人结肠癌组织中NIBP、CyclinE和CyclinD1蛋白表达变化及意义

陈楚杰，黄杰安，徐春燕（广西医科大学第一附属医院，南宁530007）

人结肠癌组织中NIBP、CyclinE和CyclinD1蛋白表达变化及意义

陈楚杰，黄杰安，徐春燕
（广西医科大学第一附属医院，南宁530007）

目的 观察结肠癌患者癌组织中NIK-IKK结合蛋白（NIBP）、周期蛋白E（CyclinE）和周期蛋白D1（CyclinD1）表达变化，并探讨其临床意义。方法 收集经外科手术切除及消化内科肠镜活检的部分标本130例份，其中正常结肠黏膜、结肠癌各65例份，患者均未接受放化疗。采用免疫组织化学SP法检测结肠癌组织及正常结肠黏膜组织中NIBP、CyclinE和CyclinD1表达，并分析三者阳性细胞表达与结肠癌患者临床病理特征的关系；采用Pearson或Spearman相关检验分析NIBP、CyclinE和CyclinD1表达的相关性。结果 正常结肠黏膜组织与结肠癌组织中NIBP阳性表达率分别为18.46%（12/65）、60.00%（39/65），CyclinD1阳性表达率分别为3.08%（2/65）、56.92%（37/65），CyclinE阳性表达率分别为43.08%（28/65）、89.23%（58/65），两种组织中NIBP、CyclinD1及CyclinE阳性表达率比较差异有统计学意义（P均＜0.05）。NIBP、CyclinE和CyclinD1表达与结肠癌患者肿瘤浸润深度、TNM临床分期、淋巴结转移和远处转移有关（P均＜0.05）。结肠癌组织中NIBP与CyclinE、CyclinD1表达呈正相关（rs分别为0.43、0.32，P均＜0.05），CyclinE、CyclinD1表达呈正相关（rs=0.23，P＜0.05）。结论 NIBP、CyclinE及CyclinD1在人结肠癌组织中呈高表达，三者可能参与了结肠癌的发生发展。

结肠癌；NIK-IKK结合蛋白；周期蛋白E；周期蛋白D1

2011年统计数据显示，我国女性结肠癌发病率居第3位、男性居第5位，而结肠癌患者病死人数高居所有肿瘤第5位［1］。结肠癌的发生是黏膜上皮受到遗传和环境等多种因素导致多基因改变及相互作用的结果，本质在于细胞周期调节失控，呈现无限制性的自主分裂与增殖，但其发生发展的确切机制至今尚不明确。细胞周期蛋白（Cyclins）是一个与细胞周期相关的核蛋白家族，其中细胞周期蛋白E （CyclinE）属G1期的正调节因子，其通过促进G1向S期的转变，调节组织细胞增殖的作用，研究［2］证实其在肿瘤组织中常表达增强；CyclinD1是细胞周期成分G1期中衡量表达的癌基因，如过量表达可导致G1期缩短、细胞分裂加快，与肿瘤的发生发展密切相关［3］。NIK-IKK结合蛋白（NIBP）是一种支架蛋白，其能将NF-κB经典途径中的关键激活子-IKKp和非经典途径中的关键酶-NIK连接成为三聚体，NIBP在NF-κB经典途径中发挥激活剂的作用［4］，而NIKK/IKK/NF-κB可调控CyclinD1、D2、D3和E1的表达，但在结肠癌中NIBP是否通过Cyclin参与调控人结肠癌发生发展仍不明了。2015年2～12月，我们采用免疫组化SP方法检测了NIBP、CyclinE 及CyclinD1在人结肠癌组织与正常肠黏膜中的表达，并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集广西医科大学第一附属医院2015年2～12月未接受放、化疗、经外科手术切除及消化内科肠镜活检的部分标本130例份，其中距离癌旁10 cm的正常结肠黏膜、结肠癌组织各65例份，患者年龄15～84（55.44±13.32）岁，标本均经病理学确诊。其中肿瘤浸润深度黏膜或肌层23例，深肌层以下42例；TNM分期Ⅰ期9例，Ⅱ期17例，Ⅲ期18例，Ⅳ期21例；淋巴结转移27例；远处转移22例。

