川崎病患儿急性期免疫功能变化及其意义

王　琼　沈方方　吴　鸣浙江省嘉兴市第二医院儿科，浙江嘉兴　314000

川崎病患儿急性期免疫功能变化及其意义

王琼沈方方吴鸣
浙江省嘉兴市第二医院儿科，浙江嘉兴314000

目的探讨川崎病（KD）患儿急性期细胞免疫和体液免疫功能的变化，以及其对临床诊治的意义。方法 选取2014年1月~2015年6月本院收治的KD患儿50例作为KD组，以及同期健康体检儿童50例为对照组，分别测定外周血淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、CD16+56）与血清免疫球蛋白（IgG、lgA、IgM）水平，比较两组之间的变化。结果 与对照组比较，KD组的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、IgG、IgA、IgM水平均明显升高（P＜0.05），而CD16+56则出现下降（P＜0.05）。结论 KD患儿在急性期存在免疫系统的高度活化。

川崎病；淋巴细胞亚群；免疫球蛋白；活化

[Abstract]Objective To analyze the immunity condition in acute period children with Kawasaki disease．Methods Selected 50 children with KD and 50 healthy children,which were treated in our hospital from January 2014 to June 2015,were divided into KD group and control group．The level variation of lymphocyte subsets(CD3+,CD4+,CD8+, CD4+/CD8+,CD16+56)and immune globulin(IgG,IgA,IgM)were compared between two groups．Results Compared with the control group,the level of CD3+,CD4+,CD8+,CD4+/CD8+,IgG,IgA,IgM increased(P＜0.05)in the children with KD,while the level of CD16+56 decreased(P＜0.05)at the same time．Conclusion Children in the acute period of KD have active function in immunity condition,which means their immune system activated．

[Key words]Kawasaki disease;Lymphocyte subsets;Immune globulin;Activation

皮肤黏膜淋巴结综合征又称川崎病（Kawasaki disease，KD），是一种以全身血管炎症为主要病变的疾病，好发于5岁以下的儿童，可累及全身多系统病变，其中以心血管系统冠状动脉损害（coronary artery lesions，CAL）最为严重，且可能并发冠状动脉扩张（coronary artery dilatation，CAD），进一步甚至可能形成冠状动脉瘤（coronary artery aneurysms，CAA）。冠状动脉的炎性损伤导致冠状动脉阻塞性扩张，可进一步发展为心肌缺血最终发生心肌梗死及猝死，这也是本病的主要死因[1]。本病的发病率逐渐升高[2]，而在急性期有35%的患儿存在冠状动脉扩张[3]。大多数患儿的冠状动脉扩张可在缓解期自然恢复正常，但仍有约4%的患儿发生CAL病后1年仍持续存在，并最终演变为冠状动脉狭窄，到成人期可能出现冠状动脉粥样硬化以及心肌梗死发生。统计表明在发达国家，KD导致的儿童心血管并发症的发生率已超过风湿性心脏病，是儿童时期获得性心脏病的主要病因[4]。KD的病因和发病机制目前尚未完全明确，早期发现、早期确诊及治疗并减少CAL的发生是本病研究的热点。现阶段研究证实，本病与多种感染导致的机体免疫功能活化有较密切的相关性，其中T细胞介导的免疫应答以及细胞因子的级联放大反应是血管炎症发生的基础[5，6]。本文旨在探讨KD患儿急性期细胞免疫及体液免疫功能变化情况，现报道如下。

1　对象与方法

1.1研究对象

选择2014年1月~2015年6月本院收治的KD患儿共50例为KD组，均符合KD诊断标准[7]，并排除存在心脏疾病的病例。其中男31例，女19例，年龄11个月~10岁，平均年龄5.8岁，在进行检验前均未使用有影响免疫功能的药物。对照组为同时期健康体检的儿童共50例，男30例，女20例，年龄8个月~10岁，平均年龄5.5岁。家长理解并愿意参加本项临床试验，同时签署知情同意书。两组儿童在年龄、性别等方面比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2方法

KD组在入院第1天即予以采集静脉血标本检查上述指标。其中T淋巴细胞亚群检测采用方法为免疫荧光法，测定范围包括CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋、CD16+56，仪器为美国贝克曼库尔特公司的Cytomics FC500型流式细胞仪，所用试剂等均为原装配套试剂。免疫球蛋白IgG、IgA、IgM检测采用方法为散射比浊法，所用仪器为日立7600-020全自动生化分析仪。对照组在体检时抽取相同量的标本，采用相同方法检测相应指标。

