肝细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及血管源性生长因子在成人烟雾病不同阶段的变化

吴凌峰 曹文锋 屈新辉 任 玥 张昆南 吴晓牧,.江西省人民医院神经内科，江西南昌 330006；江西省神经病学研究所，江西南昌 330006

肝细胞生长因子、碱性成纤维细胞生长因子及血管源性生长因子在成人烟雾病不同阶段的变化

吴凌峰1曹文锋1屈新辉1任 玥2张昆南1吴晓牧1,2
1.江西省人民医院神经内科，江西南昌 330006；2江西省神经病学研究所，江西南昌 330006

目的 探讨成人烟雾病不同阶段中肝细胞生长因子（HGF）、碱性成纤维细胞生长因子（b-FGF）及血管源性生长因子（VEGF）的变化。 方法 回顾性分析2013年11月～2014年12月江西省人民医院（以下简称“我院”）神经内科住院的行全脑血管造影检查确诊为烟雾病的41例患者临床资料，根据Suzuki分期，8例患者为早期（Suzuki分期1～2期），17例为中期（Suzuki分期3～4期），16例为晚期（Suzuki分期5～6期），同时选择在我院诊治的40例脑动脉粥样硬化患者为阳性对照，另选择我院20例健康体检者为正常对照。采用酶联免疫吸附法（ELISA法）检测上述人群血清中HGF、b-FGF及VEGF浓度。 结果 烟雾病早、中、晚期患者的HGF与动脉粥样硬化患者、健康人比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。烟雾病晚期患者b-FGF与动脉粥样硬化患者、健康人比较，差异有统计学意义（P＜0.05）烟雾病早期患者VEGF与动脉粥样硬化患者、健康人比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。 结论 烟雾病的发生发展过程HGF、b-FGF及VEGF均有参与，但三者作用并不相同，HGF可能在烟雾病整个发生发展过程中均发挥作用，而b-FGF可能在烟雾病晚期发生发展中发挥了作用，VEGF则可能在烟雾病早期发生发展中发挥了作用。

烟雾病；肝细胞生长因子；碱性成纤维细胞生长因子；血管源性生长因子

侧支循环是近年来国内外研究的热点问题［1-2］，通过侧支循环，可以维持病变血管的远端血液供应，从而避免出现脑梗死，当侧支循环好时，预后较好。故其在缺血性脑血管病的发生、发展、治疗、预后中都起到了十分关键的作用，更为重要方面其还是一条可干预的途径［3］。因此需要加强侧支循环建立的基础和临床方面的研究，从而为缺血性脑血管病的治疗开启新的方向。烟雾病是一种以双侧颈内动脉末端及大脑前、中动脉起始部狭窄或闭塞，并在颅底有异常增生血管网的脑血管病［4］，其突出特征之一便是出现颅外向颅内代偿的侧支循环和新生的毛细血管网，其分别代表次级及三级侧支循环。随着病情的发展，新生的毛细血管网会发生不断地变化，呈现出增生、旺盛及衰减的过程，而次级侧支循环也会逐渐建立并起主要代偿供血作用，是目前研究侧支循环变化最好的途径［5］。目前很多国内外研究已提示多种细胞因子在烟雾病患者中表达明显增加［6-9］，其中，肝细胞生长因子（HGF）、碱性成纤维细胞生长因子（b-FGF）及血管源性生长因子（VEGF）最具有代表性［10］，但烟雾病毛细血管网的增生、旺盛和衰减的具体过程及次级侧支循环变化与上述细胞因子的相关性尚不清楚，本研究探讨HGF、b-FGF、VEGF）在成人烟雾病不同阶段的变化，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性分析2013年11月～2014年12月江西省人民医院（以下简称“我院”）神经内科住院的行全脑血管造影检查确诊为烟雾病的41例患者临床资料，其中男15例，女26例，平均年龄为（51.34±8.71）岁，上述患者行相关检查排除相关疾病，同时行全脑血管造影检查确诊为烟雾病，影像学评判标准选择Suzuki分期，2位神经内科医师分别单独进行判定，8例患者为早期（Suzuki分期1～2期），17例为中期（Suzuki分期3～4期），16例为晚期（Suzuki分期5～6期）。同时选择在我院诊治40例脑动脉粥样硬化患者为阳性对照，另选择我院20例健康体检者为正常对照。所选健康对照人员均为血象、血生化、常规心电图、胸片、腹部B超、经颅多普勒超声检查等上述检查项目正常的健康成人。

