广州市2015年禽类市场禽流感流行病学监测

曹　蓝，陈艺韵，鲁恩洁，苏文哲，刘静雯，陈宗遒，陆剑云，刘艳慧，马　钰，李魁彪（广州市疾病预防控制中心，广东广州　510440）

广州市2015年禽类市场禽流感流行病学监测

曹蓝，陈艺韵，鲁恩洁，苏文哲，刘静雯，陈宗遒，陆剑云，刘艳慧，马钰，李魁彪
（广州市疾病预防控制中心，广东广州510440）

为了解2015年广州市禽类市场的禽流感病毒污染情况，为科学制定人感染禽源流感病毒的防控措施提供基础数据，对2015年广州市12个区部分禽类市场的3 447份样本进行了禽流感病毒荧光RT-PCR检测。结果显示：全部样品的A型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒的阳性率分别为12.56%和6.24%。1月份为A型和H9亚型禽流感阳性率最高的月份，阳性率分别为23.94%和14.73%。从化区的A型禽流感病毒阳性率最高（24.48%），黄埔区的H9亚型禽流感病毒阳性检出率最高（14.76%）。不同类型样品中，A型禽流感病毒阳性率最高为砧板、刀具类（15.16%），最低为冰鲜生鲜（7.78%）。H9亚型禽流感病毒阳性检出率最高为笼具（8.25%），最低为置物台面（2.84%）。结果表明：广州市禽类市场冬春季节禽流感病毒阳性率较高；全市各区禽类市场普遍存在禽流感病毒污染；禽类交易各环节中，宰杀和饲养环节的污染最为严重。建议在加强活禽交易市场全面清洗消毒的基础上，对不同季节、不同交易环节，采取差异化的和基于风险的消毒、监测措施，以降低人通过禽类市场感染禽流感病毒的风险。

禽类市场；禽流感；监测

禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV）是正黏病毒科的RNA病毒，根据病毒粒子表面抗原血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）的不同，分为不同亚型：H1～H16、N1～N9。目前已知的各亚型流感病毒均可在禽类中分离到［1］。根据致病性的不同，可将禽流感病毒分为高致病性、低致病性和无致病性禽流感病毒［2］。

H9N2亚型禽流感1994年在我国广东省首次暴发，后逐渐扩散至我国大陆的不同区域，并且成为在大陆地区家禽中流行的主要亚型［3-4］。此外，该病毒还可感染包括猪［5］、犬、猫［6］和雪貂［7］在内的一系列哺乳动物。1998年，广东省报道了我国首例人感染H9N2亚型禽流感病例［8］。之后，广东省还有多起人感染H9N2亚型禽流感病毒的报道［9-10］。研究表明，H9N2亚型禽流感病毒通过基因突变已具有适应人群的特征，并且存在人际传播的风险［11-12］。

H9N2亚型禽流感病毒除了可直接感染人外，还通过病毒基因“重配”，给人类健康带来重大的威胁［13］。1997年香港出现人H5N1亚型禽流感感染及死亡病例。现已研究证实，其6个内部基因片段就是由H9N2病毒提供的［14］。另外，2013年首次在我国东部地区出现的H7N9亚型流感病毒［15-16］，以及2013年11月出现的H10N8亚型禽流感病毒［17］，其内部基因均来源于不同谱系的H9N2亚型禽流感病毒。

禽类市场是禽流感病毒发生重组扩散的高风险区域［18］。市场内不同种类的禽类长期密集接触，以及市场内高湿高热的环境，再加上消毒不及时、不彻底等，为禽流感病毒在动物之间传播创造了有利条件［19］。而禽类市场的外环境是人直接和间接接触禽类的重要场所，更是禽流感病毒从禽到人跨种间传播的重要环节［20-21］。而我国广东省的居民有在禽类市场挑选活禽、现场宰杀的习惯，这更增加了人在禽类市场感染禽流感的风险［18］。为了解广州市禽类市场的禽流感病毒，特别是H9N2亚型禽流感病毒的污染状况，开展了本次调查研究。

1　材料和方法

1.1 试剂

常温病毒采集转运系统（UTM）购自意大利Copan公司；RNA提取试剂盒QIAamp®Viral RNA Mini Kit 购自QIAGEN 公司；禽流感病毒通用A型及H9亚型荧光定量RT-PCR检测试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司；荧光定量PCR仪7500 Fast购自Applied Biosystems 公司。

1.2 样本采集

按随机抽样的方式，对2015年广州市12个区的禽类市场进行采样。每个区选择2～3个市场，每个市场随机选择2～4个档口。主要采集禽类泄殖腔拭子，粪便、饮用水、污水、笼具、砧板、刀具、脱毛机、冰箱，以及光鸡、冰鲜鸡等涂抹拭子样品。采集后的标本4 ℃保存，在24小时内送至实验室-80 ℃保存备用。