1.3统计学方法

所有数据使用SPSS17.0统计学软件进行数据处理，计量资料以表示，组间比较采用t检验，P＜ 0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组外周血T淋巴细胞亚群水平比较

KD组患儿的CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋水平均明显高于对照组（P＜0.05），同时CD16+56水平则明显低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1　两组外周血T淋巴细胞亚群水平比较

表1　两组外周血T淋巴细胞亚群水平比较

CD3＋（%）CD4＋（%）CD8＋（%）　CD4＋/CD8＋CD16+56 （%）组别　n KD组对照组50 50 t值　P 63.27±4.38 61.22±3.82 3.59 ＜0.05 41.46±4.82 35.72±3.88 6.53 ＜0.05 27.29±2.83 24.32±1.98 5.21 ＜0.05 1.48±0.28 1.02±0.13 8.07 ＜0.05 8.01±1.98 10.05±0.89 1.32 ＜0.05

2.2两组免疫球蛋白水平比较

KD组患儿的免疫球蛋白IgG、IgA、IgM水平均明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2　两组患儿血清免疫球蛋白水平比较

表2　两组患儿血清免疫球蛋白水平比较

组别　n　IgA　IgM　IgG KD组对照组t值P 50 50 1.05±0.21 0.72±0.14 4.67 ＜0.05 1.67±0.18 1.41±0.23 5.01 ＜0.05 18.75±3.29 15.23±2.31 2.47 ＜0.05

3　讨论

KD的临床表现多样，且个体差异较大，其病理过程是以血管内皮细胞的免疫损伤为特征，主要为全身中小血管的非特异性炎症，在本病的发病早期发现血管壁水肿、坏死，同时存在内皮细胞改变和外膜炎症，即出现血管重构[8]，其典型特征为内源性弹性蛋白被破坏，进而导致系统性血管炎或冠状动脉瘤。但其病因及具体发病机制至今未明，较被认可的机制主要为发病急性期的免疫系统高度激活所导致的血管炎性损害，如AECA与血管内皮细胞的损伤结合后，可以发生多种免疫反应，对血管内皮细胞造成损伤，而ANCA这种作用则更为强烈[9]。也有作者认为支原体（MP）感染也是导致KD发病的病因之一，而且其中存在着相类似的免疫反应过程[10]。另外，近年来研究发现本病在急性期时有大量单核/巨噬细胞浸润，从而产生大量炎性细胞因子，最终结果则是直接损伤血管内皮细胞[11]，进一步导致细胞外基质的代谢紊乱、血管基底膜通透性的增加，以及细胞凋亡和迁移，乃至血管结构重建等病理生理变化，最后促使冠状动脉炎性病变及扩张，甚至狭窄的冠状动脉瘤等形成。多种炎症因子如MMP-9、IL-6和TNF-α参与了KD的病理生理过程[12]，Tan等[13]的研究还发现川崎病患儿不同时期的血清MMP-1、VEGF水平较健康儿童显著升高，均提示免疫学因素在KD的发生和发展中起了重要作用，故而推论本病的急性期可能存在着免疫系统的高度活化。

T淋巴细胞是参与机体细胞免疫的主要细胞群组，根据其在免疫应答中功能的不同，可分为辅助性（Th）、抑制性T细胞（Ts）和调节性T细胞（Tr）。Th的主要作用是介导细胞免疫应答，促使细胞毒性T细胞形成、活化，在自身免疫性疾病的诱导发生中有着重要作用。而Ts的作用则是通过释放抑制因子以抑制B细胞及效应T细胞的活化，从而降低机体的免疫功能[14]，CD4＋抗原和CD8＋抗原分别是其表面标志，CD4＋/ CD8＋比值与机体的免疫功能密切相关。我们的检测结果显示，KD患儿在急性期时CD4＋、CD8＋、CD4＋/CD8＋水平升高，与既往的文献报道一致[15]，提示我们，在KD起病的急性期，患儿的细胞免疫功能发生变化，表现为处于高度活化状态，即Th细胞功能的异常活化，而Ts细胞功能则相对有所减弱，进一步可以产生B细胞生长因子，促进多克隆B细胞分泌各种相应的免疫球蛋白，还可以动员淋巴细胞及单核/巨噬细胞分泌多种细胞因子，这些都参与了血管炎性损伤反应。活化的B细胞可以分泌IgG、IgA、IgM等多种Ig和抗体，参与抗原提呈以及其他免疫调节功能。在体液免疫反应过程中，Th细胞协助抗原物质刺激B细胞，形成抗体，而Ts细胞对B细胞则有抑制作用，其数量减少可以诱导B细胞功能的亢进，因而产生了大量抗体，导致了体液免疫功能紊乱。综上所述，T细胞的异常活化是KD患儿出现免疫功能紊乱以及产生血管炎性损伤的关键因素。研究发现[16]，活化的免疫细胞浸润冠状动脉，是进一步导致冠状动脉病变的重要病理改变。

