云南松松塔提取物对正常小鼠免疫功能的影响

邵维莉，吴道勋，李　杨，2，刘　熙，刘光明，张海珠，2*

（1.大理大学药学与化学学院，云南大理　671000；2.云南省昆虫生物医药研发重点实验室，云南大理　671000）

药学

云南松松塔提取物对正常小鼠免疫功能的影响

邵维莉1，吴道勋1，李杨1，2，刘熙1，刘光明1，张海珠1，2*

（1.大理大学药学与化学学院，云南大理671000；2.云南省昆虫生物医药研发重点实验室，云南大理671000）

目的：研究云南松松塔提取物对正常小鼠免疫功能的影响。方法：昆明种小鼠灌胃给予高、中、低剂量（400、200、100 mg/kg）的松塔提取物，阳性对照药左旋咪唑（25 mg/kg），连续给药10 d后，处死小鼠，测定小鼠血清中免疫球蛋白IgA、IgM、IgG和补体C3、C4的含量，测全外周血细胞数，计算脾脏指数和胸腺指数。结果：云南松松塔提取物能增加外周血中的免疫球蛋白IgA、IgM、补体C4的含量和白细胞数，与正常组相比差异均具有统计学意义（P＜0.05）。结论：云南松松塔提取物对正常小鼠的免疫功能有一定的增强作用。

云南松；松塔；正常小鼠；免疫球蛋白；补体；外周血细胞

［DOI］10.3969/j.issn.2096-2266.2016.08.001

松塔（Pinecone）系松科（Pinaceae）松属（Pinus）植物的球果，别名松果、松球，其植物来源有华山松、云南松、红松、油松及思茅松等。研究发现松塔中的一些抗癌活性成分具有抗肿瘤、抗菌及抗病毒作用〔1-2〕并有高效、低毒的特点〔3-4〕。并且，SAKAGAMI等〔5〕还提出松塔提取物中的抗肿瘤、抗HIV、抗菌活性成分可能是多糖的耦合物。此外，随着研究的深入，郭美仙等〔6〕研究发现云南松松塔提取物对乙醇损伤大鼠肝细胞有一定的抗氧化作用，于冬梅等〔7〕及刘中禄等〔8〕最近研究表明云南松提取物具有一定抗癌活性和抑制肝癌细胞增殖的作用，高浓度下对正常肝细胞和小鼠淋巴细胞毒性小。NAGASAWA等〔9〕还报道了日本白松松塔提取物降低小鼠乳汁中乳房肿瘤病毒（MMTV）含量的作用。因此，本实验以有关松塔的各项研究为基础，大胆推测云南松松塔是通过影响机体免疫系统从而改善机体的状况，探讨云南松松塔乙醇提取物（YN-DEF）对正常小鼠的免疫功能的影响，为进一步研究云南松的药用开发提供理论依据。

1　试验材料

YN-DEF（云南松松塔）：采自大理州漾濞县，经大理大学药学与化学学院生药学教研室段宝忠副教授鉴定为松科属植物云南松（Pinus yunnanensis Franch.）的松塔乙醇提取物；IgA、IgM、IgG、C3、C4酶联免疫检测试剂盒（MABTECH生物公司）、盐酸左旋咪唑（广东南国药业有限公司，批号：20150115），XFA6000动物血细胞分析仪用稀释液（南京普朗医疗设备有限公司，批号：PD1501）；HB探针清洗液（南京普朗医疗设备有限公司，批号：PB9407）；ANI-3D溶血剂（南京普朗医疗设备有限公司，批号：PF24020），HB含酶清洗液（南京普朗医疗设备有限公司，批号：PB7501）。

昆明种小鼠，体重（20±2）g，雌雄各半，由昆明医科大学动物实验中心提供，动物合格证号为SCXK（滇）2011-0004。

酶标分析仪（基因有限公司，Gen5型），全自动动物血细胞分析仪（南京普朗医疗设备有限公司，型号XFA6000）。

2　方法

2.1动物分组与给药分组：50只小鼠，实验组设置为正常组，阳性对照组，给药高剂量组、中剂量组、低剂量组，共5组。雌雄各半，每组10只。

给药：正常组给予生理盐水，0.2 mL/10 g；阳性对照组盐酸左旋咪唑（0.2 mL/10 g）25 mg/kg；给药高剂量组、中剂量组、低剂量组（0.2 mL/10 g），分别以400、200、100 mg/kg给药，各组连续给药10 d。