1.3 实验室检测

标本冻融后置于振荡器充分震荡（液体类标本上下颠倒混匀），参照说明书进行核酸RNA提取。对通用A型流感病毒荧光RT-PCR 检测试剂盒检测为阳性的标本，再用H9亚型流感病毒荧光RTPCR 检测试剂盒进行检测。

1.4 数据分析

将数据导入Excel表格，并进行数据的统计分析。

2　结果

2.1 总体检测情况

2015年1月至12月，采集广州市12个区禽类市场的活禽泄殖腔拭子和各种外环境拭子，共采集3 447份样品。经检测，A型禽流感病毒阳性样品433份，阳性率为12.56%；H9亚型禽流感病毒阳性样品215份，阳性率为6.24%。

2.2 时间分布情况

全年1—12月样品的检测结果显示，不同月份A型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒的阳性检出率差异较大，具体如图1所示。A型禽流感病毒阳性率在1月份最高（23.94%），在6—8月份最低（未检出，阳性率为0）。H9亚型禽流感病毒阳性率在1月份最高（14.73%），在5—10月份最低（未检出，阳性率为0）。各月采样情况及阳性率见表1。

图1　不同月份的禽类市场禽流感病毒阳性率变化

表1　2015年1-12月采样量及禽流感阳性率统计

2.3 空间分布情况

2015年广州市各区的采样情况见表2。检测结果如图2所示，各区之间的禽流感病毒阳性率差异较大。其中，从化区的A型禽流感病毒阳性率最高，为24.48%；白云区最低，为5.73%。H9亚型禽流感病毒阳性检出率最高的为黄埔区（14.76%），最低为白云区（1.91%）。

表2　2015年各区采样量及禽流感阳性率统计

图2　不同区禽类市场禽流感病毒阳性率情况

2.4 样品分布情况

结合广州市禽类市场家禽售卖、屠宰的实际情况及从业人员的行为习惯，本研究将采集的3 447份样品分成11个标本类型。检测结果显示，A型禽流感病毒检出阳性率最高的为砧板刀具类（15.16%），最低的为冰鲜生鲜（7.78%）；H9亚型禽流感病毒阳性率最高的为笼具（8.25%），最低的为置物台面（2.84%），结果详见表3。

表3　不同样品类型采样量及阳性率统计

3　讨论

本研究发现，2015年广州市禽类市场的A型禽流感病毒和H9亚型禽流感病毒阳性率分别为12.56%和6.24%，均高于广州市2013年的调查数据（3.26%和1.28%）［22］，说明近年来广州市禽类市场的禽流感病毒污染较为严重。同时，对广州市12个区禽类市场的活禽样品以及外环境样品的禽流感病毒污染情况进行分析，结果发现不同地区的A型和H9亚型禽流感病毒阳性率差异较大。A型禽流感病毒阳性率在5.73%～24.48%之间，H9亚型禽流感病毒阳性率在1.91%～14.76%之间，表明广州市各区禽类市场受禽流感病毒污染的现象较为普遍。同时，A型禽流感病毒阳性率以从化区和越秀区较高，可能与这些地区的禽类交易消费量或活禽来源有关，需进一步进行调查和分析。

本研究对2015年广州市12个区禽类市场的活禽泄殖腔样品和外环境样品进行采样和检测，分析不同月份的A型和H9亚型禽流感病毒的阳性率情况，结果发现H9亚型禽流感病毒阳性率与A型禽流感病毒阳性率的变化趋势基本一致。对于A型禽流感病毒而言，虽然全年大部分月份均有病毒检出，但6—8月期间均未检出病毒。该结果与段晓冬等［18］及梁能秀［23］的调查结果存在一定差异，主要的原因可能与6—8月采集的样品量少有关，也可能与时间、气候和地区差异等客观因素有关。但总体上，禽流感病毒阳性率在冬春季节相对较高，在春夏季节较低，这与以往的研究结果一致［12，24］。进一步比较发现，一般在A型禽流感病毒阳性率高的月份，H9病毒的检出率也相对较高，但3月、5月、9月和10月除外。这4个月的A型禽流感病毒阳性率在1.67%～10.00%之间，而H9病毒阳性率均为0，说明禽类市场中除存在H9亚型禽流感病毒之外，还有诸如H4、H5、H6、H7等其他多种亚型的禽流感病毒［25］。同时，也提示对于禽类市场而言，与单独检测H9亚型禽流感病毒相比，A型禽流感病毒的检测结果可能更能反映市场内禽流感病毒的污染情况。

