地黄与白芍合煎及单煎对有效成分梓醇溶出量的影响

陈丽萍，李茂星，周珺兰州军区兰州总医院药材科，全军高原环境损伤防治重点实验室，甘肃 兰州 730050

地黄与白芍合煎及单煎对有效成分梓醇溶出量的影响

陈丽萍，李茂星，周珺
兰州军区兰州总医院药材科，全军高原环境损伤防治重点实验室，甘肃 兰州 730050

目的 比较地黄单煎及其与白芍合煎液中有效成分梓醇含量的变化，初步探索2味中药配伍的变化规律。方法 采用高效液相色谱法，选用Waters symmetry C18色谱柱（4.6 mm×150 mm， 5 µm），流动相为乙腈-0.01%磷酸水等度洗脱系统，流速1.0 mL/min，检测波长210 nm，柱温25 ℃。结果 梓醇的回归方程为Y=270 054X-57 724，r=0.999 6，在 0.225～7.2 µg范围内线性关系良好，平均加样回收率为 101.15%，RSD=0.39%。地黄-白芍合煎液中梓醇含量比地黄单煎液平均升高18.66%。结论 地黄-白芍合煎液中梓醇含量比单煎液高，合煎更有助于有效成分的溶出，二者配伍具有一定的合理性。

地黄；白芍；梓醇；单煎；合煎；高效液相色谱法

DOl：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.09.023

地黄为玄参科植物地黄 Rehmannia glutinosa Libosch.的新鲜或干燥块根，《神农本草经》列为上品。地黄的化学成分主要有环烯醚萜苷类、糖类、倍半萜类和苯乙醇苷等［1］。梓醇是地黄中含量最高的环烯醚苷类成分［2］，为极性结构，易溶于水，对老年痴呆、帕金森病、脑缺血、糖尿病及其并发症有一定预防和治疗作用［3-4］。白芍为毛茛科植物芍药 Paeonia lactiflora Pall.的干燥根，主要含有芍药苷等有效成分，用于治疗阴虚发热、月经不调等。中药配伍应用是中医药理论的精髓之一。深入研究药对配伍后主要活性成分的变化，有助于复方药效基础的剖析与理解。地黄、白芍为常用凉血滋阴药对，属相使为用。早在《仙授理伤续断秘方》中即有将该药对用于四物汤的记载。统计表明，与地黄配伍的1034首方剂，在配伍的前30位高频药中，白芍居第3位［5］。

近年来，配方颗粒以免于煎煮、使用方便的优点，越来越受到医药界及患者的推崇。但是否所有的中药复方均可以配方颗粒来替代传统汤剂，则成为学术界争论的焦点。中药汤剂在煎煮过程中，药味成分相互影响，可能会存在化学成分之间的化合、络合、共溶等相互作用和动态转化过程，引起药效成分、毒性、功效等一系列的变化，尤其是有效成分的提取率变化各异［6-8］。配方颗粒是以单味饮片为原料，经过提取、浓缩等现代技术制成，其先煎后混的调配方法、有效成分、组分溶出度等均与饮片单煎基本一致［9］。目前，对于常用药对单煎、合煎后药效成分的差异性研究越来越多，但尚未见有关地黄-白芍的研究报道。因此，本研究测定地黄单煎及其与白芍合煎液中的有效成分梓醇的含量，探讨不同调配方法对药物组分溶出量的影响，旨在为中药配伍和组方原理的研究提供依据，为配方颗粒的合理使用提供参考。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪，Waters 996紫外检测器，Waters 600泵；Mettler AE 240电子分析天平（瑞典），Thermo Sorvall Legend Micro 17型电动离心机，KQ-100A超声波清洗机（上海科导超声仪器有限公司）。

梓醇对照品（纯度＞98%，中国食品药品检定研究院，批号0302-201504）；生地黄饮片（产地河南，批号20150501）、白芍饮片（产地杭州，批号20150306）均由兰州军区兰州总医院中药房提供，经兰州军区兰州总医院药材科李茂星博士鉴定，为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的干燥块根和毛茛科植物芍药Paeonia lactiflora Pall.的干燥根。乙腈（色谱纯，SK Chemicals Korea），磷酸（分析纯，天津科密欧化学试剂公司），灭菌注射用水（四川科伦药业股份有限公司），自制超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件

