重庆市2012—2015年新城疫流行病学监测

冯　超，陈忠琼（重庆市动物疫病预防控制中心，重庆　401120）

重庆市2012—2015年新城疫流行病学监测

冯超，陈忠琼
（重庆市动物疫病预防控制中心，重庆401120）

采用荧光RT-PCR方法，对随机抽取自2012—2015年重庆市23个区县561个场点临床健康的15 930份禽咽肛拭子和环境拭子样品，进行新城疫病毒病原学检测，并对检出样品所在群体进行流行病学调查。病原学检测结果显示：228份样品呈新城疫病毒核酸阳性，病毒个体总检出率为1.43%；53个场点检出新城疫病毒，群体总检出率为9.45%。流行病学调查显示：2012—2015年重庆市存在不同程度的新城疫感染，病毒检出率呈逐年下降趋势。一年四季均可检出病毒，其中冬季、春季和秋冬交接季的检出率较高。不同环节中，不同品种、日龄的家禽病毒检出率有差异。其中，市场环节中的病毒检出率最高，其次是中小型养殖场；鸽群中的病毒检出率高于其他禽群；蛋鸡中病毒检出率较高的主要集中在120～300日龄，而肉鸡主要集中在40～120日龄。不同地区的病毒检出率亦不同，渝西片区高于渝东南和渝东北片区。监测结果表明，重庆市的市场和中小型养殖场发生新城疫感染和传播的风险最大，应重点加强监测和防控。

新城疫病毒；病原学检测；流行病学调查

新城疫（Newcastle Disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）强毒株感染引起的一种败血性、急性、高度接触性禽类传染病［1］。多年来，我国尽管开展了以疫苗接种为主的综合防控措施，有效控制了新城疫的暴发流行，但由于其病原多样，环境中病毒污染严重，局部地区呈地方性流行，非典型新城疫及免疫带毒现象普遍［2］，以及各养殖企业防控水平差异较大，新城疫仍然是严重危害我国养禽业的常见病。为了解近年来重庆市家禽新城疫流行情况，2012—2015年在重庆市23个区县561个场点进行了新城疫病毒病原学检测和流行病学调查。

1　材料和方法

1.1 材料

1.1.1 样品。2012—2015年，按照三级抽样法，在重庆市家禽主产的23个区县68个乡镇137个行政村561个场点，随机抽取临床健康的15 930份禽拭子样品，其中咽肛拭子样品14 973份、环境拭子样品957份。样品置于含抗生素和甘油的PBS液（pH7.4）中保存。

1.1.2 试剂。新城疫病毒强毒株（NDV）荧光RT-PCR检测试剂盒，购自凯杰生物工程（深圳）有限公司；病毒RNA提取试剂盒，购自天根生化科技（北京）有限公司；其他试剂均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 RNA提取。参照天根生化科技（北京）有限公司的病毒RNA 提取试剂盒说明书提取样品的RNA。

1.2.2 荧光RT-PCR检测。以提取的RNA 为核酸模板，采用荧光RT-PCR方法，对样品进行NDV病原学检测。参照凯杰生物工程（深圳）有限公司的新城疫病毒强毒株（NDV）荧光RT-PCR检测试剂盒说明书，进行如下操作：设检测样品数量为N，取一个干净无菌的1.5 mL离心管，向离心管中分别加入N×0.25 µL Taq酶、N×0.25 µL RT-PCR酶、N×15 µL RT-PCR反应液，充分混匀并低速瞬时离心后，分别向N个PCR反应管中各分装15 µL混合液，之后再分别向每个PCR反应管中加入10 µL RNA模板。在荧光PCR仪上进行42 ℃ 30 min；92 ℃ 3 min；92 ℃ 10 sec，45 ℃ 30 sec，72 ℃1 min，5个循环；92 ℃ 10 sec，60 ℃ 30 sec，收集荧光FAM，40个循环的扩增反应。

1.2.3 流行病学调查。根据流行病学调查方法，对病毒检出样品所在群体进行流行病学调查分析。

2　结果

2.1 NDV总检测结果

2012—2015年，采集的15 930份拭子样品中，有228份样品呈NDV核酸阳性，病毒个体检出率为1.43%，其中咽肛拭子样品和环境拭子样品病毒个体检出率分别为1.12%和 6.37%（表1）。561个场点中有53个场点检出NDV，病毒群体检出率为9.45%。

表1　重庆市2012—2015年拭子样品NDV检测结果

2.2 不同时间段的病毒检出结果

不同年份均有NDV被检出，总体呈下降趋势，具体数据和变化见表2和图1。不同月份的NDV检出率有差异，病毒个体检出率最高的月份依次是1月和12月，最低的是7月和8月，详见表3和图2。

