应用全自动荧光酶联免疫法检测肉类中的大肠杆菌O157

叶毅飞，胡健声，朱声涛（广东省东莞市动物疫病预防控制中心，广东 东莞 523086）

应用全自动荧光酶联免疫法检测肉类中的大肠杆菌O157

叶毅飞，胡健声，朱声涛
（广东省东莞市动物疫病预防控制中心，广东 东莞 523086）

肠出血性大肠杆菌是引起食物中毒的一类重要的致病性细菌，大肠杆菌O157是其中的一个重要的血清型。本研究采集冻肉样品，进行大肠杆菌O157检测，结果从鸡肉和鸭肉中各检出一份阳性样品，阳性率分别为5.9%和12.5%，从结果可以看出，我市冻肉中存在有大肠杆菌0157污染。

全自动荧光酶联免疫法；肉类；大肠杆菌O157

肠出血性大肠杆菌引起的腹泻是目前世界范围内的重要公共卫生问题之一，而大肠杆菌O157是其中的一个重要的血清型。自上世纪70年代后期发现以来，该病已在全球范围内引起数百起暴发流行。大肠杆菌O157感染人后，能引起人的出血性腹泻和肠炎，且并发急性肾损伤、血栓性血小板减少性紫癜、微血管溶血性贫血等，严重的可致人死亡，重症患者死亡率可达到5%～10%。近年来，国际上该病时有暴发，给人类健康和社会经济带来了巨大损失。因此，日本、加拿大等国已将“大肠杆菌O157”列为必须报告的传染病，予以高度重视。本研究采用全自动荧光酶免疫分析法（VIDAS法）检测肉类中的大肠杆菌O157，为防止该病的进一步传播奠定基础。

1　材料与方法

1.1仪器和试剂

VIDASO157（含H7）检测试剂盒（法国梅里埃）、改良EC肉汤基础（广州环凯），其余试剂均为分析纯试剂；全自动荧光酶免疫分析仪（MINI VIDAS，法国梅里埃）、水浴锅、生物安全柜。

1.2样品

无菌采取冻肉库中的冻肉，冷藏运送至实验室待检。

1.3方法

1.3.1无菌操作取25g样品放入盛有225mL改良EC肉汤中，42℃培养18～24h。

1.3.2取1mL培养后的菌液，95～100℃加热5min，冷却至室温。

1.3.3取0.5mL培养液，加入mini VIDAS检测试剂条的加样孔内，上机检测，最后根据仪器读出的荧光值自动判定结果。

2　结　果

将样品进行培养后，上机检测，其结果如表1所示。

表1　样品中大肠杆菌O157检测结果

3　讨　论

VIDAS法只需要将煮沸后的增菌肉汤加入到样品孔，所有的检测步骤均有仪器自动操作完成，最后由仪器自动判读结果，并打印结果报告单。该方法省去了提取DNA的步骤，比荧光PCR效率更高，更节省人力。而VIDAS O157（含H7）检测试剂盒是目前检测大肠杆菌O157的最快方法之一，并同时获得了AFNOR/ISO 16140和AOAC-RI两项认证。该方法主要应用重组噬菌体蛋白质，是食品病原体筛查的最新技术，具有独一无二的的特异性和敏感性。该方法最快只需8h即可得出结果，而传统的方法需要长达24h才能出结果。因此该方法十分适合于临床大肠杆菌O157的快速筛检。

本研究从冻肉库中采集部分样品进行大肠杆菌O157的检测，从结果可以看出，从鸡肉和鸭肉中各检出一份阳性样品，阳性率分别为5.9%和12.5%。而猪肉和羊肉中则未检测到阳性样品。由于是随机档口采样，所以导致各肉类的样品数量不同，有些样品基数较少，可能是没有检测到阳性样品的原因之一。接下来，要进一步对全市范围内的肉类食品进行大范围采样，进行大肠杆菌O157筛选，确保食品安全。

从结果可以看出，我市冻肉类食品中存在有大肠杆菌O157污染情况，鉴于该细菌的严重危害，应该引起我们的警惕，以免引起该病在我市范围内暴发。本研究为初期使用该方法，验证方法的可行性，从过程来看，该方法值得在全市范围内推广使用，用于大肠杆菌O157的快速检测，将问题控制在最小范围内，最大程度的保障市民的身体健康。

10.3969/J.ISSN.1671-6027.2016.08.021

叶毅飞（1983～），广东省东莞市人，助理兽医师