莪术对甲氨蝶呤在正常和气滞血瘀大鼠体内药动学的影响

徐雨静，赵瑞芝，胡巧红（.广东药科大学药学院，广东广州50006；2.广州中医药大学第二临床医学院，广东广州50405；3.广东省中医药科学院，广东广州50006）

莪术对甲氨蝶呤在正常和气滞血瘀大鼠体内药动学的影响

徐雨静1，赵瑞芝2，3，胡巧红1
（1.广东药科大学药学院，广东广州510006；2.广州中医药大学第二临床医学院，广东广州510405；3.广东省中医药科学院，广东广州510006）

目的探讨莪术对正常和气滞血瘀大鼠体内甲氨蝶呤（MTX）药动学的影响，为临床合理用药提供依据。方法采用束缚和冰水浴2周构建大鼠气滞血瘀模型。将正常大鼠和气滞血瘀大鼠各分成单用组（MTX 5.17 mg/kg）和联合用药组（MTX 5.17 mg/kg，醋莪术0.93 g/kg），灌胃给药，于不同时间点进行眼眶静脉丛采血500 μL/次，固相萃取（SPE）法处理血浆后用HPLC法进行分析，DAS2.0软件非隔室模型估算药动学参数。结果除Tmax外，正常组与模型组主要药动学参数差异均无统计学意义；联合用药组与单用组比较，AUC0-t、AUC0-∞、Cmax均表现出增大趋势。结论 血瘀模型对甲氨蝶呤药动学无显著影响；模型和正常情况下，莪术均可促进MTX吸收，两者合用时应减少MTX剂量并关注MTX毒副反应。

甲氨蝶呤；莪术；药动学；气滞血瘀

甲氨蝶呤（methotrexate，MTX）是一种抗叶酸类抗肿瘤药物，可抑制滋养细胞增生，破坏绒毛，使胚胎停止发育、坏死脱落最终吸收，被认为是治疗异位妊娠最常用和有效的药物［1］。中医理论认为妊娠属于少腹瘀血证。莪术性温味辛，具有破血行气、消积止痛的功能。近几年来，临床有应用莪术结合MTX治疗异位妊娠的报道［2］，而莪术对MTX体内过程的影响尚不清楚。研究表明，疾病状态会改变药物在体内吸收、分布、代谢和排泄过程，进而影响药效和毒性［3］。本文拟考察莪术对MTX在正常和气滞血瘀大鼠体内药动学参数的影响，探讨其药效增强作用机制，为临床合理用药提供参考。

1　仪器与材料

1.1仪器

Agilent1200高效液相色谱仪，配VWB检测器（美国安捷伦公司）；VG3涡旋震荡仪（德国IKA公司）；G20型台式离心机（河北省安新县白洋离心机厂）；Milli-Q型纯水机（美国Millipore公司）；LBYXC40全自动动态血沉测定仪（广州中利医疗仪器科技有限公司）；SPE萃取柱（Waters公司Sep-Pak Vac 1cc，批号:039035127A）。

1.2试药

醋莪术（广西，批号:150200561，康美药业有限公司）；MTX对照品（广州绿百草生物科技有限公司，批号:10038-201104）；甲氨蝶呤片（上海信谊药厂有限公司，批号:120306）；NaHCO3（国药集团化学试剂有限公司，批号:20120327，分析纯）；甲酸、甲醇均为色谱纯，水为超纯水。

1.3动物

健康雄性SD大鼠24只，SPF级，体质量（300± 20）g，购自南方医科大学实验动物中心，生产许可证号:00115397。

2　方法

2.1莪术提取液的制备

将醋莪术饮片捣碎，用水浸泡1 h后，加热回流煎煮3次，滤过，合并滤液，将药液浓缩后得莪术水煎液。

2.2样品的处理

将血浆100 μL加到活化后的SPE萃取柱上，静置吸附后，以水1.0 mL洗脱，弃去洗脱液，再以含质量分数0.2%甲酸的甲醇1.0 mL洗脱，EP管收集洗脱液。将收集的样品置氮吹仪下吹干，用甲醇-0.1%（质量分数，下同）甲酸水 100 μL复溶，过0.22 μm滤膜后，取10 μL进样分析。

