Livin在不同病理分型脂溢性角化病组织中表达的研究

Livin在不同病理分型脂溢性角化病组织中表达的研究

许向前1陈勇飞2梁伟容3张弘 （11.深圳市龙岗中心医院（深圳市第九人民医院）皮肤科深圳518116；2.深圳市龙岗区第二人民医院皮肤科深圳518101；3.深圳市大鹏新区南澳人民医院皮肤科深圳518121）

目的：观察Livin在不同病理分型脂溢性角化病组织中的表达情况。方法：脂溢性角化病病例120例（6个类型，每种病理类型各20例），并以10例正常包皮组织作为对照，采用免疫组化SP法对所有病例的Livin表达情况进行染色检测。结果：Livin在不同病理分型的脂溢性角化病组织中的阳性表达率均高于正常包皮组织，差异均有统计学意义（P＜0.05），不同病理分型脂溢性角化病组织中Livin的表达强度差异不具有统计学意义（P＞0.05）。结论：脂溢性角化病组织普遍表达Livin，提示其发病可能与凋亡抑制相关，其发生可能与Livin表达上调有关；Livin在脂溢性角化病组织中的表达强度与病理分型无关，提示不同病理分型SK组织细胞凋亡过程中可能存在相同路径。

脂溢性角化病 病理分型 Livin免疫组织化学

脂溢性角化病（seborrheic keratosis，SK）是一种与日光照射、老年性皮肤变化或感染有关，并有潜在恶变倾向的常见良性表皮内肿瘤，目前关于其确切的发生发展机制尚不明了，大量的研究显示在脂溢性角化病组织中角质形成细胞出现成熟迟缓和凋亡受阻。我们既往的研究［1］检测发现，Livin在SK皮损中明显表达上调，并随着患者年龄增长、病程延长，阳性表达率明显增高，而与患者的性别、皮损直径大小、皮损部位及数目的多少无明显相关性。为了进一步探讨Livin在SK皮损中表达强度的差异与不同病理分型的关系，我们应用免疫组化SP法检测120例不同病理分型脂溢性角化病组织中Livin的表达情况，现将结果汇报如下。

1　资料与方法

1.1临床资料：回顾选取2006年10月～2014年10月就诊于我院皮肤科资料保存完整，临床表现和病理诊断均符合脂溢性角化病的病理标本120例，所有病理切片按朱学骏、孙建方主译的《皮肤病理学-与临床联系》［2］制订的标准将SK组织学分型分为6个类型：①角化过度型；②棘层肥厚型；③腺样型；④菌落型；⑤刺激型；⑥黑素棘皮瘤型，每种病理类型20例。并对不同病理类型脂溢性角化病患者的性别、皮损大小、发病部位、皮损数目、年龄及病程进行比较，差异均无统计学意义。对照组为10例正常健康男性包皮标本，均来自我院泌尿外科门诊进行包皮环切术的男性包皮，既往无外生殖器疾病史，并经组织病理学证实为正常上皮。

1.2主要实验试剂：Livin为兔抗人多克隆抗体，工作浓度为1∶50，SP检测试剂盒，DAB显色试剂盒均购自武汉博士德生物工程有限公司。

1.3实验方法：应用免疫组化SP法，先通过枸橼酸盐缓冲液微波热修复，Livin抗体的工作浓度为1∶50，再进行DAB显色及苏木精衬染。PBS代替一抗作阴性对照，已知乳腺癌阳性片做阳性对照。

1.4结果判定标准：采用半定量积分方法，根据免疫组化染色反应的强度及阳性细胞数量的百分率分别记分。其中染色强度以多数细胞的呈色反应为准，棕褐色为3分，棕黄色为2分，浅黄色为1分，不着色为0分；阳性细胞数的百分率＞75%为4分，51%～75%为3分，26%～50%为2分，6%～25%为1分，＜5%为0分；每个视野染色强度得分与阳性细胞百分率相乘为该视野得分，双盲法每例随机选取5个不同高倍视野各计数100个细胞，最终得分为5个视野得分的平均值。阴性（-）为0～3分，弱阳性（+）为4～8分，阳性（++）为9～12分。

1.5统计学方法：应用SPSS16.0统计学软件进行数据分析，不同病理类型SK组织与正常包皮组织中Livin表达阳性率比较用X2检验，不同病理类型SK组织中Livin表达强度用秩和检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2　结果

