01)，野生的平均抑瘤率分别为48.57%、43.88%、31.82%；人工的平均抑瘤率分别为51.53%、46.20%、34.88%。环磷酰胺与对照组比较IL-2、TNF-α、NK含量均明显下降(P<0.01或P<0.05)；野生及人工陕重楼与对照组比较小鼠血清中IL-2含量无明显变化；野生陕重楼2.46、1.23g/kg与对照组比较血清中TNF-α含量明显增加(P<0.01或P<0.05)；野生及人工陕重楼2.46、1.23g/kg与对照组比较均能明显提高血清中NK含量(P<0.01或P<0.05)。同剂量野生及人工陕重楼抑瘤作用及血清中IL-2、TNF-α、NK含量无明显差异。提示野生与人工陕重楼均能明显抑制H22小鼠瘤体的生长，均能明显提高H22小鼠血清中NK活性，野生陕重楼尚能明显提高血清中TNF-α含量。

表1　野生和人工培育陕重楼对小鼠H22实体瘤及免疫因子的影响

注：与荷瘤组比较，△P<0.05,▲P<0.01

4讨论陕重楼的生长环境遭到破坏，植物繁殖率低，资源再生较慢，各产区药材蕴藏量普遍下降，部分品种已濒临灭绝。2016年3月4日，国务院办公厅《关于促进医药产业健康发展的指导意见》中指出，要大力加强地道中药材的种植，并制定相应的种植培育标准，提高人工中药材的质量，对野生中药材开展生态环境影响评估。 临床上普遍认为野生中药材的临床效果要好于人工培育品种，本研究也表明了这一点。虽然野生和人工培育陕重楼对H22小鼠实体瘤均具有明显的抑制作用，对血清中NK含量均具有明显提高作用，但野生陕重楼明显提高H22小鼠血清中TNF-α含量，而人工培育陕重楼对血清中TNF-α含量无明显提高。说明人工培育陕重楼和野生陕重楼的成分可能有一定的差异，有待于进一步研究，也有待改进人工栽培技术。关于野生和人工培育重楼的其他方面的药效比较有待于进一步研究。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:中国医药科技出版社，2015．

[2]张琳，颜永刚，邓翀.陕西产重楼资源调查及品质鉴定[J]．现代中医药，2013，33(4):93-95.

[3]张墁，李彦文，李志勇，等.重楼属药用植物的研究进展[J].中央民族大学学报(自然科学版)，2011，20(4):65-68.

[4]吴先闯，杜刚军，宋晓勇，等.玉米须多糖对环磷酰胺治疗H22荷瘤小鼠机体损伤的减毒增效作用[J].中药材，2014，37(10):1833-1836.

[5]杨柳青，张鸣，陈建婷，等.扶正抗癌方对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用及其对IL-12和Survivin表达的影响[J]．陕西中医，2015，36(5):634-636.

[6]方瑜，李仁廷，陈光伟．山仙颗粒对H22移植瘤小鼠TGF-α和端粒酶表达影响的实验研究[J]．陕西中医，2012，33(12):1681-1683.

(收稿2016-04-21；修回2016-06-12)

*陕西省中医管理局中医药科研课题(JC17)

△陕西中医药大学(咸阳712046)

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A

10.3969/j.issn.1000-7369.2016.09.069