帅丽华,胡志坚,李婷,王敏,黎美仁,周英棠,邹志梅,陈萍
(1、九江学院附属医院检验科,江西 九江33200;2、九江学院附属医院病理科,江西 九江33200;3、九江学院省重点实验中心,江西 九江33200;4、九江学院附属医院妇产科,江西 九江33200)
青黛新三萜物质合剂抗高危HPV病毒临床疗效观察
帅丽华1,胡志坚1,李婷2,王敏1,黎美仁2,周英棠3,邹志梅4,陈萍4
(1、九江学院附属医院检验科,江西 九江33200;2、九江学院附属医院病理科,江西 九江33200;3、九江学院省重点实验中心,江西 九江33200;4、九江学院附属医院妇产科,江西 九江33200)
目的 观察青黛新三萜物质合剂抗高危HPV病毒的治疗效果及其在预防宫颈癌病变发展中的作用。方法 高频超声提取青黛新三萜物质,将其与枯矾、冰片联合制成合剂,观察其抗高危HPV病毒效果及对宫颈上皮内瘤变(CIN)及宫颈糜烂治疗的有效率并与干扰素对比。结果 青黛新三萜物质合剂组及干扰素组治疗3月后HPV-DNA转阴率分别为87.5%、71.4%,对CIN治疗有效率分别为75.0%、44.0%,对宫颈糜烂治疗有效率90.6%、47.1%。青黛新三萜物质合剂组高危HPVDNA转阴患者,治疗结束后3个月、6个月、12个月再复查高危HPV-DNA均为阴性。结论 青黛新三萜物质合剂是抗高危HPV病毒安全有效的中药制剂,它在预防宫颈癌的发生、治疗宫颈糜烂方面有确切的临床价值。
青黛新三萜物质;高危HPV病毒;宫颈上皮内瘤变;宫颈癌;治疗;预防
宫颈癌是一种严重危害妇女健康和生命的生殖系统恶性肿瘤,宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈癌的发病与人乳头瘤病毒(HPV)感染密切相关,持续的高危型HPV感染是CINⅢ和宫颈癌发病的必要条件[1]。HPV病毒有一百多种血清型,导致宫颈癌的是HPV16,18,31,33,45,51,52,56,58,59,68等血清型,我们统称为高危HPV病毒。文献报道:随CIN病变程度的加重,高危HPV感染率增高,且病毒含量越高,患高度病变的可能性越大[2]。因此有效的预防和治疗生殖道高危HPV病毒感染是预防宫颈癌的有效方法。目前临床上都是用干扰素治疗高危型HPV感染,也有用中药榆柏散联合干扰素栓治疗高危型HPV感染慢性子宫颈炎的报道[3],其HPV转阴率为70.5%。青黛是中药复方中常用的一味药,具有止血、解热、抗炎、抑菌和抗病毒作用。《本草纲目》记载青黛:“去烦热,癍疮,阴疮,杀恶虫。”青黛外敷能敛湿、消肿痛、解疮毒、拔毒外出。常被外用于口舌生疮、外阴溃疡、湿疹、带状疱疹等疾病[4]。本研究从青黛中分离纯化出一个新的三萜化合物,观察其抗高危HPV病毒效果,希望在中医药领域中寻求一个有效易行治疗宫颈高危HPV病毒感染,阻断向宫颈癌病变发展的新途径。
1.1病例选择宫颈炎、宫颈癌等临床诊断标准符合2008年《妇产科学》(第7版)诊断标准[5]。细胞学诊断采用目前国际统一的TBS诊断系统[6]。纳入病例:⑴年龄20~59岁有性生活史的女性。⑵临床检查符合炎症、CIN分级诊断标准并且高危HPV阳性者。⑶就诊前2月宫颈局部未进行物理治疗,前2周内未进行药物及其他相关治疗。排除标准:⑴合并霉菌性阴道炎或严重的盆腔炎患者。⑵合并严重的心、肝、肾、血液系统疾病及精神病患者。⑶妊娠期或哺乳期妇女。