Livin在 SK组织中阳性表达为细胞浆着色（如图1，2，3，4，5，6），表皮全层均有表达，越近基底层表达强度越高，不同病理分型的表达部位无差异。120例SK组织中，Livin表达阳性103例，阴性17例，阳性率为85.8%。10例正常包皮组织对照组中阳性1例（图7），阴性9例，阳性率为10%。不同病理分型SK组织中Livin的表达阳性率明显高于正常包皮组织，两者之间差异均有统计学意义（P＜0.05）。Livin在不同病理亚型的表达情况见表1，在角化过度型、棘层肥厚型、腺样型、菌落型、刺激型、黑素棘皮瘤型之间Livin的表达强度差异均无统计学意义（X2=4.786，P=0.443＞0.05）。

表1　Livin在不同病理分型SK组织与正常包皮组织中的表达情况

*不同病理分型的SK组织与正常包皮组织的阳性率比较；**不同病理分型的SK组织中表达强度的比较。

3　讨论

脂溢性角化病（SK）多发于中老年人，又称为老年疣，在临床中虽然癌变率较低，但也应注意存在恶变的可能性。目前，关于其致病原因主要认为与日光照射［3～4］、遗传因素、年龄［5］及HPV病毒［6］感染有关。其确切的发生发展机制尚无定论，大量的研究证实在脂溢性角化病组织中，角质形成细胞凋亡受阻以及角质形成细胞成熟迟缓［7］。近年关于凋亡蛋白抑制因子（IAPs）蛋白的研究显示，其过度表达可引起凋亡不足与肿瘤的发生、发展关系十分密切，Livin是IAPs家族中的新成员，其组织分布和作用机制具有一定的独特性，主要功能是抑制细胞凋亡。Livin是IAP家族主要成员之一，可以直接或间接抑制caspase凋亡信号转导过程中的起始分子caspase－3/－7和caspase－9的活性而阻断细胞凋亡的发生［8～9］。Livin随着进一步研究的深入，发现Livin不仅在越来越多的恶性肿瘤中有表达，而且在良性肿瘤中亦有不同程度表达。我们既往的研究显示［1］，在SK皮损中Livin表达阳性率明显高于正常包皮组织，并随着患者年龄增长、病程延长，Livin表达阳性率明显增高，而与患者性别、皮损直径大小、发病部位及皮损数目多少无明显相关性。推测这可能与随着患者年龄增加、病程延长接受日光照射的增多，皮损潜在恶变危险性增高有关。

病理组织学中将脂溢性角化病分为6型，分别为角化过度型、棘层肥厚型、腺样型、菌落型、刺激型和黑素棘皮瘤型。角化过度型中具有显著的角化过度和乳头瘤样增生，棘层肥厚不明显，表皮大部分为鳞状细胞，可见少量基底样细胞，假性囊肿多见。棘层肥厚型中可见明显的棘层细胞，也可见部分角化过度和乳头瘤样增生，表皮增厚形成粗网状或条状，基底样细胞明显多于鳞状细胞，假性角囊肿及真角质囊肿可见，黑素多于正常。菌落型中细胞巢明显见于表皮内，部分类似表皮内上皮瘤，细胞巢的细胞核深染而且小，有些则由较大的基底样细胞组成，可见明显的细胞间桥。腺样型由大量的细条束状表皮细胞构成，条束相互分支或交织，由表皮向真皮伸展，细胞束条多数由两层基底样细胞组成，似腺体，少见角质囊肿，有明显黑素。刺激型为较多鳞状旋涡，由鳞状细胞组成，细胞扁平，嗜伊红变性常见，棘突松解现象可见少数病变中。黑素棘皮瘤型表现为瘤内黑素细胞明显增多，黑素分布于整个皮损区内。不同分型之间虽有区别但并无明显的分界线，各型表现都以角化过度、假性角囊肿、乳头瘤样增生基底样细胞为主，目前更多地认为是病理谱系，表现为向其中一个病理亚型方向发展的倾向。

我们的研究证实作为凋亡抑制蛋白的Livin在脂溢性角化病的普遍高表达，提示脂溢性角化病的发生发展与凋亡抑制的密切相关；而不同病理类型脂溢性角化病组织Livin表达强度无显著差异，提示Livin的表达强度与病理亚型无关，虽然亚型不同，但是其凋亡代谢路径是相同的。

