液相色谱-串联质谱法测定芦荟苷方法的建立

□ 郑　钰　廖建萌　黄国方　湛江市食品药品检验所　邢　华　湛江市质量计量监督检测所　罗　林　湛江市质量技术监督局

液相色谱-串联质谱法测定芦荟苷方法的建立

□ 郑钰廖建萌黄国方湛江市食品药品检验所邢华湛江市质量计量监督检测所罗林湛江市质量技术监督局

建立液相色谱-串联质谱法测定芦荟苷的方法，采用ESI负离子模式，多反应监测测定芦荟苷的分子离子峰为417.2，定量离子为297.2，定性离子为268.2和250.2；对方法进行验证，液相色谱-串联质谱法测定芦荟苷的线性R=0.999 4，出限为1.0 nμg/L，精密度RSD≤3%，是一种理想的检测方法，为芦荟制品质量检测、食品风险评估、合成分析研究、代谢研究提供数据及技术手段。

液相色谱-串联质谱法；芦荟苷；ESI负离子模式

1　芦荟苷概述

芦荟苷属蒽醌类化合物，是芦荟中的有机活性成分。据医学报导，芦荟苷有利于肠道内废物排除，研究发现芦荟苷具有杀菌、消炎解毒、促进伤口愈合等作用[3]。如今国家已正式将芦荟列入保健食品原料可利用的中药名单中，芦荟原料的安全评价列入食品安全专项研究课题中。

现有的检测芦荟苷方法有分光光度法，高效液相色谱紫外检测法（HPLC-UV）、液质联用、薄层扫描法等方法。目前液质联用法测定芦荟饮料中的芦荟苷未见相关报道。本文将用液相色谱-串联质谱法测定芦荟饮料中的芦荟苷，为产品的检测方法提供数据及技术手段支持。

2　实验部分

2.1仪器及试剂

LCMS-8030液相色谱质谱联用仪（日本岛津公司）、C18液相色谱柱（日本岛津公司）、XS205电子分析天平（METTELER TOLEDO）。

甲醇:高效液相色谱纯（天津大茂化学试剂厂）。乙腈：高效液相色谱纯（天津大茂化学试剂厂）。氨水、乙酸铵：优级纯（广州化学试剂厂）。

2.2实验方法及结果

2.2.1色谱条件

色谱柱：C18，150 mm×2.1 mm，5 μm。柱温：30℃。流动相：20%甲醇-80% 5 mmol/L乙酸铵水溶液（含0.1%氨水）。流量：300.0 μL/min。进样体积：10.0 mL。运行时间：10 min。

2.2.2质谱条件

检测模式：ESI负离子，多反应监测（MRM）。电喷雾电压（IS）：4 500 V。离子传输温度（TEM）：400℃。雾化气流量：3.0 L/min。干燥气流量12.0 L/min。

2.3结果与讨论

2.3.1分子离子峰的确定

将质谱仪调整到最佳状态，配制1.0 μg/mL的芦荟苷标准溶液，进样10 mL，分别在ESI正、ESI负离子的模式下进行全扫描监测，扫描范围100 ~500 u，发现在正离子模式下，419.2 u和436.2 u的响应较高。4417.2 u为负离子模式下[M-H]-分子离子峰。考虑到正离子模式下芦荟苷形成分子离子峰并不唯一，且正离子模式受到的干扰多使测定的灵敏度及稳定性下降，负离子模式测定芦荟苷含量的灵敏度更高，更稳定，因此选择负离子模式，417.2 u作为芦荟苷测定的母离子。

2.3.2二级质谱

配制1.0 μg/mL的芦荟苷标准溶液，进样10 mL，扫描模式为Q1全扫描-质子扫描，能量（CE）范围为10 ev~50 ev，结果如图1所示。图1中，芦荟苷分子离子417.2产生的二级质谱较稳定的有297.2、268.2和250.2，其中相对丰度最高的为297.2，因此确定297.2作为芦荟苷测定的定量离子，268.2和250.2作为定性参考离子。

图1　芦荟苷测定的定量离子及定性参考离子

2.3.3离子传输及碰撞能量的优化

碰撞区发生在Q2，合适的碰撞能量能够产生稳定，相对丰度高的定量及定性离子。配制1.0 μg/mL的芦荟苷标准溶液，进样10 μL，仪器自动优化，结果见表1。

表1中，Q1主要对417.2传输，有相同的预偏转电压均为20 v；Q3传输的预偏转电压分别为21 v、19 v和30 v。

图2　芦荟苷标准曲线图

表1　芦荟苷测定LC-MS/MS质谱检测条件

表2　芦荟苷相关系数表

表3　精密度表

表4　定量限以及信噪比

图3　芦荟苷标准溶液离子流图

图4　芦荟苷样品溶液离子流图

2.3.4线性关系

配制的芦荟苷浓度为0.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0 ng/mL的 标准溶液进行实验，以峰面积计数并绘制标准曲线，标准曲线图如图2所示，相关系数见表2。相关系数为0.999 3，可以看出液相色谱-串联质谱法测定芦荟苷在1~100 ng/mL内线性良好。

2.3.5精密度试验

重复取样11次，又在此后的10日内每日进样1次，得到日内与日间精密度见表3。由表3可知，液相色谱-串联质谱法测定芦荟苷精密度RSD%<3.0%，能够满足分析要求（RSD%<5.0%）。

2.3.6最低检出限

当浓度为1.0 ng/mL时有良好的响应，结果见表4，液相色谱-串联质谱法测定芦荟苷的检出限为1.0 ng/mL。

2.4样品的测定

饮料样品在10 000 r/min下均质1分钟，然后称取5.0 g，加甲醇约45 mL,超声提取10分钟，冷却到室温后定容50 mL,过0.22 μm滤膜，上机测定。

芦荟苷主要有两种同分异构体，在实际样品的测定时，可以改变流动相的比例将两种同分异构体在同一时间出峰，如图3所示。要将两个峰加和，如图4所示。

3　结论

对方法进行验证，液相色谱-串联质谱法测定芦荟苷的线性关系R=0.999 3，出限为1.0 ng/mL,精密度RSD≤3%,是一种理想的检测方法，为芦荟苷的产品质量检测、食品风险评估、合成分析研究、代谢研究提供技术数据及技术手段。

［1］王富丽.芦荟的研究与临床应用［J］.继续医学教育，2001（1）：55-56.

［2］王勇，王宗伟，黄兆胜，等.芦荟多糖对肿瘤化疗的增效和减毒作用研究［J］.中药新药和临床药理，2002，13（2）：89～91.

［3］吴锋，赵喜，薛华，等.芦荟灵芝胶囊的润肠通便作用［J］.交通医学，2008，22（4）.

备注：邢华为第二作者