表2　重庆市2012—2015年不同年份NDV检测结果

图1　重庆市2012—2015年不同年份NDV检测结果变化曲线

2.3 不同环节的病毒检出结果

不同环节中，养殖场、散养户和市场中样品的病毒个体检出率不同，市场中的检出率最高，详见表4。

2.4 不同禽群的病毒检出结果

除种禽中未检出NDV之外，其他禽群均有不同程度的检出，详见表5。

表3　重庆市2012—2015年不同月份NDV检测结果

图2　重庆市2012—2015年各月份NDV病毒检出率变化曲线

表4　重庆市2012—2015年不同环节NDV检测结果

表5　重庆市2012—2015年不同禽群NDV检测结果

2.5 不同日龄的病毒检出结果

不同日龄的NDV检出率不同。蛋鸡中的病毒检出主要集中在120～300日龄的产蛋高峰期蛋鸡，病毒个体检出率为0.92%，群体检出率为7.02%；肉鸡中的病毒检出主要集中在40～120日龄的雏鸡和青年鸡，病毒个体检出率为1.83%，群体检出率为15.60%；鸭群中的病毒检出主要集中在小于49日龄的雏鸭，病毒个体检出率为3.77%，群体检出率为15.79%；鹅群中的病毒检出主要在30～60日龄的鹅，病毒个体检出率为2.78%，群体检出率为11.11%；鸽群中的病毒检出主要在小于30日龄的雏鸽，病毒个体检出率为5.56%，群体检出率为16.67%（表6）。

表6　重庆市2012—2015年不同家禽日龄NDV检测结果

2.6 不同地区的病毒检出结果

2012—2015年，重庆市不同地区均有NDV被检出，但存在区间差异，详见表7。

表7　重庆市2012—2015年不同地区NDV检测结果

3　分析与讨论

2012—2015年的NDV病原学检测结果显示，15 930份家禽和环境样品中有228份样品检出病毒，其中家禽样品病毒检出率为1.12%，环境样品病毒检出率为6.37%，病毒群体总检出率为9.45%，说明重庆市存在一定的NDV感染，并且环境中病毒污染情况相对严重。此外，重庆市不同地区NDV的检出情况不同，渝西片区病毒检出率高于渝东南片区和渝东北片区，这可能与渝西片区家禽养殖量大、饲养密度高有关。

2012—2015年的NDV病毒检出率呈逐年下降趋势，说明近年来重庆市家禽新城疫的防控取得良好成效。这和近年来规模化养殖程度逐渐提高有关，同时还得益于重庆市大力推行的“以监促防、以检计酬兽医工作考核机制”和“凭动物疫病监（检）测报告、风险评估报告出具产地检疫证明”的新工作制度。

调查结果表明，重庆市市场环节病毒检出率高于养殖场和散养户。流行病学调查显示，病毒检出率高的市场，大多环境差、流通频繁复杂，未按规定进行日常消毒或消毒不彻底，不同来源地的家禽混合一起销售，未实行全进全出。因此，市场是新城疫的主要传染源。本次调查还发现，有病毒检出的养殖场多为中小型养殖场（存栏量＜6 000羽），约占80%，且大多是半封闭式，禽群饲养密度高，通风不良，环境卫生差，免疫程序混乱，技术水平和饲养管理欠佳，生物安全意识欠缺，消毒措施不健全。这与伏小平等［3-5］的中小型饲养场新城疫发病率相对更高的研究调查结果相一致，说明中小规模饲养场是发生新城疫的高风险区。

NDV在不同禽群中均可检出，说明重庆市NDV感染无种群特异性，张春岭［5］和岳旭龙等［4］的研究结果也证实了这一观点。值得关注的是，以前人们普遍认为水禽对NDV具有很强的抵抗力，但近年来不但相继出现鹅群和鸭群发病，以及鸭产蛋下降的报道［6-8］，还出现了健康家养水禽均可携带NDV弱毒并通过泄殖腔和气管向外排出的报道［9-10］。弱毒株感染鸡体后通过连续传代能够增强其毒力［11］。因此，水禽和陆禽之间的NDV交叉循环传播，特别是水禽NDV的高带毒率对家禽新城疫的流行病学意义，应引起高度重视。