2.3样品中MTX的测定

参照本实验室前期方法，应用HPLC法测定样品中的MTX［4］，色谱条件:Diamonsil C18（2）色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm，迪马公司）；流动相为甲醇-0.1%甲酸水梯度洗脱（0～8 min，10∶90；8～10 min，60∶40；10 min，100∶0）；流速为1 mL/min；检测波长为302 nm；柱温为27℃；进样量为10 μL。在上述色谱条件下，血浆中内源性物质不干扰MTX的测定。MTX在0.052～5.006 mg/L线性关系良好（r= 0.999 6），检测限为0.052 mg/L，提取回收率68%～74%，日间、日内精密度均小于5.9%，提取回收率为68%～74%。

2.4气滞血瘀模型的建立

参照文献［5］方法进行建模:每日冰水浴8 min，大鼠固定器束缚2 h。随着造模时间延长，模型组出现爪尾部紫暗、大便稀、体质量减轻、被毛无光泽等症状。造模2周后测定血黏度，模型组血黏度显著升高，提示模型成功。

2.5药动学研究

将正常大鼠和模型大鼠各分为单用组和联用组，每组6只。实验前禁食12 h，自由饮水。单用组灌胃给予MTX（以质量分数5%的NaHCO3溶液溶解）5.17 mg/kg，联用组灌胃MTX 5.17 mg/kg和莪术提取液0.93 g/kg，灌胃容积为10 mL/kg。灌胃后用乙醚麻醉，于给药后0.17、0.33、0.67、1、2、4、6、8、9 h眼眶静脉丛采血500 μL，置于抗凝管中，所得血样静置1 h后，3 500 r/min离心10 min，吸取上清液，按“2.2”项下方法处理血浆样品，按“2.3”项下方法分析。

3　结果

各组MTX的平均血药质量浓度-时间曲线见图1。用DAS2.1.1药动学软件，非隔室模型估算药动学参数，见表 1。组间比较用独立样本 t检验（SPSS19统计软件）。由表1可见，MTX药动学参数与Kuroda等［6］所描述的一致，表现为吸收迅速，并迅速分布、消除。正常组中，与单用组相比，联用组血浆 MTX的 AUC0-t、Cmax显著升高（P＜0.05），Cmax、AUC0-t、AUC0-∞分别增加 64.8%、28.1%、30.4%，CL降低16.4%。模型组中，联合用药组显示与正常组相同的趋势，Cmax、AUC0-t、AUC0-∞分别比单用组增加21.3%、22.0%、33.2%，CL则降低34.7%，Tmax提前79.9%。模型组与正常组比较，达峰时间明显提前，其他药动学参数与正常组差异无统计学意义。无论是正常组还是模型组，联合用药组均表现出AUC0-t、AUC0-∞、Cmax增加，Tmax推迟的趋势，提示莪术可提高甲氨蝶呤的生物利用度。

图1　大鼠体内MTX的平均血药质量浓度-时间曲线Figure 1 Drug concentration-time profiles of methotrexate after oral administration with methotrexate alone or combined with Curcumae Rhizoma（n=6）

表1　MTX的药动学参数Table 1 Pharmacokinetic parameters of methotrexate，n=6）

表1　MTX的药动学参数Table 1 Pharmacokinetic parameters of methotrexate，n=6）

单用组中，模型组与正常组比较:*P＜0.05；正常组中，联用组与单用组比较:#P＜0.05。

参数　　正常-单用　　正常-联用　　模型-单用　　模型-联用AUC0-t/（mg·h·L-1）　0.654±0.182　0.838±0.099#　0.691±0.044　0.843±0.110 AUC0-∞/（mg·h·L-1）　1.887±0.826　2.460±1.240　2.413±1.847　3.213±1.488 MRT0-t/h　4.132±0.140　3.902±0.409　4.163±0.292　4.04±0.398 t1/2/h　14.317±12.59　13.705±7.245　15.932±13.349　16.4392±7.304 Cmax/（mg·L-1）　0.126±0.037　0.201±0.043#　0.150±0.050　0.182±0.057 CL/（L·h·kg-1）　3.104±1.025　2.500±1.051　3.001±1.462　1.958±0.986 Tmax/h　0.417±0.037　0.639±0.267　0.278±0.0857*　0.5±0.183

4　讨论

临床研究显示，MTX联用活血化瘀中药治疗异位妊娠的疗效与MTX联用米非司酮相当，但在包块吸收、缩短住院时间、减小毒副反应等方面更优［7］，然而其作用机制尚不清楚。莪术为破血药，中医理论认为破血药具有破积坚攻的效果，为妇科常用药。本文考察了莪术对MTX在正常和气滞血瘀大鼠体内药动学参数的影响，结果显示莪术可提高MTX的生物利用度，从而提高疗效，这可能是缩短住院时间的原因。MTX毒性较大，生物利用度提高的同时有可能导致毒性增强，提示临床活血化瘀中药联合应用MTX时应密切观察其毒副反应。

