气相色谱法测定乙酰氨基阿维菌素中的残留溶剂（乙醇、乙腈、丙酮）

古丽曼·木哈买提拜（新疆兽药饲料监察所，新疆　乌鲁木齐　830063）

气相色谱法测定乙酰氨基阿维菌素中的残留溶剂（乙醇、乙腈、丙酮）

古丽曼·木哈买提拜
（新疆兽药饲料监察所，新疆乌鲁木齐830063）

为了建立一种气相色谱法同时测定乙酰氨基阿维菌素中的乙醇、乙腈和丙酮有机溶剂残留量的方法，试验采用外标法直接进样，在石英毛细管柱上进行各组分分离，色谱柱为Agilent 19095P-Q04 HP-PLOT，载气为氮气，检测器为氢火焰离子化检测器，以程序升温的方式直接进样，使乙醇、乙腈和丙酮完全分离的方法，结果表明该方法中各溶剂的线性关系、精密度、准确度、灵敏度均达到《中国兽药典》2010年版中残留溶剂限量规定的检测要求。说明该方法简单快速、准确，可用于药物质量控制中的有机残留溶剂检测。

气相色谱法；残留溶剂；检测

10.16863/j.cnki.1003-6377.2016.04.007

乙酰氨基阿维菌素是一种疗效高、广谱、残留量低的新一代驱虫兽用药物，主要用于预防治疗畜类的寄生虫、虱、螨、蝇等各种内外寄生虫，用于奶牛和肉牛时不需要休药期。由于此药对家畜的体内外各种寄生虫的活性很高，在乳制品中很低的分配系数，使此药成为第一个用于各种家畜在任何生长期中的杀虫剂，是防治家畜体内外各种寄生虫的首选药物。本产品是由发酵而得的阿维菌素B1，半合成品。此药物在合成过程中要用到乙醇、乙腈、丙酮等多种溶剂，此文采用气相色谱法测定乙酰氨基阿维菌素中的乙醇、乙腈、丙酮残留溶剂，此方法快速、灵敏、准确，重现性好，可以用于有机溶剂残留的定性定量分析。

1　材料与方法

1.1气相色谱仪：Agilent 6890N，配制氢火焰（FID）检测器，安捷伦公司；电子天平：XS105型，梅特勒-托利多公司。

1.2对照品

乙醇为优级纯，含量为99.95%；乙腈、丙酮均为色谱纯。

1.3试剂

二甲基甲酰胺为分析纯。

1.4供试品

乙酰氨基阿维菌素原料（浙江海正药业股份有限公司提供）。

1.5色谱条件与专属性试验

色谱柱：Agilent 19095P-Q04 HP-PLOT 270℃30 m×530 μm×40 μm，进样口温度：150℃；检测器温度：200℃，柱温:程序升温，初始温度50℃，以每分钟2℃的速率升温至80℃，再以每分钟5℃的速率升温至220℃，流速为1.0 mL/min。

精密称取乙醇、乙腈与丙酮对照品，加二甲基甲酰胺分别定量稀释制成每1 mL中分别含乙醇5 mg、乙腈0.41 mg、丙酮5 mg的溶液；另取二甲基甲酰胺试液作为空白溶液，精密吸取2 μl注入气液相色谱仪，空白溶液的色谱中在与各对照品色谱峰相未出现相同的峰，不影响乙醇、乙腈与丙酮峰的测定。

1.6对照品溶液

精密称取乙醇、乙腈与丙酮对照品，加二甲基甲酰胺分别定量稀释制成每1 mL中分别含乙醇5 mg、乙腈0.41 mg、丙酮5 mg的溶液，作为对照品溶液。

1.7供试品溶液

精确称取乙酰氨基阿维菌素原料（浙江海正药业股份有限公司提供）1.0 g，放于10 mL的容量瓶中，再加二甲基甲酰胺溶液适量溶解，然后定容至刻度，即为供试品溶液。

1.8测定

精密量取对照品溶液与供试品溶液各2.0 μl，注入气相色谱仪，并且记录色谱图，见图1～5。

图1　　乙醇对照品溶液色谱图

图2　　乙腈对照品溶液色谱图

图3　丙酮对照品溶液色谱图

图4　　乙腈、乙醇、丙酮对照品混合溶液色谱图

图5　　供试品溶液色谱图

2结果

2.1线性关系

精密称取乙醇、乙腈与丙酮对照品，加二甲基甲酰胺分别定量稀释制成每1 mL中分别含乙腈0.480 mg、0.123 mg、24.6 μg、4.92 μg（0.984 μg/mL浓度,面积未检出），乙醇与丙酮6 mg、1.5 mg、0.3 mg、60 μg、12 μg的三组溶液，精密吸取2 μl注入气液相色谱仪，按残留溶剂项下的色谱条件测试，记录色谱图，乙腈峰面积164.8、39.8、9.3、2.8，乙醇峰面积2002.9、478.7、88.6、18.9、4.0，丙酮峰面积2071.4、481.4、96.7、24.1、8.2，以对照品溶液浓度与相应的峰面积计算线性回归方程，结果表明：乙腈在4.92 μg/mL～0.480 mg/mL的范围内，乙醇与丙酮在12 μg/mL～6 mg/mL的范围内，峰面积与进样量浓度呈良好的线性关系。回归方程：乙腈y=341.97x+0.0989、r=0.9998,乙醇y=334.51x-8.0373、r=0.9999,丙酮y=345.23x-7.1754、r=0.9998。

