东莞市凤岗镇外来猪O型口蹄疫抗体血清学调查

朱志伟，张楷鸿，房献忠，房俊雄（广东省东莞市凤岗镇农业技术服务中心，广东 东莞 523690）

东莞市凤岗镇外来猪O型口蹄疫抗体血清学调查

朱志伟，张楷鸿，房献忠，房俊雄
（广东省东莞市凤岗镇农业技术服务中心，广东 东莞 523690）

用酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接血凝试验对采自东莞市凤岗镇的屠宰场的猪360份血清进行O型口蹄疫抗体检测，结果为O型口蹄疫抗体阳性数162份，总阳性检出率为45%，其中2013年抗体阳性份数为62份，阳性率为51.67%；2014年抗体阳性份数为68份，阳性率为56.67%；2015年抗体阳性份数为32份，阳性率为26.67%，结果表明东莞市凤岗镇的外来猪O型口蹄疫抗体水平比较低不足抵抗野读的侵袭。

O型口蹄疫；血清抗体；酶联免疫吸附试验（ELISA）；间接血凝试验

口蹄疫（Foot-and-mouth disease，FMD）是由口蹄疫病毒（FMDV）引起的急性热性高度接触性传染病，主要侵害偶蹄兽，偶见于人和其他动物。临诊上以口腔黏膜、蹄部及乳房皮肤发生水疱和溃烂为特征。具有明显的季节性，多在秋季开始，冬季加剧，春季减缓，夏季平息。主要通过呼吸道、消化道、生殖道和损伤的皮肤和黏膜感染，其水疱液和水疱皮含毒量最高。由于输入到东莞市凤岗镇的外来猪来源较多，为掌握生猪口蹄疫抗体水平，控制输入生猪的质量，保证餐桌上的肉食安全。采用了两种检测方法对凤岗屠宰场进行了血清学的季度监测，取其中3年的结果分析，2013～2015年的监测结果如下。

1　材料和方法

1.1被检血清

2013年至2015年每个季度随机抽取30份血清，检测血清共360份。采自东莞市凤岗镇屠宰场。

1.2试剂

O型口蹄疫正向间接血凝诊断液、阴性对照、阳性对照，购自中国农业科学院兰州兽医研究所，批号：120104、130606。荷兰Cedi口蹄疫病毒O型抗体ELISA检测试剂盒，购自荷兰Cedi公司，批号：20130205、2013032904。

1.3方法

1.3.1采用O型口蹄疫正向间接血凝抗试验，依照NY/SY 150-2000《口蹄疫诊断技术规程》。

1.3.1.1待检血清、阴阳性对照血清用FMD-O型专用稀释液作1：16稀释。

1.3.1.2在干净血凝板上每孔加50μL稀释液。取稀释好的被检样品、阴阳性血清50μL倍比稀释至第4孔后吸出50μL弃去，阳性血清稀释到第8孔。

1.3.1.3加25μL血凝抗原到各孔，将血凝板置于微震荡器上震荡1～2min后盖上玻板室温下或37℃下静置1.5～2h判定结果。

1.3.2口蹄疫抗体ELISA检测方法（荷兰Cedi公司ELISA方法），适用于检测牛、猪、绵羊、山羊的血清中的口蹄疫O型（FMDV-type O）的抗体水平。

1.3.2.1待试剂回至室温，使用前需轻摇混匀，避免产生气泡。标记被检样品与参考样品在反应板上的位置。

1.3.2.2吸取90μL ELISA缓冲液到各孔；吸取10μL参考血清和被检样品到对应的孔中，盖上孵育盖，置20～25℃的室温下孵育1h。

1.3.2.3倒掉酶标板中的液体，用洗液洗板6次。最后一次冲洗时尽量拍干酶标板。

1.3.2.4吸取100μL酶标结合物溶液到各孔，盖上孵育盖，置20～25℃的室温下孵育1h。

1.3.2.5倒掉酶标板中的液体，用洗液洗板6次。最后一次冲洗时尽量拍干酶标板。

1.3.2.6吸取100μL底物到所有孔，在20～25℃室温下盖上孵育盖避光孵育15min，最后按照加底物同样的顺序和速度加终止液每孔100μL，混匀孔中液体。

1.3.2.7于酶标仪450nm读取并打印结果。

2　结　果

2013年和2014年的口蹄疫抗体检测是用O型口蹄疫正向间接血凝抗试验检测，2015年用酶联免疫吸附试验即ELISA方法进行抗体水平检测。从3年的监测数据来看，采集360份血清中，口蹄疫抗体阳性检出率为45%。其中2013 年O型口蹄疫抗体阳性份数为62份，阳性率为51.67%；2014年O型口蹄疫抗体阳性份数为68份，阳性率为56.67%；2015年O型口蹄疫抗体阳性份数为32份，阳性率为26.67%。详细结果见表1。

表1　2013～2015年O型口蹄疫抗体监测结果

春季阳性份数为50份，阳性检出率为55.56%。夏季阳性份数为38份，阳性检出率为42.22%。秋季阳性份数为34份，阳性检出率为37.78%；冬季阳性份数为40份，阳性检出率为44.44%，详细结果见表2：

表2　不同季节O型口蹄疫抗体检测结果

3　小结与分析

3.1按照检测结果来看，2013年与2014年的总体检测结果差异不大，2015年的免疫水平明显低于前两年。只有2013年与2014年的第一季度抗体阳性检出率在70%以上，其余的季度都不能达到免疫抗体合格率，有的甚至低于20%。据了解，2015年的免疫率下降是因为养殖户的防疫意识薄弱，认为即使没有实施好国家规定的免疫计划也没有发生相关疫情，并且考虑到疫苗会影响猪只的生长速度延长出栏时间降低最大利润，因此抱着侥幸的心理减少了部分猪只的免疫次数。

3.2因抽检的地点是屠场，抽检的生猪都是已经出栏的商品猪，一般商品猪出栏时间是6～7个月，最后一次免疫是在90日龄，所以当前检测结果反映的是上一个季度的免疫情况。

3.3影响免疫抗体合格率的因素有疫苗的质量、免疫对象的自身抵抗力、免疫程序等问题。就疫苗情况来说，生产疫苗的条件严格，国产疫苗的质量未必能得到保证。而且疫苗的温度波动是越小越好的，可如今物流公司泛滥，物流服务水平低下，运输条件得不到保障，对疫苗的质量也产生了一定的影响，甚至失效；就免疫程序来说，虽然国家已制定免疫计划，但各地区未必能实施到位。强制免疫和计划免疫的实施是要靠一支稳定的、高素质的兽医队伍的，对大多数基层动物防疫组来说，能做到、做好的只占少数。我国中小规模养殖场的动物防疫意识薄弱也是影响因素之一，因怕疫苗影响猪的生长速度只会造成巨大的经济损失。

3.4强化防疫队伍、加强养殖户的防疫意识与对免疫程序的认知、提高疫苗质量也是保证肉食安全的有效方法。

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.08.022