Waters Symmetry C18柱（150 mm×4.6 mm，5 µm），检测波长210 nm，流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（1∶99），流速1.0 mL/min，柱温25 ℃，进样量10 µL。理论塔板数按梓醇计不低于5000。在此条件下记录色谱图，见图1。

图1　地黄单煎液及其与白芍合煎液中梓醇HPLC图

2.2对照品溶液的制备

精密称取梓醇对照品0.004 5 g，置于10 mL容量瓶中，用灭菌注射用水溶解，并定容至刻度，配制成0.45 mg/mL对照品溶液，0.45 µm微孔滤膜过滤，置于冰箱4 ℃保存备用。

2.3供试品溶液的制备

称取低温烘干至恒重的生地黄饮片10 g，粉碎至粒径为40目。水煎煮2次，第1次用10倍量水浸泡30 min后煎煮2 h，第2次用8倍量水煎煮1 h，合并2次煎煮液，并定容至250 mL容量瓶中，即得地黄单煎液，置于冰箱4 ℃保存备用。

称取低温烘干至恒重的生地黄饮片、白芍饮片各10 g，粉碎至粒径为40目。按上述方法煎煮，并定容至500 mL容量瓶中，即得地黄白芍合煎液，置于冰箱4 ℃保存备用。

分别吸取一定量各煎液于离心管中，8000 r/min离心5 min，吸取上清液，0.45 µm微孔滤膜过滤，进样测定。分别按各煎液定容体积折算为等量药材同体积煎液的梓醇含量。

2.4线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液0.5、1、2、4、8、16 µL，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录色谱图，以对照品进样量（µg）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=270 054X-57 724，r=0.999 6，表明对照品在0.225～7.2 µg范围内呈良好线性关系。

2.5精密度试验

取地黄白芍合煎液，连续进样6次，每次10 µL，测定梓醇峰面积积分值，RSD=1.26%，表明仪器精密度良好。

2.6重复性试验

取等量地黄、白芍饮片各6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，进样10 µL检测分析，结果单煎液、合煎液中梓醇含量RSD分别为1.15%、1.03%，表明本法重复性良好。

2.7稳定性试验

取同一供试品溶液，分别放置0、4、6、8、12、24 h后进样测定，结果单煎液、合煎液中梓醇含量RSD分别为1.05%、1.21%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8加样回收率试验

取已知梓醇含量的地黄白芍合煎液6份，精密加入梓醇对照品溶液适量，在上述色谱条件下测定并计算回收率，结果平均加样回收率为101.15%，RSD= 0.39%，见表1。

表1　梓醇加样回收率试验

2.9样品含量测定

分别取生地黄、白芍饮片，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定。每个样品连续进样3次，测定单煎液、合煎液中梓醇溶出量（见表 2）。计算溶出量变化率［（合煎液中溶出量-单煎液中溶出量）÷单煎液中溶出量×100%］。结果显示，梓醇在地黄单煎液中含量低于其在合煎液中的含量，溶出量变化率为18.64%，表明2味药合煎有利于其有效成分梓醇的溶出。

表2　地黄单煎液及其与白芍合煎液中梓醇溶出量测定结果（n=3）

3 讨论

药对研究已成为中药研究的热点之一，现代研究逐步从药效成分的溶出增加、毒物吸附及共沉淀等多角度解释药对的作用机理。本研究显示，与单煎液相比，合煎液中梓醇溶出量明显提高，提示在合煎过程中可能存在助溶作用。梓醇属环烯醚萜苷类，白芍主要有效成分芍药苷为双环单萜苷，两者均属于单萜苷类成分。地黄白芍配伍后梓醇溶出量显著增加，说明地黄-白芍药对化学层面配伍的协同增效作用。

本研究发现，在其他条件相同的情况下，中药化学成分的溶出度与调配方法存在一定相关性。因此，中药配方颗粒不能完全替代传统中药汤剂。若能将一些常用经典药对制成免煎颗粒，在临床应用中将更具有实际操作的可行性。

