温度调控对番茄灰霉病菌侵染的影响

田帅（辽宁省绥中县农业综合执法大队　125200）

■试验报告■

温度调控对番茄灰霉病菌侵染的影响

田帅
（辽宁省绥中县农业综合执法大队125200）

10.16627/j.cnki.cn22-1215/s.2016.09.022

从群体的角度研究了番茄灰霉病菌对温度的适应性，结果表明灰霉病菌孢子的萌发适温在15～25℃，最适温度为20℃。15～25℃适宜菌丝生长、侵染与扩展，20℃为最适温度。30℃以上病害发展受到抑制。低温有利于病菌产孢，最适温度为15℃。变温研究表明，在一天中，随着30℃以上高温时间的增长，病菌（菌丝）的致病力呈下降趋势，6小时以上高温能够限制病害发展。

温度调控番茄灰霉病影响

温度对植物生长发育及对病原菌的生长、致病性都是一个至关重要的环境因子，温度过高或过低对病原菌的生长均起到抑制作用。灰霉病是番茄设施栽培中最重要的病害之一，该病发生与环境温湿度关系密切。关于温度对番茄灰霉病侵染的影响，虽有一定的研究，但缺乏系统性。有的仅是对单一菌株的研究，因该菌变异性较大，研究缺乏代表性。本文通过温度与番茄灰霉病关系的研究，以期找出利于植物生长而不利于病菌繁殖的温度范围，为病害的生态防治和温室环境调控提供理论依据。

1　材料与方法

1.1材料

供试番茄灰霉病菌株为本课题组经分离纯化保存。供试番茄品种为中杂9号。

1.2方法

1.2.1恒温下不同温度对病菌孢子萌发的影响

选取产孢量大，且致病性较强的菌株转移到PDA平板上，室温下培养，待产生大量孢子后，用离子水配成孢子浓度为4×105 个/mL的孢子悬浮液，在人工箱中做不同温度（15、20、25、30、35℃）的孢子萌发实验，每处理3次重复，在12小时和24小时后镜检孢子的萌发率，每处理4次重复，接种后第2天开始记录发病情况，每天调查一次，共查4次。

1.2.2恒温下温度对番茄灰霉病菌菌丝生长

将保存的不同致病性的原始菌株转移到PDA平板上培养，待菌落长至50～60mm，从菌落的边缘打取d=4mm的菌片，一部分接种到PDA平板中央，然后在不同温度（15、20、25、30、35℃）的人工气候箱中培养，每处理5次重复，第2天开始记录菌落的扩展情况，每天记录一次，共记录4次。

1.2.3恒温下温度对番茄灰霉病菌产孢的影响

1.2.3.1温度对培养基上生长的番茄灰霉病菌产孢的影响。

选取产孢量较大且致病性较强的3个菌株，在PDA平板上培养3天后从菌落边缘打取d=4mm的菌片转到小培养皿（d= 6cm）中，置于20℃人工气候箱中培养，待菌丝长满皿且还未产孢时，将小皿盖去掉，转移到保湿的大培养皿（d=20cm）中，然后放到不同温度人工气候箱中培养，观察产孢情况，每处理3个培养皿。

1.2.3.2温度对病叶上灰霉病斑产孢的影响

从培养3天的菌落边缘打取d=4mm的菌片接种到番茄叶片上，置于23℃人工气候箱中高湿（RH=90％）培养，待叶片上出现一定大小的扩展斑后，将培养皿放入不同温度（15、20、25、30、35℃）的人工气候箱中高湿（RH=90％）培养，观察产孢情况，每处理三个培养皿。

1.2.412小时变温对番茄灰霉菌侵染的影响

将所用菌株转移到PDA平板上，置于20℃人工气候箱中培养，待菌落扩展至50～60mm，打取菌片（d=4mm）进行番茄叶片接种，然后置于不同温度的人工气候箱中变温（15℃//20℃、15℃// 25℃、15℃//30℃、15℃//35℃、20℃//25℃、20℃//30℃、20℃//35℃、25℃//30℃、25℃//35℃、30℃//35℃）培养，每次变温持续12h，先低温后高温，且低温时段作黑暗培养，高温时段作光照培养。第2天开始记录病斑直径，每天记录1次，共记录4次。另一部分待菌落上产生大量孢子后，将其配成孢子浓度为4×105个/mL的孢子悬浮液进行接种。接种后转入人工气候箱中作同样变温培养。第2天开始记录发病情况，每天记录1次，共记录4次。

2　结果与分析

2.1恒温处理与番茄灰霉病菌生长的关系

2.1.1温度对番茄灰霉病各菌株孢子萌发的影响

12小时后灰霉病菌孢子在不同温度下的萌发明显不同。20℃时孢子萌发最好，萌发率达50％以上；其次是15℃，萌发率达到了40％以上；25℃时萌发率开始降低，但仍达10％以上；超过30℃孢子基本不萌发。试验表明，孢子萌发的适温为15～25℃，最适温度为20℃。

可以看出，在试验温度范围内，随着温度的升高，灰霉病菌孢子在番茄叶片上的致病性也随之增强。而且温度越高，病情增加越快。在试验中发现，用孢子悬液接种形成的是点状侵染。病情轻的在接种液滴内有少数侵染点；病情重的形成液滴大小的浸润斑，并不继续扩展。