1.2 结肠癌组织及正常结肠黏膜组织中NIBP、CyclinE和CyclinD1表达检测 采用免疫组化染色法。标本均经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，连续4 μm切片。按SP法染色，具体步骤参考说明书进行抗原修复，分别用NIBP多克隆抗体、CyclinE和CyclinD1单抗作为一抗4℃过夜，二抗和辣根过氧化物酶孵育后，DAB显色、苏木素染核，封片。阳性对照由试剂公司提供，用PBS代替一抗作为阴性对照。用O-lympus显微镜及显微摄像仪对染色组织切片进行观察。每张切片分别取上、下、左、右及中央共5个区域进行细胞计数，每个区计数100个细胞，共计数500个细胞，对照阳性切片，计算染色阳性细胞（胞膜/胞质/胞核中出现明显的黄色或黄褐色颗粒视为免疫组化染色阳性）所占比例，综合染色强度及阳性细胞数量进行半定量分析。

1.3 统计学方法 采用SPSS17.0统计软件。计数资料采用χ2检验或Fisher确切概率法，相关分析采用Pearson或Spearman相关检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 免疫组化染色结果 NIBP主要表达于细胞质和细胞膜，CyclinE和CyclinD1主要表达于细胞核，见图1。

图1 NIBP、CyclinE及CyclinD1在结肠癌组织及正常结肠黏膜组织中的表达

2.2 结肠癌组织及正常结肠黏膜组织中NIBP、CyclinE和CyclinD1阳性表达率比较 正常结肠黏膜组织与结肠癌组织中的NIBP阳性细胞表达率分别为18.46%（12/65）、60.00%（39/65），CyclinD1阳性细胞表达率分别为3.08%（2/65）、56.92%（37/ 65），CyclinE阳性细胞表达率分别为43.08%（28/ 65）、89.23%（58/65），两种组织中NIBP、CyclinD1 及CyclinE阳性细胞表达率比较差异有统计学意义（P均＜0.05）。

2.3 NIBP、CyclinE和CyclinD1表达与结肠癌患者临床病理特征的关系 NIBP、CyclinE及CyclinD1阳性表达与结肠癌患者肿瘤浸润深度、TNM临床分期、淋巴结转移和远处转移有关（P均＜0.05）。见表1。

表1 NIBP、CyclinE及CyclinD1表达与结肠癌患者临床病理特征的关系（例）

2.4 NIBP、CyclinE和CyclinD1在结肠癌组织中表达的相关性 结肠癌组织中NIBP与CyclinE、CyclinD1表达呈正相关（rs分别为0.43、0.32，P均＜0.05），CyclinE、CyclinD1表达呈正相关（rs=0.23，P ＜0.05）。

3 讨论

结肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，主要好发于直肠与结肠交界处。近年来数据提示，结肠癌在我国的发病率逐年增加。在肿瘤的恶性增殖中，常伴随原癌基因的激活，肿瘤细胞内大量周期蛋白的调控失衡［5］。目前已发现Cyclin家族成员A～J10大类，15种亚型。其中CyclinE是参与细胞周期G1/S转换的重要正性调节因子。柴大敏等［6］研究发现，喉鳞状细胞癌侵袭转移的标本中，CyclinE基因表现为强阳性。姚坦等［7］研究胆囊癌患者发现，癌组织中CyclinE阳性表达导致细胞周期的调控异常可能是疾病发生发展的重要特征。而Hanashiro等［8］认为CyclinE对中心体复制起始激酶复合物发挥关键调控作用，过度表达则干扰有丝分裂，形成不稳定的染色体，这是诱发肿瘤形成的可能机制之一。Cyclin家族中，CyclinD1是G1期细胞增殖信号的关键蛋白，常被视为一种原癌基因。在正常组织中CyclinD1呈恒定表达，在膀胱癌、肺癌、卵巢癌及胆道肿瘤中均呈高表达［9～12］，同时在胆囊癌中CyclinE表达与CyclinD1呈正相关，提示二者可能有一定协同作用［13］。