2.2精密度试验

精密称取乙醇、乙腈与丙酮对照品，加二甲基甲酰胺分别定量稀释制成每1 mL中分别含乙醇5 mg、乙腈0.41 mg、丙酮5 mg的溶液，精密量取2.0 μl注入气液相色谱仪，照残留溶剂项下的色谱条件检测，连续进6针，记录色谱图，并测定峰面积。乙腈的相对标准偏差RSD为1.77%、乙醇相对标准偏差RSD为2.17%、丙酮相对标准偏差RSD为2.12%，表明本法的精密度良好（见表1）。

表1　精密度试验检测结果表

2.3重复性试验

取浙江海正药业股份有限公司的原料样品批次131 007适量（由于样品中三种检测的残留物均未检出，故作限值的浓度添加），并精密称取乙醇、乙腈与丙酮对照品，加二甲基甲酰胺分别定量稀释制成每1 mL中分别含乙醇5 mg+样品1.0 g、乙腈0.41 mg+样品1.0 g、丙酮5 mg+样品1.0 g的溶液，三组溶液分别制备6份，各测定一次，精密吸取2 μl注入气液相色谱仪，按残留溶剂项下的色谱条件测试，测定含量。乙腈相对标准偏差RSD为0.77%、乙醇相对标准偏差RSD为0.52%、丙酮相对标准偏差RSD为0.58%，表明本法的重复性良好（见表2）。

表2　重复性试验检测结果表

2.4加标回收试验

取浙江海正药业股份有限公司的原料样品批次131 007适量 (由于样品中三种检测的残留物均未检出，故设限值为100%浓度添加量)，并精密称取乙醇、乙腈与丙酮对照品，加二甲基甲酰胺分别定量稀释制成每1 mL中分别含乙醇4 mg+乙腈0.328 mg+丙酮4 mg+样品1.0 g的混合溶液、乙醇5 mg+乙腈0.41mg+丙酮5 mg+样品1.0 g的混合溶液、乙醇6 mg+乙腈0.492 mg+丙酮6 mg+样品1.0 g的混合溶液，三组溶液分别各制备3份进行测定，精密吸取2 μl注入气液相色谱仪，按残留溶剂项下的色谱条件测试，测定含量。试验如下（见表3～5）。

表3　乙腈回收率试验检测结果表

表4　　乙醇回收率试验检测结果表

表5　　丙酮回收率试验检测结果表

2.5稳定性试验

精密称取乙醇、乙腈与丙酮对照品，加二甲基甲酰胺分别定量稀释制成每1 mL中分别含乙醇5 mg、乙腈0.41 mg、丙酮5 mg的溶液，精密吸取2 μl注入气液相色谱仪，按残留溶剂项下的色谱条件测试，分别在0、6、10、13、16、19 h进样，测定峰面积，考察样品稳定性。结果显示，乙腈在19 h内稳定、乙醇在19 h内稳定、丙酮在19 h内稳定（见表6～8）。

表6　乙腈稳定性试验检测结果表

表7　　乙醇稳定性试验检测结果表

表8　　丙酮稳定性试验检测结果表

2.6检测限及定量限

按信噪比S/N=3时，乙腈的检测限为1 μg/mL、乙醇的检测限为0.2 μg/mL、丙酮的检测限为0.05 mg/mL；按信噪比S/N=10时，乙腈的定量限为0.01 mg/mL、乙醇的定量限为0.02 mg/mL、丙酮的定量限为0.2 mg/mL。

3结论

本文建立了用气相色谱法测定乙酰氨基阿维菌素中的残留溶剂(乙醇、乙腈、丙酮)，将原来的顶空进样改为直接进样，经考察，能准确定量，灵敏度高，可快速、准确的检查乙酰氨基阿维菌素中的残留溶剂(乙醇、乙腈、丙酮)，为更好地控制动物药品质量提供了检测依据。

[1]《中华人民共和国兽药典》2010版（第一部）[M].北京：中国农业出版社，2010.

[2]农业部公告第644、804、942号的乙酰氨基阿维菌素三个质量标准.

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[10]关丽，陈欢，唐辉，等.高效毛细管气相法测定左旋棉酚中的残留溶剂[J].中国医院药学杂志，2010，（15）.

Determination of Residual Solvent Eprinomectin in Gas Chromatography （Ethanol，Acetonitrile and Acetone）

GULIMAN·Muhamaitibai
（Xinjiang Institute of Veterinary and Feed,Urmuqi 830063，China）

To establish a kind of method for detecting residual organic solvents of ethanol acetonitrile acetone in amoxicillin by gas chromatography,the test separates each groups on a quartz capillary column by sampling directly with external standard method,and the chromatographic column is Agilent 19095P-Q04 HP-PLOT, and carrier gas is nitrogen,detector is hydrogen flame ionization.By programmed temperature and ethanol acetonitrile,acetone is completely separated,linear relation of each solvent in this method,precision, accuracy,sensitivity to Chinese Veterinary Pharmacopoeia 2010 Edition residual solvent limit stipulated in the detection requirements.This method is simple,rapid and accurate,and can be used for residual organic solvents in drug quality control.

gas chromatography;residual organic solvents;detection

S816.17

A

1003-6377（2016）04-0036-07

2015版《中国兽药典》科研项目“《中国兽药典》委员会办公室文件（2012）9号文”

古丽曼·木哈买提拜（1969-），女（哈萨克族），大学本科，从事兽药饲料及畜产品安全检测和管理工作。E-mail：1966378660@qq.com

2016-05-20，

2016-05-25