2.1.2温度对番茄灰霉病菌菌丝生长的影响

表1　温度对番茄灰霉病菌菌落扩展的影响

由表1可以看出，20℃时菌丝生长最快，菌落扩展也最快，其次是25℃，15℃稍慢。30℃时菌落扩展较缓慢，35℃时菌丝不生长。这说明菌丝生长适温为15～25℃，最适为20～25℃，30℃以上高温不利于菌丝生长，对菌丝生长起抑制作用。

2.1.3温度对番茄灰霉病菌菌丝致病性的影响

表2　温度对番茄灰霉病菌菌丝侵染和扩展的影响

由表2看出，20℃时菌丝侵染与扩展速度最快，其次是25℃和15℃，而30℃以上，病斑基本不形成，并且在15～25℃范围内形成的均是扩展型软腐斑。说明菌丝侵染适温为15～25℃，最适仍为20～25℃，30℃以上高温条件下病菌不侵染。

不同温度下番茄灰霉病菌菌丝在番茄果实上的致病性明显不同（见表3），且对不同时期果实的致病性也有所不同。接种后在相对低温下导致了软腐斑的迅速蔓延，20℃时病斑扩展最快，15℃和25℃次之，30℃以上基本不能形成病斑。说明15～25℃是病菌侵染果实的适宜温度。从表中还可以看出，青果期最易感病，小幼果期较抗病，果实渐熟时抗病性也增强。

表3　温度对番茄灰霉病在果实上致病性的影响

表4　12小时恒定变温对番茄灰霉病菌致病性的影响

2.1.4温度对番茄灰霉病菌产孢的影响

无论是在离体培养上，还是在罹病叶片上，在高湿的情况下，番茄灰霉病菌在15℃下产孢最快且产孢丰富，20℃次之。当温度达到25℃时产孢量开始下降，30℃以上高温病菌基本上不产孢。由此说明了番茄灰霉病菌在低温下容易形成孢子，高温抑制孢子的形成。

从试验结果看，在变温处理中虽然采取了先低温后高温，但只要一天中有一半时间为30℃以上高温就适于孢子侵染。所有温度在25℃以下低温处理的适于菌丝侵染。但孢子侵染不形成扩展斑，并没对叶片造成严重危害，而菌丝侵染则易形成大的扩展性软腐斑，容易使叶片腐烂，从而造成较大的危害。

3　结论与讨论

从群体角度对番茄灰霉病菌对温度适应性研究结果表明，孢子的萌发适温在15～25℃之间，而最低适温为20℃，较国内其他学者研究的结果低5℃。15～25℃适宜病害侵染与扩展，20℃左右为最适侵染温度；低温有利于产孢，产孢的最适温度为15℃；25℃以上发病减轻，30℃以上病害的发展受到抑制，35℃菌丝已不再生长，侵染亦不能发生。

在试验中发现孢子的萌发温度与在叶片上的致病温度不同，孢子萌发的适温在25℃以下的低温范围内，而孢子在叶片上的致病适温在25℃以上的高温范围内，并且随温度的升高，病情加重。在试验中还发现，在无外源营养的条件下，用孢子悬液接种，所形成的侵染只是在液滴中形成很少的侵染点，病情重的形成液滴大小的浸润性腐烂斑，但并不继续扩展。在温室盆栽无外源营养的条件下，灰霉病菌孢子接种发病也较轻。从田间番茄灰霉病发病规律来看，病菌初侵染部位主要为花、果实的残留花瓣和柱头，叶片从叶缘受伤（肥料、冻害、机械损伤等）的部位或以掉落到叶片的花粉为主要侵染点。因此，番茄灰霉病菌的孢子在田间虽然可以成为一个传播途径，但在病菌侵染的过程中，还需要一定的外源营养，在该处形成一定量的菌丝体，再侵入寄主。出现孢子萌发和致病性的不一致的原因可能是因为连续高温使处在孢子液滴下的叶片感病性增强，叶表外渗物增加等，其机理还有待于进一步研究。

甘糖碱番茄素是一类具有抗真菌活性的化合物。番茄的小幼果内还有大量的番茄素，因此番茄素在幼果期间能对番茄灰霉病菌的生长起到一定的限制作用。本文对果实受侵染研究中观察到，小幼果抗病性较强，可能与小幼果内的番茄素含量有关。

［1］朱建兰.番茄灰霉病菌的生物学特性研究［J］.甘肃农业大学学报，1995，30（1）：73-78.

［2］李宝聚，李凤云.番茄灰霉病人工接种技术研究［A］.中国番茄病虫害及其防治［C］.中国农业出版社，1997，105-108.

［3］李宝聚，朱国仁.番茄灰霉病发展症状诊断及综合防治［J］.植物保护，1998，24 （6）：18-20.

［4］李宝聚，朱国仁.番茄灰霉病果初侵染部位及防治新技术 ［J］.植物病理学报，1999，29（1）：63-67.

［5］李凤云，李宝聚.番茄灰霉病病原菌的生物学特性［J］.辽宁农业科学，1992，（4）：34-36。

［6］DL LennaP，Marciano P，MargoP.Comparative investigation onmorphological and physiological features of three isolates of Botrytiscinerea［J］.PhytopathZ，1981，（100）：203-211.