NIBP是一种支架蛋白，其能将NF-κB经典途径中的关键激活子-IKKp和非经典途径中的关键酶-NIK连接成为三聚体。研究发现，NIK/IKK/NF-κB信号通路在肿瘤发生发展中发挥重要作用，其中重要特征之一就是调控细胞周期蛋白的表达［14］。在本研究中同样证实，人结肠癌组织中NIBP、 CyclinE及CyclinD1表达明显高于正常结肠黏膜组织，同时NIBP、CyclinE及CyclinD1阳性表达与肿瘤浸润深度、TNM临床分期、淋巴结转移和远处转移有关。NIBP、CyclinE及CyclinD1阳性表达越强，癌组织浸润深度越深、TNM分期越高、淋巴结转移和远处转移越多，提示NIBP、CyclinE及CyclinD1参与了人结肠癌的侵袭转移。研究还发现NIBP、CyclinE 及CyclinD1阳性表达三者之间互为正相关。CyclinD1和CyclinE正相关提示CyclinE亦可能是肿瘤发生的早期事件，而NIBP与CyclinE、CyclinD1呈正相关，可能提示NIBP通过NF-κB通路干预了细胞周期，调控CyclinE及CyclinD1表达而参与结肠癌的侵袭转移与发生发展。

总之，NIBP、CyclinE及CyclinD1在结肠癌组织中高表达提示其参与了结肠癌的发生发展及侵袭转移过程，NIBP可能通过NF-κB通路调控CyclinE及CyclinD1介导结肠癌的发生发展和侵袭转移。NIBP、CyclinE及CyclinD1未来可能作为结肠癌预后参考指标及肿瘤的抑制靶点。

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Expression and clinical significance of NIBP，CyclinE and CyclinD1 proteins in human colon carcinoma

CHEN Chujie，HUANG Jiean，XU Chunyan
（The First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University，Nanning 530007，China）

Objective To observe the expression of NIK-IKK binding protein（NIBP），CyclinE and CyclinD1 in the tissues of patients with colon cancer，and to explore its clinical significance.Methods We collected 130 cases of samples from surgical resection and enteroscope biopsy of digestive internal medicine，65 cases of normal colon mucosa and 65 cases of cancer tissues in each group，all patients did not receive radiotherapy and chemotherapy.The expression of NIBP，CyclinE and CyclinD1 was detected by immunohistochemistry SP method，and then we analyzed the relationship between the positive expression of proteins and the clinicopathologic features in patients with colon cancer.The correlations between expression of NIBP，CyclinE and CyclinD1 were determined by Pearson or Spearman tests.Results The positive expression rates of NIBP in the normal colonic mucosa and colon cancer tissues were 18.46%（12/65）and 60.00%（39/65），respectively；the positive expression rates of CyclinD1 were 3.08%（2/65）and 56.92%（37/65），respectively；and the positive expression rates of CyclinE were 43.08%（28/65）and 89.23%（58/65），respectively.Significant differences were found in the positive expression rates of NIBP，CyclinE and CyclinD1 between these two groups（all P＜0.05）.The expression of NIBP，CyclinE and CyclinD1 was significantly related with the depth of tumor invasion，TNM staging，lymph node metastasis and distant metastasis in patients with colon cancer（all P＜0.05）.In the colon cancer tissues，the expression of NIBP was positively correlated with CyclinE and CyclinD1 expression（r=0.43，0.32，all P＜0.05），and the expression of CyclinD1 and CyclinE was positively correlated（r=0.23，P＜0.05）.Conclusion NIBP，CyclinE and CyclinD1 is highly expressed in the human colon cancer tissues，and they may participate in the occurrence and developmentof colon cancer tissues.

colon carcinoma；NIK-IKK binding protein；CyclinE；CyclinD1

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.25.004

R735.35

A

1002-266X（2016）25-0013-04

广西自然科学基金资助项目（2013GXNSFAA019159）。

陈楚杰（1989-），在读硕士，主要研究方向为消化道肿瘤的基础与临床。E-mail：397538840@qq.com

简介：黄杰安（1965-），教授，主要研究方向为消化道肿瘤的基础与临床。E-mail：1404991727@qq.com

2016-03-21）