我们在实验中观察到外周血IgA、IgM、IgG水平均有升高，提示KD患儿还存在有B细胞功能的活化。在患儿功能研究发现，某些患儿在KD急性期，细胞免疫可能受到抑制，但由Th2细胞介导的体液免疫功能可能增强[17]。而B细胞的分化是在T细胞的调控下进行的[18]，B细胞功能的活化，一方面是因为Th细胞过度活化后刺激B细胞发生增殖、分化；同时Ts细胞出现功能抑制，对B细胞抑制功能下降，这也加强了B细胞的活化。两方面同时作用导致B细胞功能异常。

CD16+CD56是NK细胞的标志物，其在机体免疫监视中有重要意义[19]。在本实验中KD患儿组下降，提示NK细胞也参与了KD的发病过程。NK细胞的降低，使得对B细胞增殖和分化的抑制功能发生减弱，导致B细胞出现过度增殖，也影响患儿的体液免疫功能，而Giordani等[20]研究的结果发现，KD急性期患儿的损伤动脉处可以检测到有T淋巴细胞、NK细胞以及吞噬/单核细胞的聚集和浸润，而这也引起了外周血中NK细胞水平的下降。这些改变都使得T细胞出现过度活化，从而促使B淋巴细胞和NK细胞分泌各种细胞因子，机体的免疫功能发生紊乱，而这些因素也都参与促使了血管壁的炎症性损伤，是KD发病过程中的免疫学关键改变。临床上给予丙种球蛋白治疗KD，因大剂量丙种球蛋白可以封闭单核/巨噬细胞、淋巴细胞等的Fc受体，抑制机体免疫细胞出现过度活化，检测发现CD8+细胞比例升高，与此同时被活化的CD4+细胞比例相应减少，这些变化使得IgG合成下降，从而负反馈调节，抑制了多克隆活化的B细胞产生自身抗体。而不完全性KD由于在临床上，尤其是起病早期，各种症状表现均不典型，影响了疾病的早期诊断，以至于在治疗方面发生延误，如不能早期给予丙种球蛋白治疗，故而不完全KD所导致冠状动脉病变发生率明显升高[21-23]。但是其免疫学改变与典型KD相似，可以通过观察免疫功能改变帮助早期诊断。

综上所述，KD患儿存在着细胞免疫和体液免疫的异常变化，患儿的免疫系统处于失衡状态之中。在KD急性期，患儿由于T淋巴细胞调控网络的失衡，使CD4+/CD8+的比值较正常生理状态时明显增高，故而患儿机体的免疫系统处于活化状态。而活化的T细胞又会分泌过量细胞因子，从而导致一系列的血管炎性病变以及脏器损伤。我们在临床治疗过程中，对KD患儿在其发病早期检测T淋巴细胞亚群及免疫球蛋白水平，有助于明确KD患儿的细胞免疫和体液免疫功能的变化，对本病进行早期临床干预及早期治疗，以缓解及阻止冠状动脉损害的发生。而进一步明确各种细胞因子在KD发病过程中的作用，开展封闭细胞因子的致炎性反应作用的研究，对于KD的最终治疗有重要意义。

[1]Coustasse A，Larry J，Lee D．Can Kawasaki disease be managed?[J]．Perm J，2012，16（2）：70-72．

[2]Kobayashi S，Fujimoto S，Takahashi K，et al．Anti-neutrophil cytoplasmic antibody-associated vasculitis，large vessel vasculitis and Kawasaki disease in Japan[J]．Kidney Blood Press Res，2010，33（6）：442-455．

[3]Kuo HC，Yu HR，Juo SH，et al．CASP3 gene single-nucleotide polymorphism （rs72689236）and Kawasaki disease in Taiwanese children[J]．J Hum Genet，2011，56（2）：161-165．