据文献［8］报道，机体微环境的改变常通过影响药物代谢酶及转运蛋白进而影响药物的体内过程。本文中血瘀模型对MTX药动学影响主要表现为Tmax提前，AUC0-t、Cmax均有升高趋势，但无统计学意义，提示血瘀状态对MTX药动学影响不明显。然而，血液中的药动学行为是机体不同脏器总体处理结果的综合，尚不能反映MTX在脏器分布的变化，因此血瘀模型是否影响MTX脏器分布并进而影响其药效和毒性，还有待进一步探讨。

［1］曹泽毅.中华妇产科学［M］.2版.北京:人民卫生出版社，2007:1447.

［2］王风梅，王宏霞，王桂忠.活血化瘀消癥汤结合MTX治疗异位妊娠的护理与疗效观察［J］.中国医药指南，2012，10（23）:317-318.

［3］巩仔鹏，陈颖，张瑞杰，等.疾病状态下的中药药代动力学研究进展［J］.中国中药杂志，2015，40（2）:169-173.

［4］李杨，赵亚，卢传坚，等.银屑灵2号方对甲氨蝶呤大鼠体内药物动力学的影响［J］.中药新药与临床药理，2015，26（5）:655-657.

［5］王婷婷，贾乘，陈宇，等.大鼠气滞血瘀证模型的建立及影响因素分析［J］.中国中药杂志，2012，37（11）:1629-1633.

［6］KURODA T，NAMBA K，TORIMARU T，et al.Species differences in oral bioavailability of methotrexate between rats and monkeys［J］.Biol Pharm Bull，2000，23（3）:334-338.

［7］张季青，陈月玲，高丽萍，等.甲氨蝶呤联合活血化瘀中药治疗异位妊娠40例［J］.福建中医药，2009，40（2）: 11-12.

［8］薛春苗，张冰，李连珍，等.虚寒状态下药物代谢酶CYP3A和转运蛋白P-gp变化的体内外实验研究［J］.北京中医药大学学报，2014，37（9）:602-605.

（责任编辑：陈翔）

Effect of Curcumae Rhizoma on the pharmacokinetics of methotrexate in normal and blood stasis rats.

XU Yujing1，ZHAO Ruizhi2，3，HU Qiaohong1
（1.School of Parmacy，Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，China；2.The Second Clinical College，Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine，Guangzhou 510405，China；3.GuangdongProvincial Academy of Chinese Medicine，Guangzhou 510006，China）

Objective To study the effect of Curcumae Rhizoma on the pharmacokinetics of methotrexate in normal and blood stasis rats to provide a basis for clinical rational use of drugs.Methods The method of bondage and ice water bath were applied to establish the blood stasis rat model.The normal and blood stasis rats were divided into methotrexate group（5.17 mg/kg）and combination group（methotrexate 5.17 mg/kg combined with Curcumae Rhizoma 0.93 g/kg）respectively.After intragastric administration，the blood was collected from orbit venousplexus at different interval.Serum samples were prepared by solid phase extraction（SPE）method，and the drug concentration was determined by HPLC method.The data were analyzed by pharmacokinetic software DAS（2.1）with non-compartment modal.Results Except for Tmax，other pharmacokinetic parameters of the normal groups had no statistical difference with model groups. Compared with the methotrexate groups，AUC0-t、AUC0-∞、Cmaxwas increased in combination groups. Conclusion Blood stasis model had no significant effects on the pharmacokinetics parameter of methotrexate.Curcumae Rhizoma could promote the absorption of methotrexate both in normal and model state，indicating that the dose of methotrexate should be reduced when combined with Curcumae Rhizoma. Key words:methotrexate；Curcumae Rhizoma；pharmacokinetics；blood stasis

R969.5

A

1006-8783（2016）04-0403-04

10.16809/j.cnki.1006-8783.2016052401

2016-05-24

广东省中医院资助项目（YK2013B1N11）

徐雨静（1992—），女，2014级硕士研究生，Email:yujing0715@126.com；通信作者:胡巧红（1969—），女，博士，教授，从事微粒给药系统、药物新剂型与新技术研究，Email:hu_qiaohong@163.com

网络出版时间:2016-07-08 9:24 网络出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1413.R.20160708.0924.002.html