我们既往的研究［1］结果证实Livin与survivin表达呈正相关，两者表达强度无差异。而孙令［10］等在关于脂溢性角化病中survivin表达的研究结果显示，在角化过度型、棘层肥厚型及腺样型脂溢性角化病中，都观察到survivin的明显表达，而在刺激型脂溢性角化病和正常表皮不表达。推测可能与角化过度型、棘层肥厚型及腺样型脂溢性角化病组织中多以基底样细胞为主，而在刺激型脂溢性角化病多由分化成熟的鳞状细胞组成，细胞凋亡增强，可能与survivin不表达有关。大量的研究显示Livin 与survivin两者虽然在结构和功能上有许多共性，但也存在较多区别，这可能与两者表达的差异有关，也可能与我们研究选取病例相对较少有关。

总之，脂溢性角化的发生机制是一个复杂的，多种因素、多种基因、多个阶段参与其中的生物学事件，其确切的发生发展机制还需在以后工作中深入全面地观察研究。

［1］许向前，莫令君，李健清，等.Livin、Survivin和Fas在脂溢性角化病组织中的表达［J］.中国皮肤性病学杂志，2012，26（10）：890-893.

［2］朱学骏，孙建方，主译.皮肤病理学－与临床联系［M］.北京：北京大学医学出版社，2007：1158-1163．

［3］Ming M，Shea CR，Feng L，et al.UVA induces lesions resembling seborrheic keratoses in mice with keratinocyte-specific PTEN downregulation［J］.J Invest Dermatol，2011，131（7）：1583-1586．

［4］Saeed AK，Salmo N.Epidermal growth factor receptor expression in mice skin upon ultraviolet B exposure–Seborrheic Keratosis as a coincidental and unique finding［J］.Adv Biomed Res，2012，1：59．

［5］Blagosklonny MV．Prospective treatment of age-related diseasesby slowing down aging［J］．Am J Pathol，2012，181（4）：1142-1146．

［6］Tardío JC，Bancalari E，Moreno A，et al.Genital seborrheic keratoses are human papillomavirus-related lesions.A linear array genotyping test study［J］.APMI，2012，120（6）：477-483．

［7］Ahmed NU，Ueda M，Ichihashi M.P21 WAF1/CIP1 expression in nonmelanoma skin tumors［J］.J Cutan Pathol，1997，24（4）：223-227.

［8］Kappler M，Rot S，Taubert H，et al.The effects of knockdown of wild-type survivin，survivin-2B or survivin-delta3 on the radio sensitization in a soft tissue sarcoma cells in vitro under different oxygen conditions［J］.Cancer Gene Ther，2007，14（12）：994-1001．

［9］Kasof GM，Gomes BC.Livin，a novel inhibitor of apoptosis protein family member［J］.J Biol Chem，2001，276（5）：3238-3246．

［10］孙令，栾莉，王傲雪，等.脂溢性角化病皮Survivin表达的免疫组化观察［J］.中国皮肤性病学杂志，2007，21（12）：726-728.

Expression of Livin in different pathologic types of seborrheic keratosis

Xu Xiangqian1Chen Yongfei2Liang Weirong3Zhang Hong1（1.Department of Dermatology，Longgang District Central Hospital of Shen Zhen，Shenzhen 518116，China；2.Department of Dermatology，Longgang District Second People′s Hospital of Shenzhen，Shenzhen 518112，China.3.Department of Dermatology，Dapeng newDistrict Nan'ao People's Hospital of Shenzhen，Shenzhen 518121，China）

0bjective：To explore the expression of Livin in different pathologic types of seborrheic keratosis.Methods：120 cases with SK were grouped by pathologic classification（6 types and every groups have 20 cases），10 cases of prepuce of nomal men as control，Immunohistochemical staining method was used to detect the expression of Livin in all cases.Results：The positive expression rate of livin in 6 pathologic classification groups of seborrheic keratosis were significantly higher than in normal prepuce tissues（P＜0.05）；There were no significant differencens in the positive expression levels of Livin among different pathologic classification groups of seborrheic keratosis（P＞0.05）.Conclusion：The higher expression of Livin are observed widespreadly in all types seborrheic keratosis，it suggested that Livin may related with apoptosis inhibition，and play an important role in the pathgenesis of seborrheic keratosis.；The expression levels of Livin in SK are not associated with pathologic types，it indicated that there could be a same mechanism in the cells apoptosis of different pathologic types of seborrheic keratosis.

Seborrheic keratosis Pathologic classification Livin Immunohistochemistry

R752.5

B

1672-8351（2016）09-0134-03