2.2检测指标末次给药后禁食12 h，从眼内眦静脉取血，取20 μL全血测白细胞、红细胞、血小板；剩余全血分离血清，置-20℃冰箱保存备用，颈椎脱臼处死小鼠取肝组织匀浆。取其胸腺和脾脏称量，计算脾脏指数和胸腺指数：脾脏指数=脾脏重量（mg）/小鼠体重量（g），胸腺指数=胸腺重量（mg）/小鼠体重量（g）；分别用血清检测免疫球蛋白IgA、IgM、IgG和补体C3、C4。

2.3数据分析采用SPSS21.0分析软件进行统计学分析，数据用表示，各组均数的比较用单因素方差分析（One-Way ANOVA），P＜0.05为差异具有统计学意义。

3　结果与分析

3.1云南松松塔提取物对正常小鼠外周血免疫球蛋白的影响给药组与正常组对比，云南松松塔提取物高、中、低剂量组对正常小鼠外周血中的免疫球蛋白IgA差异均有统计学意义（P＜0.05），与阳性对照组比较差异均无统计学意义（P＞0.05）；低剂量组还呈现出对免疫球蛋白IgM的增强作用，与正常组比较差异具有统计学意义（P＜0.05），而与阳性对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；此外，各给药组对IgG的变化无论是与阳性组比较还是与正常组比较均无明显影响（P＞0.05），但IgG随着浓度的增加呈增加趋势，呈一定的量效关系。见表1。

表1　云南松松塔提取物对正常小鼠血清中免疫球蛋白的影响

表1　云南松松塔提取物对正常小鼠血清中免疫球蛋白的影响

注：与正常组比较aP＜0.05。

组别正常组阳性对照组低剂量组中剂量组高剂量组IgG/ （g/L）0.036±0.032 0.044±0.027 0.032±0.008 0.046±0.016 0.054±0.026剂量/ （mg/kg）—25 100 200 400 IgA/ （g/L）0.191±0.093 0.274±0.047a0.273±0.018a0.294±0.054a0.256±0.040aIgM/ （g/L）0.255±0.068 0.263±0.032 0.320±0.084a0.263±0.038 0.284±0.064

3.2云南松松塔提取物对正常小鼠外周血中补体的影响给药组与正常组比较，各组均对正常小鼠外周血中的补体C4有显著性的增加作用，且差异具有统计学意义（P＜0.05），但其增加作用并不随浓度的增加呈逐渐递增或递减趋势。与阳性对照组比较，虽然中、高剂量组并无明显差异性，但与低剂量组比较差异具有统计学意义（P＜0.05）。此外，针对各给药组对补体C3的影响，无论是与阳性对照组比较还是和正常组比较差异均无统计学意义（P＞0.05），但随着浓度的增大，其作用呈逐渐增加的趋势，构成一定的量效关系。见表2。

表2　云南松松塔提取物对正常小鼠外周血清中补体的影响

表2　云南松松塔提取物对正常小鼠外周血清中补体的影响

注：与正常组比较aP＜0.05；与阳性组相比bP＜0.05。

组别正常组阳性组低剂量组中剂量组高剂量组C4/（g/L）0.045±0.017 0.050±0.019 0.071±0.011a b0.064±0.012a0.062±0.018a剂量/（mg/kg）—25 100 200 400 C3/（g/L）0.739±0.425 0.557±0.374 0.666±0.084 0.698±0.193 0.786±0.183

3.3云南松松塔提取物对正常小鼠免疫器官指数的影响给药组与正常组和阳性组比较，云南松松塔提取物对正常小鼠胸腺指数和脾脏指数作用均不明显，且差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

表3　云南松松塔提取物对正常小鼠免疫器官指数的影响

表3　云南松松塔提取物对正常小鼠免疫器官指数的影响

脾脏指数/（mg/g）3.82±1.83 3.02±0.87 3.31±1.28 2.95±2.21 3.21±0.72组别正常组阳性组低剂量组中剂量组高剂量组剂量/（mg/kg）—25 100 200 400胸腺指数/（mg/g）3.54±1.45 2.73±1.05 2.77±0.90 2.71±1.11 2.86±2.00

3.4云南松松塔提取物对正常小鼠外周血细胞的影响给药组与正常组比较，云南松松塔提取物对正常小鼠白细胞数有增加的作用，其中高剂量的增加差异具有统计学意义（P＜0.05），但与阳性对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）；而各给药组与阳性对照组及正常组比较，对红细胞和血小板的影响差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表4。

