肝癌和肝病患者血清甲胎蛋白异质体的检测及意义

王军海

肝癌和肝病患者血清甲胎蛋白异质体的检测及意义

王军海①

目的：探讨血清甲胎蛋白异质体（AFP-L3）对于诊断原发性肝癌（PHC）的发生、发展的应用价值。方法：选取2015年1-12月本院收治的PHC患者87例、肝硬化患者58例、慢性肝炎患者61例作为研究对象，分别检测其AFP-L3水平。结果：PHC患者AFP-L3水平和AFP-L3阳性率均高于肝炎与肝硬化患者，比较差异均有统计学意义（P＜0.05）；不同TNM分期患者AFP-L3水平与AFP-L3阳性率比较差异均无统计学意义（P＞0.05）；肿瘤直径越大，AFP-L3水平越高，比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：AFP-L3是反映PHC的发病的敏感指标，其与肿瘤大小密切相关。

肝癌； 肝硬化； 慢性肝炎； 甲胎蛋白； 甲胎蛋白异质体

First-author's address：Tai'an Tumour Prevention and Treatment Hospital，Tai'an 271000，China

原发性肝癌（Primary hepatic cancer，PHC）是临床中最常见的恶性肿瘤之一，不仅恶性程度高，而且病情进展迅速，患者死亡率较高［1］。甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，AFP）是目前临床广泛应用的PHC诊断与监测指标，但研究表明，少数PHC患者不存在AFP水平升高，而妊娠、慢性肝炎、肝硬化、胚胎性肿瘤等病变也可能引起AFP水平升高［2-3］。我国大部分PHC患者长期存在慢性肝炎及肝硬化病史，AFP无法明确鉴别PHC与良性肝病，使PHC的临床诊断造成很大的困难。因此，寻求敏感性、特异性更高的标志物仍是PHC临床治疗中的迫切需要解决的问题。随着研究的不断深入，有关资料显示，LCA结合型AFP异质体3（AFP-L3）为肝癌细胞所特有，能够作为PHC早期诊断的敏感标志物［4］。本研究对比了肝癌与肝病患者的AFP-L3水平，旨在探索AFP-L3在PHC的诊断中的应用价值，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料 选取2015年1-12月本院收治的PHC患者87例为PH组，均经临床、影像学、病理检查，符合第四届全国肝癌学术会议制订的PHC诊断标准，并排除多发性肝癌，其中男52例，女35例；年龄32～76岁，平均（57.02±8.73）岁；TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期22例、Ⅲ期36例、Ⅳ期29例。影像学检查显示：肿瘤直径≤3 cm 25例、3～5 cm 33例、≥5 cm 29例；选取同期肝硬化患者58例为肝硬化组，其中男32例，女26例；年龄31～67岁。平均（52.55±11.04）岁；选取同期慢性肝炎患者61例为慢性肝炎组，其中男43例，女18例；年龄27～74岁，平均（48.93±10.83）岁。肝硬化和慢性肝炎患者均符合2000年中华医学会传染病与寄生虫病学会、肝病学分会联合修订的病毒性肝炎防治方案中的诊断标准。

1.2方法 所有患者均于入组次日采集空腹静脉血5 mL，离心取血清，保存于-20 ℃低温环境。AFP检测采用雅培I2000化学发光仪及其配套检测试剂（均购自美国雅培公司），严格根据产品说明书进行检测。AFP-L3检测采用微量离心柱法，试剂购自北京热景生物公司，离心柱中保存与小扁豆凝集素（LCA）发生了耦联作用的琼脂糖，能够特异性地与AFP-L3发生化合反应，当血清在离心柱中流过时，AFP-L3与LCA结合，留存于离心柱中，先进行离心洗脱，提取AFP-L3，再应用化学发光仪对AFP-L3的含量进行检测，并计算AFP-L3 与AFP的比例。根据美国FDA制订的标准，以AFP-L3＞10%作为其阳性率临界值。

1.3统计学处理 使用SPSS 19.0 软件对数据进行统计分析，组间计量资料以（±s）表示，比较采用F检验，计数资料以率（%）表示，比较采用 字2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1三组患者检测结果比较 PHC患者AFP-L3百分比和AFP-L3阳性率均高于肝炎和肝硬化患者，比较差异均有统计学意义（P＜0.05），而肝炎和肝硬化患者AFP-L3百分比和AFP-L3阳性率比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表1。

表1　三组患者检测结果比较

2.2不同TNM分期PHC患者检测结果比较 不同TNM分期患者AFP-L3百分比和AFP-L3阳性率比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表2。

表2　不同TNM分期PHC患者检测结果比较

2.3不同肿瘤大小PHC患者检测结果比较 肿瘤直径越大，AFP-L3百分比越高，比较差异有统计学意义（P＜0.05），不同肿瘤大小患者AFP-L3阳性率比较差异无统计学意义（P＞0.05），见表3。