对不同类型样品的检测结果分析显示，砧板、刀具类标本的A型禽流感病毒阳性率最高，表明禽类在宰杀环节受禽流感病毒的污染最为严重。一般情况下，活禽被宰杀后直接被市民挑选购买，因此宰杀环节是普通人群感染禽流感的高风险环节。建议市场管理部门加强禽类宰杀环节的卫生清洗和消毒，以降低普通人群通过接触宰杀后的家禽感染禽流感病毒的风险。2013年以来，广州市先后出现人感染H7N9、H5N6亚型流感病毒病例。为降低人感染禽流感病毒的风险，广州市政府推行实施“冰鲜上市”措施。本研究结果显示，在11个样品类型中，冰鲜、生鲜样品的A型禽流感病毒检出率最低，且明显低于活禽泄殖腔拭子的病毒检出率。该数据也从正面支持了政府大力推行“冰鲜生鲜”上市措施的正确性和科学性。本研究还发现，饮水、饲料和笼具拭子中也有较高的A型禽流感病毒检出率，并且在各类型样品中，笼具样品的H9亚型禽流感病毒阳性率最高，说明市场中活禽的饲养环境受禽流感病毒污染的情况也较为严重。调查发现，市场内普遍存在多种禽类在高温、高湿环境下密集饲养。在这种应激条件下，禽类免疫力降低，更易受到环境中禽流感病毒的感染。此外，通常禽类市场内存在多种亚型禽流感病毒［25］，这增加了不同禽流感病毒在活禽体内重组进化，进而出现新型病毒株的可能性。李魁彪等［26］的研究发现，广州市活禽交易市场职业暴露人群的H9N2亚型禽流感病毒的隐性感染较为严重。本研究的结果也显示，所有类型的样品中都存在不同程度的H9亚型禽流感病毒感染，说明在禽类市场的屠宰、售卖等多个环节都存在H9病毒的污染。因此有必要进一步加强对职业人群的健康宣教，要求其做好个人防护，以减少人感染禽流感的发生。

综上所述，广州市禽类市场冬春季节的禽流感病毒阳性率较高，全市各区禽类市场普遍存在禽流感病毒污染现象，禽类交易各环节中的宰杀和饲养环节病毒污染最为严重。因此，建议在加强禽类市场全面清洗消毒的基础上，对冬春季节以及宰杀和饲养环节采取差异化和基于风险的消毒防控措施，严格执行“休市”政策，加强从业人员的宣传教育，降低禽流感病毒污染率，进而降低人感染禽流感的发生风险。同时，有必要继续加强禽流感病毒的流行病学和分子流行病学监测和调查工作。这对及时了解禽流感病毒的变异和流行情况，有效评估禽流感病毒向人间传播的风险，以及对人感染禽流感病毒进行早期预警，具有重要的公共卫生意义。

［1］ Tong S，Li Y，Rivailler P，et al. A distinct lineage of influenza A virus from bats［J］. Proc Natl Acad Sci U S A，2012，109：4269-4274.

［2］ Perdue M L，Suarze D L. Structural features of the avianinfluenza virus heamagglutinin that Influence virulence［J］. Vet Micro，2000（74）：77-86.

［3］ Li C J，Yu K Z，Tian G B，et al. Evolution of H9N2 influenza viruses from domestic poultry in Mainland China［J］. Virology 2005，340（1）：70-83.

［4］ Li K S，Xu K M，Peiris J S M，et al. Characterization of H9 subtype influenza viruses from the ducks of southern China: A candidate for the next influenza pandemic in humans［J］. J Virol，2003，77（12）：6988-6994.

［5］ Peiris J S M，Guan Y，Markwell D，et al. Cocirculation of avian H9N2 and contemporary“human”H3N2 influenza A viruses in pigs in southeastern China：potential for genetic reassortment［J］. J Virol，2001，75（20）：9679-9686.

［6］ Zhang K，Zhang Z，Yu Z，et al.Domestic cats and dogs are susceptible to H9N2 avian influenza virus［J］. Virus Res，2013，175（1）：52-55.

［7］ Wan H Q，Sorrell E M，Song H C，et al.Replication and transmission of H9N2 influenza viruses in ferrets: evaluation of pandemic potential［J］. PLoS One，2008，3（8）：e2923.

［8］ Choi Y K，Ozaki H，Webby R J，et al. Continuing evolution of H9N2 influenza viruses in Southeastern China［J］. J Virol，2004，78（16）：8609-8614.

［9］ 刘国乾，曹蓝，和君，等. 三株H9N2亚型禽流感病毒全基因组序列分析［J］. 动物医学进展，2012，33（5）：1-7.

［10］ 郭元吉，李建国，程小雯，等. 禽H9N2 亚型流感病毒能感染人的发现［J］. 中华实验和临床病毒学杂志，1999，13（12）：105-108.