烟雾病诊断标准：①颈内动脉（internal carotid artery，ICA）末端和/或大脑中动脉（middle cerebral artery，MCA）、大脑前动脉（anterior cerebral artery，ACA）起始端狭窄或闭塞；②其颅底可见烟雾状异常血管网；③病变为双侧性。

脑动脉粥样硬化诊断标准：①全脑血管检查发现血管管腔有狭窄；②排外肌纤维发育不良等其他原因所致血管管腔变化。

烟雾病Suzuki分期的标准［11］：第1期，双侧颈内动脉末端分叉处狭窄。第2期，颈内动脉末端分叉处狭窄，ACA和MCA起始部狭窄并分支扩张，颅底有烟雾血管形成，但无颅外至颅内侧支循环形成。第3期，ACA和MCA主要分支闭塞，烟雾血管非常明显，形成烟雾血管团，但大脑后动脉（PCA）或后交通不受影响，仍无颅外至颅内侧支循环形成。第4期，颅底烟雾状血管开始减少，ICA闭塞已经发展到与后交通动脉的联合处。从颅外到颅内的侧支循环逐渐形成，或有异常增生的新生血管吻合支。第5期，从ICA发出的全部主要动脉完全闭塞，烟雾血管比第4期更少，从颅外到颅内的侧支供血进一步增多。第6期，烟雾状血管完全消失，ICA主干闭塞，仅见到从颅外进入颅内的侧支循环。

1.2 检测方法

烟雾病和动脉粥样硬化组在入院后第2天，正常对照组在当天即采取空腹静脉血6 mL，常温放置30 min，以3000 r/min离心15 min，取血清并将其置于-70℃冰箱备检。各组血清中HGF、b-FGF及VEGF浓度均采用酶联免疫吸附法（ELISA法）检测。检测试剂盒采用武汉博士德生物工程有限公司，检测步骤严格按操作说明书进行。

1.3 统计学方法

采用统计软件SPSS 13.0对数据进行分析，正态分布计量资料以均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t检验；多组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。计数资料以率表示，采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 烟雾病患者、脑动脉粥样硬化患者、健康人一般资料比较

烟雾病患者、脑动脉粥样硬化患者、健康人的一般资料，烟雾病患者、脑动脉粥样硬化患者危险因素比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 烟雾病患者、动脉粥样硬化患者、健康人一般资料比较［n（%）］

2.2 烟雾病患者、动脉粥样硬化患者、健康人血清中HGF、b-FGF、VEGF比较

烟雾病早期、中期、晚期患者的HGF与动脉粥样硬化患者、健康人比较，差异有统计学意义（P＜0.05），烟雾病早期、中期、晚期患者之间HGF相比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。烟雾病晚期患者b-FGF与其他各组比较，表达最为明显，差异有统计学意义（P＜0.05），其余各组间b-FGF差异无统计学意义（P＞0.05）。烟雾病早期患者VEGF与其它各组比较，表达最为明显，差异有统计学意义（P＜0.05），其余各组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 烟雾病患者、动脉粥样硬化患者、健康人血清中HGF、b-FGF、VEGF比较（ng/mL，±s）

表2 烟雾病患者、动脉粥样硬化患者、健康人血清中HGF、b-FGF、VEGF比较（ng/mL，±s）

疾病 例数 HGF b-FGF VEGF烟雾病烟雾病早期烟雾病中期烟雾病晚期动脉粥样硬化健康人41 8 17 16 40 20 4.65±0.86 4.75±0.98 4.52±0.81 4.74±0.91 4.08±0.43 4.02±0.33 0.22±0.10 0.16±0.03 0.18±0.09 0.30±0.11 0.19±0.03 0.17±0.05 0.51±0.05 0.76±0.14 0.47±0.04 0.42±0.04 0.49±0.38 0.46±0.07

3 讨论

根据国内外相关研究报道［6-9］，HGF、b-FGF、VEGF均在烟雾病患者病变处的颈内动脉颅内段及其分支血管中层和增厚的内膜中广泛表达，另外在患者脑脊液中检测含量明显增高，而正常对照组则未发现，表明这些相关病变组织中含有上述细胞因子，提示与烟雾病的发生发展有关。

烟雾病的病变血管不同于动脉粥样硬化病变，其以内膜增厚为主要表现，从而造成了血管管腔变细、狭窄，直至闭塞，同时周围逐渐出现新生毛细血管网，上述病理过程均与血管内皮细胞增生有相关性［12］。随着病程的进展，新生毛细血管会逐渐衰减，而次级侧支循环则起主要代偿供血作用，根据这些影像学变化可行Suzuki分期，8例早期，17例中期，16例晚期，分别代表了不同的次级和三级侧支循环变化阶段。