中药汤剂通常用水来煎煮，本研究供试品溶液亦选择水煎液。但在实际操作中发现2个问题：其一，水煎液含杂质较多；其二，除芍药苷外，白芍还含有糖、淀粉、黏液质等多种成分，与地黄合煎后的滤液质地较为黏稠，直接过滤比较困难。因此，试验中将水煎液用8000 r/min高速离心5 min，取其上清液，再以微孔滤膜过滤后进样，梓醇与其他组分可得到有效分离，峰形良好且稳定。

［1］杨彦飞.地黄活性物质与功能研究［D］.北京：北京协和医学院，2013.

［2］吉雪琪，孙鹏，祁建军，等.地黄生长期根叶中梓醇及总环烯醚萜苷含量变化［J］.中国中药杂志，2014，39（3）：466-470.

［3］XU G， XIONG Z， YONG Y， et al. Catalpol attenuates MPTP induced neuronal degeneration of nigral-striatal dopaminergic pathway in mice through elevating glial cell derived neurotrophic factor in striatum［J］. Neuroscience，2010，167（1）：174-184.

［4］董炤，陈长勋.梓醇药理作用的研究进展［J］.中成药，2013，35（5）：1047-1051.

［5］李卫民，李卫红.方剂中生地黄配伍规律的研究［J］.中华中医药杂志，2011，26（3）：483-485.

［6］SHI W Z， XUN D S， LIU L. Fingerprint comparison of the different extraction of Bushen Recipe made by decocting together and single［J］. Chin Tradit Pat Med，2004，26（1）：7-9.

［7］王彬，韩刚，张学俊，等.大黄甘草汤单煎液与合煎液中蒽醌类化合物和甘草酸煎出量的变化［J］.中成药，2010，32（10）：1794-1796.

［8］刘立，段金廒，朱振华，等.当归-红花药物组合效应物质基础研究［J］.中草药，2011，42（5）：929-934.

［9］魏飞，石维，魏睦新.黄芩柴胡分煎合煎色谱组分的对比研究［J］.中华中医药学刊，2008，26（11）：2427-2429.

Effects of Decocting Rehmanniae Radix and Paeoniae Radix Alba Single and Mixed on Dissolving-out Quantity of Catalpol

CHEN Li-ping， LI Mao-xing， ZHOU Jun （Department of Pharmacy，Lanzhou General Hospital of PLA； Key Laboratory of Prevention and Cure for Plateau Environment Damage， PLA，Lanzhou 730050， China）

Objective To compare the content variation of catalpol between single and mixed decocting Rehmanniae Radix and Paeoniae Radix alba； To preliminarily explore the variation rules of compatibility of Rehmanniae Radix and Paeoniae Radix alba. Methods HPLC method was used with Waters Symmetry C18column （4.6 mm×150 mm， 5 µm）， flow rate of 1.0 mL/min， detection wavelength of 210 nm， column temperature at 25 ℃. The mobile phase was acetonitrile-0.01% phosphoric acid in water isocratic elution system. Results Catalpol regression equation was Y=270 054X-57 724， r=0.999 6， showing good linear range among 0.225-7.2 µg. The average recovery rate was 101.15%， RSD=0.39%. The average content of catalpol in the mixed decoction of Rehmanniae Radix and Paeoniae Radix alba was 18.66% more than the single decoction of Rehmanniae Radix. Conclusion The content of catalpol in mixed decoction is higher than the single decoction of Rehmanniae Radix and Paeoniae Radix alba. The mixed decoction is favorable for the dissolving of catalpol from the medicine. The compatibility of Rehmanniae Radix and Paeoniae Radix alba is rational.

Rehmanniae Radix； Paeoniae Radix alba； catalpol； single decoction； mixed decoction； HPLC

R284.1

A

1005-5304（2016）09-0096-03

国家自然科学基金（30672643、30472186、30772773）；甘肃省自然科学基金（3ZS051-A25-078）

李茂星，E-mail：Limaox2005@aliyun.com

2015-12-09；编辑：陈静）