［11］ 罗会明，李建中. 流感与人禽流感的预防控制［M］. 广州：广东科技出版社，2005：29-32.

［12］ 许桂锋，何展，黄耀云，等. 茂名市2013-2014年活禽市场禽流感病毒污染状况监测［J］. 中国热带医学，2015，15（8）：1020-1206.

［13］ Guan Y，Shortridge K F，Krauss S，et al. Molecular characterization of H9N2 influenza viruses: Were they the donors of the“internal”genes of H5N1 viruses in Hong Kong［J］. Proc Natl Acad Sci U S A，1999，96（16）：9363-9367.

［14］ Liu J，Xiao H，Wu Y，et al. H7N9: a low pathogenic avian influenza A virus infecting humans ［J］. Curr Opin Virol， 2014，5：91-97.

［15］ Cui L，Liu D，Shi W，et al. Dynamic reassortments and genetic heterogeneity of the human-infecting influenza A （H7N9）virus［J］. Nat Commun，2014，5：3142.

［16］ Chen H，Yuan H，Gao R，et al. Clinical and epidemiological characteristics of a fatal case of avian influenza A H10N8 virus infection: a descriptive study［J］. Lancet，2014，383（9918）：714-721.

［17］ Liu D，Shi W，Gao G F. Poultry carrying H9N2 act as incubators for novel human avian influenza viruses［J］. Lancet，2014，383（9920）：869-869.

［18］ 段晓冬，沈丹，张海明，等. 2013年广州市禽类市场禽流感流行病学调查［J］. 中国动物检疫，2014，31（11）：33-43.

［19］ Liao Q，Lam W T，Leung G M. Live poultry exposure，Guangzhou，China，2006［J］. Epidemics，2009（4）：207-212.

［20］ Mounts A W， Kwong H， Izurieta H S.Case-control study of risk factors for avian influenza A （H5N1） disease，Hong Kong，1997［J］. J Infect Dis，1999，180（2）：505-508.

［21］ Wu Y，Gao G F. Lessons learnt from the human infections of avian-origin influenza A H7N9 virus：live free markets and human health［J］. Sci China Life Sci，2013，56：493-494.

［22］ 鲁恩洁，陈艺韵，刘静雯，等. 2013年广州市禽流感职业暴露人群及市场环境禽流感病毒H7N9监测分析［J］.医学动物防制，2014，30（9）：980-984.

［23］ 梁能秀. 广西农贸市场环境标本禽流感病毒核酸检测及亚型分布研究［D］. 南宁：广西医科大学，2015.

［24］ 赵国，刘晓文，钱忠明，等. 2002-2009 年中国华东地区家禽低致病性禽流感的病原学检测与分析［J］. 中国农业科学，2011，44（1）：153-159.

［25］ Zhao G，Pan J，Gu X，et al. Prevalence of low pathogenic avian influenza virus in one live bird market in Eastern China from 2002-2011［J］. Avian Dis. 2013，57（1）：155-158.

［26］ 李魁彪，鲁恩洁，陈艺韵，等. 2012-2013年广州市职业暴露人群及环境禽流感监测分析［J］. 华南预防医学，2015，41（4）：356-360.

（责任编辑：朱迪国）

Epidemiological Surveillance of Avian Influenza in Retail Live Poultry Markets of Guangzhou City in 2015

Cao Lan，Chen Yiyun，Lu Enjie，Su Wenzhe，Liu Jingwen，Chen Zongqiu，Lu Jianyun，Liu Yanhui，Ma Yu，Li Kuibiao
（Guangzhou Center for Disease Prevention and Control，Guangzhou，Guangdong 510440）

To understand the distribution of avian influenza virus （AIV） in live poultry markets of Guangzhou city，to provide the technical supports for decision making on AIV prevention and control measures，3 447 samples including cloacal swabs and environmental swabs were collected and tested by real-time RT-PCR for AIV A type and H9 subtype. Of all samples，the positive rates of AIV A type and H9 subtype were 12.56% and 6.24% respectively. January witnessed the highest positive rates of A type and H9 subtype virus. The positive rate of A type in Conghua district was higher than in other 11 districts and the highest positive rate of H9 subtype virus among 12 districts was in Huangpu. The results indicated that AIV infection of retail live poultry markets in Guangzhou was severe and the highest positive rates of AIV were in the spring and winter. In the retail live poultry markets，the highest positive rates were found in slaughtering and feeding places. Therefore，more effective prevention and control measures are needed for reducing the risk of human infection with AIV.

retail live poultry market；live poultry swabs；environmental swabs；avian influenza；surveillance

S858.3文献识别码：B

1005-944X（2016）08-0008-05

10.3969/j.issn.1005-944X.2016.08.003

广州市医药卫生科技项目（20161A010058、20141A011058）

李魁彪