新城疫病毒对鸡内脏病理损伤的研究

王 强　（山东省泰安市岱岳区山口镇畜牧兽医站　271038）霍 伟　（山东省泰安市岱岳区畜牧兽医局）任元刚　（山东省济南市商河县现代农业科技示范园管理委员会）

新城疫病毒对鸡内脏病理损伤的研究

王 强（山东省泰安市岱岳区山口镇畜牧兽医站271038）
霍 伟（山东省泰安市岱岳区畜牧兽医局）
任元刚（山东省济南市商河县现代农业科技示范园管理委员会）

本试验利用病理石蜡切片技术研究新城疫病鸡的免疫器官的组织病理学变化，探讨新城疫病毒对鸡心脏，肝脏和肠的损伤机理。结果发现，光镜下的病理主要表现在肠、胸腺、脾脏、胰脏、盲肠扁桃体等，以消化道的出血性炎症为主，黏膜层淋巴细胞增多，部分上皮细胞坏死、出血。

鸡新城疫心脏肝脏肠光镜观察

新城疫（Newcastle Disease，ND）在1929年发生于印度尼西亚的爪哇［1］，同年发现英国的新城［2］，根据发现地而命名为新城疫。自从1945年我国开始报道新城疫［3］到现在，凡是我国养鸡的地方就有新城疫不同程度的流行，造对养鸡业发展成影响。随着细胞和分子生物技术的发展，组织制片技术也为原位显示细胞内的基因和基因表达提供了基础。做好的标本能保存较长时间，使用方便。组织制片技术在医学教育研究中被广泛应用。本实验利用病理石蜡切片技术研究新城疫病鸡的免疫器官的组织病理学变化，探讨新城疫病毒对鸡心脏，肝脏和肠的损伤机理。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1材料新城疫病鸡。

1.1.2器材切片刀、切片机、恒温箱、电炉、酒精灯、手术刀、解剖剪、解剖盘、镊子、单面刀片、包埋纸盒、染色缸、盖玻片、载玻片、玻片盘、树胶、显微镜、水浴锅。

1.1.3主要试剂2×PBS缓冲液：1%SDS，20mMTris-HCL （pH 7.6），0.2M NaCL，固体石蜡，蒸馏水，无水乙醇，二甲苯，甲醛，氯化钠，氯化钾，磷酸一氢钠，磷酸二氢钾，苏木素、伊红等。

1.1.4主要病理材料心脏，肝脏，肠。

1.2方法

1.2.1取样（1）把病鸡解剖，取心肌，肝脏和肠置于10%中性福尔马林溶液。（2）固定：选用甲醛来作为固定液，取心肌和肝脏合肠固定于10%中性福尔马林溶液，使组织发生硬化。固定时间为24h。（3）冲洗：将在固定过程中残留于组织块中的甲醛充分除去利用流水对组织块进行冲洗，连续冲洗24h。（4）脱水：从30%或50%酒精开始，经70%、85%、95%直至纯酒精（无水乙醇），每次时间为30～90min，以2次95%酒精，2次100%酒精重复进行脱水，以保证组织的水分脱净。（5）透明：经纯酒精和透明剂各半的混合液浸渍1～2h，再转入纯透明剂中浸渍。在透明之前利用乙醇和二甲苯1∶1的混合溶液浸泡组织块30min，共2次，然后再用二甲苯透明5～20min。（6）浸蜡：在60℃恒温箱内进行，将已经透明的组织块置于已经融化的石蜡烧杯中，放在60℃的恒温箱中，2h左右后取出倒入另一只含有融化的石蜡烧杯中2h。浸蜡完毕后便可包埋。（7）包埋：包埋时在恒温箱内进行，倒入包埋盒的蜡在恒温箱内放0.5h后取出自然冷却，可以有效的避免蜡块分层。（8）修块：将已经包埋的组织块修理成合适的大小便于储存和切片。

1.2.2切片用切片机将已经包埋好的石蜡组织块进行切片，切片厚度为5µm。切好的石蜡切片放入水浴锅中（水温为37）℃使其平展，再用载玻片从切片下方将切片置于在玻片上，并于50℃恒温箱中烘干4h。

1.2.3染色和封片用HE染色法进行染色。

表1　试验采取的脱水时间　　　　　　　 （min）

表2　试验采取的透明时间　　　　　　　（min）

2　结果与分析

2.1剖检症状

剪开嘴发现口腔内积有大量灰白色粘液；嗦囊空虚但是囊内有较多量液体或带有酸臭味的液体；消化道里可见到食道与腺胃的交界处有出血点，腺胃与肌胃交界处有出血点、条或斑；腺胃乳头出血，肌胃角质层下面可见到出血或溃疡。肠道的浆面可见多处呈枣核状紫红色出血，剪开肠管在肠黏膜表面见到枣核状出血、坏死；盲肠扁桃体肿大、出血、坏死和溃疡；直肠及泄殖腔、黏膜出血点或条状出血。心冠和腹部脂肪出血。

2.2肠道病理变化

肠内形成大溃疡，肠壁深部的集合淋巴滤泡坏死，最初淋巴细胞肿大，胞浆淡染，与相邻的细胞融合，同时核也增大，色淡，进一步这些细胞细胞轮廓模糊，变为粉红浓染不均匀的块状物，其中散在的核的残屑，以后坏死的淋巴滤泡与周围的坏死组织融为一体，坏死部小动脉和静脉管壁发生纤维素样坏死，血栓形成和血管破裂引起该部的严重出血与血浆浸润，使坏死组织中出现大量的红细胞和血浆凝结物。黏膜上皮变性、坏死、并大量脱落。固有膜中有大量淋巴细胞浸润，以及浆液渗出、充血和出血等病变。

2.3心肌的病理变化

心肌颗粒变性，光镜下细胞肿大，胞浆内出现多量微细颗粒，HE染色成淡红色，胞核无明显的变化，间质内可见渗出性变化，毛细血管充血、出血、个别部位可见心肌纤维出现明显断裂，局部有轻微的小灶状出血等急性病理变化。

2.4肝脏的病理变化

主要表现肝小叶中的肝细胞可见体积肿大，胞浆内密布细小红染的颗粒。视野中肝细胞出现胞核略微肿大，淡染。有的胞浆内出现大小不等的脂肪空泡，较严重时形成一个大空泡，将胞核挤向一侧。新城疫，肝脏的病理变化主要表现为变性，颗粒变性和脂肪变性。

3　结论

新城疫病毒为细胞外播散，主要入侵呼吸道和消化道的上皮细胞，表现出高度的杀细胞作用。病毒感染还能引起炎症反应导致局部组织损伤。本试验光镜下的病理主要表现心、肝、肠等，部分上皮细胞坏死、出血，这些病变主要是由于病毒直接作用和机体抗病毒反应所导致的损伤。心肌颗粒变性，肝脏的病理变化主要表现为变性，颗粒变性和脂肪变性，由于新城疫病毒主要侵害呼吸道和肠道上皮细胞，加之肠相关淋巴组织丰富，因而出现的局部损伤相应也较为严重。肠相关淋巴组织的阳性染色最强，组织损伤最为严重，这与肉眼病变的严重程度相吻合。

［1］林绍仪. 鸡新城疫研究进展［J］. 国外兽医学一畜禽传染病， 1982（2）：41-43.

［2］殷震， 刘景华. 动物病毒学［Ml. 北京： 科技出版社. 1997.

［3］梁英. 鸡新城疫免疫胶体金诊断技术的研究［J］. 畜牧兽医月刊，1945（5）： 10-12.

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1007-1733（2016）08-0013-02

2016-04-25）