重庆市一年四季均可检出NDV，没有明显的季节性，但各月的病毒检出率存在差异。寒冷湿润月份的病毒检出率较高，而比较炎热月份的病毒检出率较低。总体而言，冬季、春季以及秋冬交接季的病毒检出率较高，说明重庆市新城疫的发生与气候存在一定的相关性。这可能与重庆市四季气候差异明显、寒冷季节家禽自身抵抗力减弱有关。这与国内学者徐剑［12］、王珏等［9］、徐守振等［13］的调查结果相一致。

重庆市各日龄段的家禽病毒检出率各不相同，雏禽和青年禽检出率较高。蛋鸡中的病毒检出主要集中产蛋高峰期蛋鸡。NDV可影响蛋的品质和产蛋率。而肉鸡主要集中在雏鸡和青年鸡。这与岳旭龙等［4］调查发现河南省2010—2011年间部分地区新城疫发病日龄主要集中在34～42日龄肉鸡和40～70日龄蛋鸡，以及李华坤等［14］对徐州市调查发现新城疫发病主要集中在20日龄鸡的结果存在一定差异，其原因还有待进一步深入调查与研究。

资料［15］显示，检测NDV最灵敏的方法是采用鸡胚进行病毒分离。限于实验条件，本研究采用了灵敏性略低于鸡胚病毒分离但能检测中强毒株的荧光RT-PCR方法。该方法特异性好、敏感性高（能检测10-8～10-7感染尿囊液），所用试剂均来自于同一个厂家，因此研究结果能够客观反映重庆市2012—2015年的NDV流行规律。

［1］蔡宝祥.家畜传染病学［M］.北京：中国农业出版社，2001：304.

［2］刘华雷，王志亮.新城疫的流行历史与现状［J］.中国动物检疫，2015，32（6）：1-4.

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［4］岳旭龙，陈礼朋，李双亮，等. 2010-2011年河南省部分地区H9亚型禽流感、新城疫和鸡传染性支气管炎的流行病学调查［J］.中国农学通报，2012，28（8）：72-76.

［5］张春岭.枣庄地区鸡新城疫流病学调查与防制研究［D］.山东：山东农业大学，2011：16-34.

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［9］王珏，仇旭升，戴亚斌，等.华东地区健康水禽携带新城疫病毒情况调查［J］.中国动物疫病传染病学报，2013，21（6）：19-25.

［10］胡北侠，黄艳艳，路希山，等.规模化养殖场种鸭新城疫和A型流感病毒带毒监测研究［J］.江苏农业科学，2008，6：205-206.

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［12］徐剑.海安地区新城疫的流行病学调查［J］.中国畜牧兽医文摘，2013，29（7）：96-97.

［13］徐守振，郭妍妍，卢春晓，等. 2008年～2012年山东胶东鸡场NDV IBV AIV（H9）感染情况调查［J］.中国兽医杂志，2013，49（9）：12-14.

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［15］B.W.卡尔尼克.禽病学［M］.北京：中国农业出版社，1999：706.

（责任编辑：朱迪国）

Epidemiological Investigation of Newcastle Disease Virus in Chongqing City during 2012—2015

Feng Chao，Chen Zhongqiong
（Chongqiong Center for Animal Disease Control and Prevention，Chongqing 401120）

Etiological detection on Newcastle Disease Virus（NDV）was carried out in Chongqing from 2012 to 2015. 15 930 pharyngeal， cloacal andenvironmental swab samples randomly collected from clinical health poultry in 561 poultry farms of 23 districts in Chongqing were tested by fluorescence RT-PCR ，and epidemiological investigation was conducted towards flocks from which positive samples were detected. The etiological detection results showed that 228 samples were NDV positives with avirus detection rate at individual level of 1.43%，and 53 flocks were NDV positives with a virus detection rate at flock of 9.45%. According to the results of epidemiological investigation，there were different levels of infection on NDV in Chongqing during 2012—2015，and the virus detection rate declined year by year. The virus could be detected all the year round，but the virus detection rate was relatively higher in spring，winter and later autumn. The virus detection rate of samples from different sources，different kinds and different dayold poultry were different. The virus detection rate of samples from markets was the highest，and the second was samples from the small and medium-sized farms. The virus detection rate of pigeons was higher than that of other poultry. Positive samples of layers were mainly from 120～300 days old chicken，while those of broilers were mainly from 40～120 days old ones. The virus detection rate of different areas were different. The virus detection rate of west Chongqiong was higher than that of the southeast and southwest of Chongqiong. The results indicated that the highest risk of infection and spreading of ND were at markets，as well as on small and medium sized farms of Chongqing. This suggests that NDV surveillance and control should be enhanced.

Newcastle disease virus；etiological detection；epidemiological investigation

S851.3

B

1005-944X（2016）08-0017-04

10.3969/j.issn.1005-944X.2016.08.005