表3　不同肿瘤大小PHC患者检测结果比较

3　讨论

慢性肝炎与肝硬化等肝病患者极可能演化为原发性肝癌（PHC），因此提高鉴别良恶性肝病的准确性，对于PHC的早期诊断极其重要。甲胎蛋白（AFP）被公认为临床PHC的血清标志物，但是有资料表明，PHC患者中AFP呈阴性者高达30%～40%［5］。另外研究还发现，一些良性肝病AFP水平可有不同程度的升高，尤其是PHC的高危人群，例如慢性肝炎和肝硬化患者中AFP水平升高者占20%～50%，因此应用AFP诊断PHC存在一定的局限性［6］。AFP可分为不能与LCA结合的AFP-L1 与AFP-L2，以及能与LCA结合的AFP-L3。已有研究表明，AFP-L1主要存在于良性肝病患者中，AFP-L2来自妊娠妇女，而AFP-L3是PHC患者所特有，因此AFP-L3可作为PHC的敏感标志物［7］。本研究检测了PHC与慢性肝炎、肝硬化患者AFP-L3水平，以探讨AFP-L3在诊断PHC中的应用价值。

本研究结果显示，PHC患者AFP-L3水平及AFP-L3阳性率均高于其他两种良性肝病患者。AFP是一种糖蛋白，主要产生于肝脏和胎儿的卵黄囊［8］。研究发现，由于糖链结构的差异，AFP与外源性凝集素亲和性的不同，不同来源的AFP与LCA的结合能力不同，能够对AFP来源作出判断［9］。其中AFP-L3仅由肝癌细胞所分泌，因此应用于诊断PHC的特异性与敏感性明显高于AFP［10］。已有多项研究证明，AFP-L3应用于诊断早期PHC中能发挥巨大作用［11-13］。AFP-L3在临床诊断PHC之前即可出现阳性，因而用于肝癌定性诊断时不受AFP 400 ng/mL这一传统PHC诊断标准的限制，且无需动态观察AFP含量变化，从而缩短了从AFP含量升高至PHC确诊的时间［14］。AFP-L3阳性的肝癌有快速生长和早期转移的潜在特性，因而AFP-L3 对AFP低浓度的PHC尤其具有早期诊断意义［15-16］。Toyoda等［17］研究表明，当AFP＜20 ng/mL时的患者在未进行治疗前，高AFP-L3的患者的存活率明显比低AFP-L3的患者低。还有研究报道，即使癌灶直径小于2 cm的患者中，也有超过35%者可以检测到AFP-L3的升高［18］。另外，应用AFP-L3与AFP的百分比作为指标，还能够排除AFP的绝对浓度量的干扰，针对AFP水平较低的患者，应用AFP-L3百分比进行诊断，更有够提高诊断的准确性。本次研究中，有5例患者在B超检查时显示为阴性，但AFP-L3检测显示阳性，结果在后期CT与病理检查中，有2例确诊PHC。可见，AFP-L3阳性结果对于PHC的早期诊断有重要的预警作用。本研究结果还显示，肿瘤直径越大，AFP-L3水平越高，这提示AFP-L3是由肝癌细胞所分泌的，而肿瘤体积越大，肝癌细胞的数量越多，因此其产生的AFP-L3的数量也相应增多。本研究与以往有部分研究的结果存在差异，其原因可能是研究对象不同，这些研究将多发性PHC患者也纳入研究范围，而本研究根据影像学检查，对研究对象进行严格筛选，仅选择单发PHC患者［19］。还有研究采用AFP-L3的绝对含量作为指标，分析其与肿瘤大小的相关性，结果呈阴性，其原因可能是由于存在非结合型AFP的干扰［20-21］。本研究结果还显示，不同TNM分期患者AFP-L3百分比水平无明显差异，推测其原因可能是由于TNM分期的评估标准并不完全反映肿瘤细胞的直接损害。也就是说，并非肿瘤细胞的数量越多，肿瘤的TNM分期就相应地越高，而AFP-L3主要反映肿瘤细胞的数量，因此与TNM分期的相关性受到一定影响。本研究中发现，不同TNM分期患者和不同肿瘤大小患者的AFP-L3阳性率均无明显差异，这可能是由于AFP-L3诊断不同TNM分期患者和不同肿瘤大小患者的阳性率都较高，存在天花板效应，因此PHC分组之间显示不出差异。

综上所述，AFP-L3是反映PHC的发病的敏感指标，AFP-L3水平与肿瘤大小密切相关。但是AFP-L3仍存在一定的漏诊率，目前还没有一种指标能诊断全部PHC，因此在检测血清标志物的同时还应结合临床及影像学检查，以免发生漏诊。

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Detection and Significance of Serum Alpha-fetoprotein Variant in Patients with Liver Cancer and Liver Disease

WANG J un-hai.

Medical Innovation of China，2016，13（19）：021-024

Objective：To explore the application value of serum alpha-fetoprotein variant （AFP-L3）in the diagnosis of primary liver cancer （PHC）.Method：From January to December in 2015，87 patients with PHC，58 patients with cirrhosis and 61 patients with chronic hepatitis in our hospital were selected as the research objects.AFP-L3 levels were detected respectively.Result：The AFP-L3 level and positive rate of PHC with AFP-L3 were higher than the chronic hepatitis and cirrhosis patients，There were no significant differences in AFP-L3 level and AFP-L3 positive rate in different TNM stages（P＞0.05）.The tumor diameter was greater，AFP-L3 level was higher，the differences were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion：AFP-L3 is a sensitive index reflecting the incidence of PHC，and it is closely related to the tumor size.

Liver cancer； Cirrhosis； Chronic hepatitis； Alpha-fetoprotein； Alpha-fetoprotein variant

10.3969/j.issn.1674-4985.2016.19.006

①山东省泰安市肿瘤防治院 山东 泰安 271000通信作者：王军海

2016-01-29） （本文编辑：李颖）