HGF是一种很强的促血管再生因子［13-14］，它不仅促进血管的生成，而且可调节内皮细胞的生长、运动。本实验揭示血清中HGF浓度在烟雾病各个阶段均有明显的升高，既使烟雾病后期毛细血管网减少时，HGF浓度仍未下降，提示其从始至终一直参与新生毛细血管网及次级侧支循环的形成，可能是一种主要的促侧支循环开放的细胞因子。

b-FGF在体内分布很广，可诱导内皮细胞的迁移和增殖，并促进内皮细胞的黏附和形成血管腔［15］，临床试验也进一步证明其具有强大的血管再生作用［16］。本研究发现烟雾病晚期患者血清中b-FGF含量明显增加，此时烟雾病变的血管闭塞达到最高峰，而新生毛细血管网已处于衰减期，但第二级侧支循环逐渐出现并起主要作用，故推测其在烟雾病侧支循环变化的后期病变中发挥了重要作用。

VEGF是一种血管生长因子，主要作用不但可刺激血管内皮细胞增生，调节细胞的生长，而且还可促进血管形成［17-19］，临床试验显示通过特异性VEGF纳米抗体能抑制血管的生长，反证其具有促进血管再生作用［20］。本研究提示烟雾病早期组血清中VEGF含量明显增加，此时烟雾病患者病变血管尚处于病变早期，新生毛细血管处于增生期，推测其在烟雾病的侧支循环早期的变化发挥了重要作用。

综上所述，根据影像学分期和上述结果，HGF、b-FGF、VEGF均与烟雾病的侧支循环变化发展有关，但HGF可能参与了烟雾病新生毛细血管网和次级侧支循环建立的整个病变过程，烟雾病晚期次级侧支循环增加时FGF可能起了作用，而烟雾病早期毛细血管网增殖过程中VEGF可能发挥了作用。由于本研究采用了血清学检测，而非患者直接病变组织，另外所选择样本量少，有可能造成实验的偏倚，今后将在需要进一步扩大样本量进行研究。

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Changes of HGF，FGF and VEGF in different pathological stages of adult moyamoya disease

WU Lingfeng1CAO Wenfeng1QU Xinhui1REN Yue2ZHANG Kunnan1WU Xiaomu1,2
1.Department of Neurology，People's Hospital of Jiangxi Province，Jiangxi Province，Nanchang 330006，China；2.Institute of Neurology of Jiangxi Province，Jiangxi Province，Nanchang 330006，China

［Abtract］Objective To investigate the changes of hepatocyte growth factor（HGF），basic fibroblast growth factor（b-FGF）and blood vessels origin of growth factor（VEGF）in the different pathological stages of adult moyamoya disease （MMD）.Methods The clinical data of 41 patients with MMD were retrospectively analyzed from November 2013 to December 2014 in the People's Hospital of Jiangxi Province，all patients received examinations of Digital Subtraction Angiography，according to Suzuki diagnostic criteria，8 patients were early stage（Suzuki 1-2 stage），17 cases were middle stage（Suzuki 3-4 stage），16 cases were late stage（Suzuki 5-6 stage）.At same time，40 patients with cerebral atherosclerosis were selected as positive control，and 20 normal people were selected as normal control.HGF，b-FGF and VEGF concentration in serum measured by using enzyme-linked immunosorbent（ELISA）.Results HGF in the early，middle and late stage of MMD patients were compared to atherosclerosis patients and healthy persons，the differences were statistically significant （P＜0.05）.b-FGF in the late stage of MMD were compared with atherosclerosis patients and healthy persons，the differences were statistically significant（P＜0.05）.VEGF in the early stage of MMD were compared with atherosclerosis patients and healthy persons，the differences were statistically significant（P＜0.05）.Conclusion HGF，b-FGF and VEGF are involved in the development process of MMD，HGF may play a role in the whole development process in MMD，b-FGF may play a role at the late MMD developing，and VEGF may play a role in early development in MMD.

Moyamoya disease；Hepatocyte growth factor；Basic fibroblast growth factor；Blood vessels origin of growth factor

R743.3

A

1673-7210（2016）06（a）-0046-04

2016-03-01本文编辑：苏 畅）

江西省卫生厅科技计划（20141016）。

吴凌峰（1972-），男，博士，主任医师；研究方向：脑血管病基础与临床研究。

吴晓牧（1958-），男，博士，主任医师，教授，博士研究生导师；研究方向：脑血管病和神经免疫。