表4　云南松松塔提取物对正常小鼠外周血细胞的影响

表4　云南松松塔提取物对正常小鼠外周血细胞的影响

注：与正常组比较aP＜0.05。

组别正常组阳性组低剂量组中剂量组高剂量组血小板/ （109个/L）952.20±261.41 1 001.77±243.89 939.33±288.80 823.77±380.81 904.77±202.43剂量/ （mg/kg）—25 100 200 400白细胞/ （109个/L）2.50±0.97 3.17±1.50 2.85±0.89 2.51±0.97 3.96±1.17a红细胞/ （1012个/L）7.74±0.49 7.22±0.48 7.46±0.55 7.10±1.11 7.07±0.84

4　讨论

IgA、IgM、IgG免疫球蛋白作为机体的主要效应分子，在免疫系统中免疫球蛋白具有免疫防御、免疫监视和免疫自稳的作用，在血清和体液中的免疫球蛋白的含量可随着疾病的发生而改变；而C3、C4补体则既可参与机体的特异性免疫也可参与机体的非特异性免疫的调节，故免疫球蛋白和补体在机体中含量直接影响着机体的免疫功能，两者含量的测定结果均可成为反映机体免疫状态的两个重要指标。由上述实验结果显示，云南松松塔提取物选择性地提高了免疫球蛋白IgA、IgM及C4补体的含量，表明松塔提取物对正常小鼠体液免疫和体内非特异性免疫有一定的调节作用。研究中还发现，云南松松塔提取物对正常小鼠的外周白细胞数有明显的增加作用，所以云南松松塔提取物对增强固有免疫也有一定的效果。但对免疫器官指数没有明显的影响，与史志婷等〔10〕研究松塔提取物对小鼠急性毒性实验结果相同。

实验结果表明，云南松松塔对增强正常小鼠的免疫功能有一定的作用。以此实验为基础，进一步探讨云南松松塔增强免疫的作用，将会为今后选择治疗获得性或非获得性免疫低下疾病有效药物，提供一个参考依据。

〔1〕施贵荣，郭美仙，李冬梅，等.思茅松松塔化学成分研究〔J〕.大理学院学报，2014，13（2）：1-2.

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〔3〕吴道勋，刘璐，王莹，等.云南松松塔中原儿茶酸提取工艺的研究〔J〕.大理学院学报，2014，13（4）：4-7.

〔4〕吕永俊，王士贤，彭芳，等.松果有效成分研究Ⅵ红松与油松松塔及松子壳的抗癌活性〔J〕.大理学院学报，2008，7（2）：1-3.

〔5〕SAKAGAMI H，KAWAZOE Y，KOMATSU N，et al.Antitumor，antiviral and immunopotentiating activities of pine cone extracts：potential medicinal efficacy of natural and synthetic lignin-related materials（review）〔J〕.Anticancer Res，1991，11（2）：881-888.

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〔10〕史志婷，刘熙，张海珠.云南松松塔抗HIV-1活性提取物急性毒性实验研究〔J〕.大理学院学报，2014，13（8）：4-6.

〔Abstract〕Objective:To study the effect of pinecone extract of Pinus Yunnanensis on immune function of normal mice.Methods: Kunming mice were administered high，middle and low dose of pinecone extract（400，200，100 mg/kg），25 mg/kg Levamisole by gavage and the mice were sacrificed after 10 days.The content of immunoglobulin IgA，IgM，IgG，complement C3 and C4 in mice serum was measured；the amount of peripheral blood cell，spleen index，and thymus index were measured as well.Results:The pinecone extract of Pinus Yunnanensis could increase immunoglobulin IgA，IgM，complements C4 and WBC in peripheral blood content.Compared with normal group，the difference reflects statistical significance（P＜0.05）.Conclusion:The pinecone extract of Pinus Yunnanensis can enhance the immune function of normal mice.

〔Key words〕Pinus yunnanensis；pinecone；normal mice；immunoglobulin；complement；peripheral blood cell

（责任编辑李杨）

The Effect of Pinecone Extract of Pinus Yunnanensis on Immune Function of Normal Mice

Shao Weili1，Wu Daoxun1，Li Yang1，2，Liu Xi1，Liu Guangming1，Zhang Haizhu1，2*
（1.College of Pharmacy and Chemistry，Dali University，Dali，Yunnan 671000，China；2.Yunnan Provincial Key Laboratory of Entomological Biopharmaceutical R&D，Dali，Yunnan 671000，China）

R285

A

2096-2266（2016）08-0001-03

国家自然科学基金资助项目（81260632；81450053）；云南省教育厅科学研究基金资助项目（2014Z132）

2016-02-28

2016-04-06

邵维莉，硕士研究生，主要从事药理学研究.

张海珠，副教授.