[4]谢利剑，黄敏．川崎病诊治的新观念[J]．临床儿科杂志，2015，33（7）：675-677．

[5]黄麟，杨作成．川崎病发病机制的研究进展[J]．中华儿科杂志，2009，47（4）：265-267．

[6]李瑞燕，李晓辉，徐酉华，等．细菌感染在川崎病发病及冠状动脉损害中的作用研究[J]．中国全科医学，2010，13：4002-4004．

[7]Newburger JW，Takahashi M，Gerber MA，et al．Diagnosis，treatment，and long-term management of Kawasaki disease：A statement for health professionals form the Committee on Rheumatic Fever．Endocarditis，and Kawasaki disease，council on cardiovascular disease in the young，American Heart Association[J]．Pediatrics，2004，114：1708-1733．

[8]Lv YW，Wang J，Sun L，et al．Understanding the pathogenesis of Kawasaki disease by network and pathway analysis[J]．Comput Math Methods Med，2013，2013：989307．

[9]Karasawa R，Fujieda M，Yudoh K．Detection of specific markers：Our research on the marker in patients with Kawasaki disease[J]．Nihon Rinsho Meneki Gakkai Kaishi，2010，33（4）：207-213．

[10]汪培勤，饶福光，罗建军．川崎病与支原体感染的相关性研究[J]．中国现代医生，2015，53（3）：41-43．

[11]孙飞，邱雅铮，魏扬，等．川崎病患儿外周血单核细胞CD14+、CD16+表达的意义[J]．实用儿科临床杂志，2008，23（9）：668-669．

[12]毛剑虹，徐芝芳．川崎制患儿血清MMP-9 IL-6和TNFα的变化及临床意义[J]．浙江临床医学，2014，16（10）：1654-1655．

[13]Tan Z，Yuan Y，Chen S，et al．Plasma endothelial microparticles，TNF-α and IL-6 in Kawasaki disease[J]．Indain Pediatr，2013，50（5）：501-503．

[14]Nagy E，Andersson DC，Caidahl K，et al．Upregulation of the 5-lipoxygenase pathway in human aortic valves correlates with severity of stenosis and leads to leukontriene-induced effects on valvular myofibroblasts[J]．Circulation，2011，123（12）：1316-1325．

[15]王伟，赖健铭，刘哲伟．冠状动脉扩张型川崎病患儿淋巴细胞亚群与体液免疫状况分析[J]．实用儿科临床杂志，2009，24（21）：1659-1673．

[16]Takahashi K，Oharaseki T，Naoe S，et al．Neutrophilic involvement in the damage to coronary arteries in acute stage of Kawasaki disease[J]．Pediatr Int，2005，47（3）：305-310．

[17]肖智辉，张朝霞，刘智屏，等．川崎病冠状动脉病变与Th1/Th2淋巴细胞比例的关系的研究[J]．中国医师杂志，2015，Z1：61-63．

[18]郑沛忠，郝增仙．反复呼吸道感染患儿T细胞亚群、免疫球蛋白及Th极化的临床研究[J]．中国小儿急救医学，2013，20（2）：194-196．

[19]丁艳，王瑞耕，孙东明，等．幼年特发性关节炎免疫功能及其临床应用价值[J]．中华实用儿科临床杂志，2014，29（21）：1643-1647．

[20]Giordani L，Quaranta MG，Marchesi A，et al．Increased frequency of imnmnoglobulin（Ig）A-secreting cells following toll-like receptor（TLR）-9 engagement in patients with Kawasaki disease[J]．Clin Exp Immunol，2011，163（3）：346-353．

[21]俞益萍．不典型川崎病56例临床分析[J]．浙江中西医结合杂志，2014，24（10）：931-934．

[22]郭红梅，韩彦彦．川崎病病因及其发病机制研究进展[J]．医学综述，2015，21（23）：4260-4263．

[23]胡珊，王永清．川崎病外周血淋巴细胞与T细胞亚群的相关性分析[J]．当代医学，2015，21（29）：1-3．

Change of immunity condition with Kawasaki disease in the acute period

WANG QiongSHEN FangfangWU Ming
Department of Paediatrics,Jiaxing Second Hospital in Zhejiang Province,Jiaxing314000,China

R725.4

A

1673-9701（2016）12-0014-03

浙江省嘉兴市科技局项目（2012AY1071-12）；浙江省基层卫生适宜技术成果转化工程项目（2013T301-17）

2015-11-10）