核酸探针和PCR技术在食品致病菌检验中的应用

□ 刘　洋　李苗苗　乌海市食品药品检验检测中心

核酸探针和PCR技术在食品致病菌检验中的应用

□ 刘洋李苗苗乌海市食品药品检验检测中心

随着我国经济的发展，人们生活水平越来越高，越来越重视食品安全问题，与此同时，食品安全检验技术也得到了广泛应用。由于传统的食品检验方法费时费力、繁琐、准确性低，人们开始致力于研发新的检测技术，其中核酸探针和PCR技术是最近发展起来的两种食品安全检验高新生物技术，有着快速、敏感、准确的优势，具有很大的投资效益。

核酸探针种类及应用

核酸探针原理是碱基配对，是将带有标记物的已知序列的核酸片段，与其互补的核酸序列杂交，形成双链，用以检测未知样品中是否具有与其相同的序列，并能进一步判定其与已知序列的同源程度。由于每一种致病菌都具有独特的核酸片段，所以核酸探针技术具有较强的敏感性和特异性，因此适用于多种致病菌的检验中。

放射性标记探针

放射性标记探针用放射性同位素作为标记物。常用的同位素有32P、3H、35S。放射性标记探针的优点是灵敏度高，缺点是易造成放射性污染，同位素半衰期短、对人体有伤害，因此，目前放射性标记的探针不能实现商品化。

非放射性标记探针

非放射性标记探针的标记物是生物素和地高辛，二者都是半抗原。生物素标记核酸探针对身体无害，但是受到紫外线的光照射后易发分解。地高辛标记核酸探针的检测灵敏度相当于放射性同位素标记探针，并且特异性优于生物素标记探针，其应用日趋广泛。

核酸探针种类不同会给检验带来不同程度的影响，我国正在积极地投入研究，找到科学的策略。

PCR技术应用

PCR技术主要的原理就是针对生物体外的特定DNA分子链进行高效扩增，将微量的DNA大幅增加。就是通过人为控制体外合成系统的温度，使双链DNA变成单链DNA，单链DNA与人工合成的引物配对，形成部分双链，在DNA聚合酶的催化下使引物沿着单链模板延伸为双链DNA。由于其在食品的致病菌检验过程中具有特异、敏感的特点，因此在食品的检验中具有广泛的应用潜力。

对单核细胞增多症李氏杆菌的应用

Deneer 等人采用PCR技术对食品中李氏杆菌的溶血基因进行扩增，不仅检验用时短，并且样品中只需含有少量细菌即可被检出。

对沙门氏菌的应用

Nguyen 等人根据沙门氏菌某段克隆株具有的属特异性序列设计出一对引物,能快速地检出肉食品标本中的沙门氏菌，检测的敏感性和特异性很高，保证了检测的准确性。

PCR技术应用虽然可以准确地检测到食品中的致病菌，提高食品安全、食品质量，但是 目前还是有较大的弊端，主要在于不能正确地对该项技术进行规范性的操作，导致结果差异很大，降低其方法的灵敏度和特异性。尽管如此，相信随着经济不断的发展，技术不断的创新、普及与发展，PCR技术会在食品检测中会得到更多地应用。

结语

本文对两种生物技术的详细介绍，尤其是核酸探针技术和PCR技术在食品检验中的重要性和优缺点，这两种技术虽然存在着一定的缺陷，但是它们在食品检验中有很高的应用价值，我国还是应该加大投入力度，重视管理，使其为我国将来食品安全提供重要的保障。