猪轮状病毒与多种细菌混合感染的诊断报告

赵　微，倪宏波*（黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江 大庆 163319）

猪轮状病毒与多种细菌混合感染的诊断报告

赵微，倪宏波*
（黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江 大庆 163319）

猪；轮状病毒；大肠杆菌；多杀性巴氏杆菌；胸膜肺炎放线杆菌；混合感染

由于饲养管理等各方面原因，在养猪生产中常发生病毒疾病和细菌疾病混合感染的现象。大庆某猪场仔猪出现呕吐，腹泻等症状，并且有部分仔猪死亡。无菌采集病料，提取病料组织和细菌的RNA和DNA进行RT-PCR和PCR鉴定，结果在412bp处扩增出轮状病毒条带，在253bp和450bp处扩增出多杀性巴氏杆菌和胸膜肺炎放线杆菌的条带。结合之前的临床症状和病理变化，确诊为轮状病毒、大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌和胸膜肺炎放线杆菌的混合感染。现报告如下：

1　发病情况

大庆市某猪场，共饲养约5000头猪，其中仔猪约1000头，本次发病猪多为断奶后仔猪，发病率为60%左右。病死率为5%左右。

2　临床症状

患病猪病初食欲不振，精神沉郁，出现呕吐和腹泻，粪便成水样、糊状或似乳清样液体，粪便呈黄绿色、灰白色或黑褐色，下痢病猪出现严重的脱水和体重下降。

3　病理学诊断

病变主要限于消化道，胃弛缓，内充满凝乳块和乳汁，小肠壁变薄，呈半透明状，肠内容物呈浆性或水样，灰白或灰黑色，肠系膜淋巴结水肿，肠绒毛短缩扁平。

4　实验室诊断

4.1革兰氏染色镜检无菌采集病料，用病料中所分离的细菌进行纯培养，可见两种菌落形态的细菌，分别对其革兰氏染色、涂片、镜检。可见两端钝圆红色杆状菌，疑似大肠杆菌。

4.2鉴别培养将革兰氏染色镜检后疑似大肠杆菌的细菌接种于伊红美蓝培养基上，将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养24h，观察到紫黑色有金属光泽的菌落，确定其为大肠杆菌。

4.3PCR检测提取纯培养的细菌DNA和病料组织中的DNA或RNA病毒。选用支原体、猪多杀性巴氏杆菌、猪链球菌、副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌的特异性引物（见表1），对细菌DNA进行PCR鉴定。选用猪传染性胃肠炎病毒（TGEV），猪流行性腹泻病毒（PEDV），轮状病毒（RV）、多重PCR的特异性引物（见表1），对病毒进行PCR鉴定。PCR结果经琼脂糖凝胶电泳分析，如图1和2所示：

表1　各细菌PCR引物和多重腹泻PCR引物

图1中1号泳道有一条253 bp的特异性条带，与巴氏杆菌的引物目的片段大小一致；4号泳道有一条450bp的特异性条带，与胸膜肺炎放线杆菌的引物目的片段大小一致。图2中1号泳道有一条412bp的特异性条带，与轮状病毒的引物目的片段大小一致。

图1 细菌PCR检测结果

图2 病毒多重PCR检测结果

4.4药敏试验

用纸片法进行对本实验分离的大肠杆菌，多杀性巴氏杆菌和胸膜肺炎放线杆菌的药敏试验。结果如下：

大肠杆菌对硫酸头孢喹肟、阿米卡星、恩诺沙星、环丙沙星敏感，对头孢唑啉、壮观霉素、阿奇霉素效果一般，对强力霉素、庆大霉素、卡那霉素无效。多杀性巴氏杆菌对硫酸头孢喹肟、盐酸头孢噻呋、头孢唑啉、氟苯尼考高度敏感，强力霉素、壮观霉素、恩诺沙星效果一般，阿米卡星、阿奇霉素、庆大霉素、林可霉素、环丙沙星无效。胸膜肺炎放线杆菌对氟苯尼考、麦迪霉素、环丙沙星、头孢呋辛、大观霉素、头孢吡肟 、先锋噻肟敏感，对氟哌酸、阿莫西林、阿米卡星、多粘菌素B效果一般，对左氟沙星、替考拉宁、头孢唑啉无效。

综合以上结果，本实验分离的致病菌对硫酸头孢喹肟，恩诺沙星，氟苯尼考，环丙沙星敏感。

5　讨　论

在猪场轮状病毒的感染是非常普遍的，常和其它病毒病原共感染，如猪传染性胃肠炎病毒，猪流行性腹泻病毒，细菌病原例如大肠杆菌，多杀性巴氏杆菌等，导致养猪业的重大损失。本次发病主要是轮状病毒和多种细菌的混合感染。发生混合感染的原因可能是仔猪的抵抗力较差，未获得母源抗体，饲养管理差，畜舍卫生条件不合格等。因此加强饲养管理，改善卫生条件，制定合理的免疫措施是防制关键。应该合理搭配日粮，保证充足的营养供应，注意通风、保暖，保持干燥、减少应激，增强抵抗力。可以在母猪产前15d和产后7d进行2次免疫，所产仔猪可以通过母乳获得母源抗体。针对此次发病，结合药敏试验结果，可以选用硫酸头孢喹肟，恩诺沙星，氟苯尼考，环丙沙星等细菌敏感的抗生素进行治疗。

6　结　论

通过对该猪场病猪的临床诊断、病理解剖以及实验室诊断，确诊该猪场混合感染了猪轮状病毒、致病性大肠杆菌、多杀性巴氏杆菌和胸膜肺炎放线杆菌。

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.08.023