气相质谱法测定瘦肉中的克伦特罗

罗杰鸿 邓建文

克伦特罗，又名瘦肉精，是一种对动物具有促进生长，减少脂肪含量的兴奋剂类物质，曾经广泛应用于生猪的饲养。然而由于克伦特罗易在动物组织形成残留，当人们食用后，就会发生中毒，所以我国已禁止作为生长促进剂使用。但由于其经济效益，非法使用克伦特罗的现象依然存在，因此，建立有效的克伦特罗检测方法具有重要意义。

气相质谱法测定克伦特罗的方法比较多，例如GB/T 5009.192-2003，但有些方法步骤多，繁琐，在实验的基础上，我们改进了克伦特罗的测定方法。

材料与方法

试剂与仪器。克伦特罗标准品购自德国Dr.E。N，O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）/三甲基氯硅烷（TMSCl）购自sigma，材料为市场常见的瘦肉。正己烷，乙酸乙酯等为色谱纯，高氯酸，氢氧化钠等为分析纯。气相质谱联用仪。

色谱条件。色谱柱：HP-5MS，30 m x 0.25 mm x 0.25μm；进样口温度：240oC；进样量：1μL，不分流；柱温程序：70oC保持1min，以18oC/min速度升至200oC，以5oC/min的速度再升至245oC，再以25oC/min升至280oC并保持2min。EI源：電子轰击能量：70eV；离子源温度：200oC；接口温度：285oC；溶剂延迟：12min；EI源检测特征峰：86、187、243、262。

分析过程

提取。称取10.0 g瘦肉，用20mL 0.1mol/L高氯酸溶液，匀浆后，超声萃取20min，取出置于80oC水浴中加热30min。取出冷却后离心15min。倒出上清液，沉淀用5mL 0.1mol/L高氯酸溶液洗涤，再离心。合并高氯酸溶液后，加入10mL正己烷，震荡，分层后弃掉正己烷，用10mL正己烷重复萃取油脂一次。用1mol/L的氢氧化钠溶液调节水相的PH至9.5左右，加入8g氯化钠，混匀后加入10mL乙酸乙酯，涡旋振荡提取20min。提取完毕后，用吸管小心将上层有机相转至离心管中，再加入10mL乙酸乙酯，重复涡旋振荡提取2次，合并乙酸乙酯，在50～60oC的砂锅中用氮气吹至干。此步骤如果净化不完全，可进行进一步净化。

净化。用1mL 0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液（PH=6.0）充分溶解残留物，经针筒式微孔过滤膜过滤，洗涤三次后完全转移到5mL离心管中，并用0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液定容至刻度。

依次用10mL乙醇、3mL水、0.1mol/L磷酸二氢钠缓冲液（PH=6.0）、3mL水冲洗弱阳离子交换柱，取适量提取液至弱阳离子交换柱上，弃去流出液，分别用4mL水和4mL乙醇冲洗柱子，弃去流出液，用6mL乙醇+浓氨水冲洗柱子，收集流出液，用氮气吹至干。

衍生。往氮气吹干的残留物中加入40ul N，O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）/三甲基氯硅烷（TMSCl）衍生试剂，盖紧塞子，在涡旋混合器上混匀2min，置于75oC的恒温加热器中衍生90min。冷却至室温，氮吹至干后，加入1000ul甲苯，充分混匀后进行气相进样。

标准曲线制备。用甲醇配备浓度范围为2μg/L，10μg/L，20μg/L，40μg/L，80μg/L，100μg/L，200μg/L的克伦特罗甲醇溶液，往不同离心管里各取500ul克伦特罗的甲醇溶液，用氮气吹至干后加入40ul BSTFA/TMSCl衍生试剂，盖紧塞子，在涡旋混合器上混匀2min，置于75oC的恒温加热器中衍生90min。冷却至室温，氮吹至干后，加入1000ul甲苯，充分混匀后进行气相进样。

结果与讨论

气相色谱-质谱分析。克伦特罗用BSTFA衍生生成三甲基硅烷化衍生物，质荷比为86的碎片峰为基峰。典型的色谱峰见下图。

市场上的瘦肉中克伦特罗的测定。取市场上的瘦肉进行加标回收率测定，回收率达到73%以上，仪器检出限能够达到2μg/L，满足测定要求。

（作者单位：罗杰鸿 广州京诚检测有限公司；邓建文 广东检验检疫技术中心）