1.2病例资料研究对象为2014年1月至2015 年3月我院妇科患者97例,均为高危HPV-DNA阳性,经宫颈液基细胞学检查(LPT)报告为炎症、非典型鳞状上皮意义不明(ASCUS)或低度鳞状上皮内病变 (LSIL),并行病理组织学检查诊断为炎症、CINⅠ、CINⅡ的病例。按就诊顺序随机分为青黛新三萜物合剂组、干扰素组和未治疗的高危HPV阳性组。青黛新三萜物合剂组32例,其中24例为CIN患者,32例均合并有不同程度宫颈糜烂,年龄(36.4±11.3)岁。干扰素组35例,其中25例为CIN患者,34例均合并不同程度宫颈糜烂,年龄(35.6±10.8)岁。对照组:未治疗的高危HPV阳性组30例患者,其中CIN者19例,25例均合并宫颈糜烂,年龄(35.1±10.6)岁。三个组一般资料比较,差异无统计学意义。
1.3研究方法
1.3.1实验步骤宫颈分泌物高危HPV-DNA检测(Hybrid CaptureⅡ简称:HC2)阳性,同时进行宫颈液基细胞学检查(TCT)异常或炎症的患者,行阴道镜检查,对醋白试验阳性 (5%冰醋酸作用下持续3~5min呈瓷白色混浊不透明)及可疑部位进行宫颈活检,经病理报告为不典型鳞状上皮细胞(ASCUS)或CINⅠ、CINⅡ者入选,并给予相应治疗,完成疗程后3个月采取同样方法复查。
1.3.2检查项目 ⑴宫颈液基细胞学检查LPT,TBS分级系统进行诊断报告。⑵高危HPV-DNA检测:采用原位杂交捕获HPV-DNA检测技术,HC2(美国QIAGEN Gaither-sburg公司产品,获得美国FDA认证,欧洲CE认证,中国药监局认证产品),该实验能同时检测 13种高危型 HPV(16,18,31,33,35,39,45,51,52,56,58,59,68)病毒。(3)病理组织学检查:在电子阴道镜辅助下对宫颈局部醋白试验阳性部位及可疑处取组织活检,制成3μm厚切片,苏木素伊红染色(HE染色)后由病理学专家诊断。
1.3.3青黛新三萜物质合剂的配制与仪器青黛粉、枯矾、冰片三味药材购自九江开心人大药房,将青黛粉以95%乙醇超声提取3次,每次15min,合并三次提取液浓缩至浸膏,得到青黛新三萜物质。将枯矾、冰片研成极细末,由青黛新三萜物质、枯矾、冰片按5:2:1的比例配制后加75%酒精浸泡1h,再55℃烘烤1h,室温自然冷却,然后冷冻干燥制成青黛新三萜物质合剂。仪器:摩尔实验室超纯水设备(重庆摩尔生物技术有限公司),立式压力蒸汽灭菌器(上海申安医疗器械厂),西门子冰箱,高频数控超声波提取仪KQ-500TDV(昆山市超声仪器有限公司),旋转蒸发仪 (莱伯泰科EV341),真空冷冻干燥机(北京松源华兴科技发展有限公司)。
1.4治疗方法
1.4.1药物和使用方法、注意事项⑴青黛新三萜物质合剂:于月经干净3d开始,每晚睡前先清洁会阴部,戴无菌手套用带线无菌棉球醮青黛新三萜物质合剂0.3~0.4g涂敷于宫颈口及其周围,有宫颈糜烂者,无菌棉球放置一晚第二起床时再用线拉出,每晚一次,每个月经间期中的20d为一疗程。⑵重组人干扰素α2b阴道泡腾胶囊(辛复宁):有效成分为重组人干扰素α2b,每粒80万IU,月经干净3d开始于睡前1粒置入阴道后穹隆处,每日一次,每次一粒,10次为一疗程,每月连续治疗二个疗程,上海华新生物高技术有限公司生产。二组治疗患者治疗期间禁止坐浴和性生活,月经期停止上药。治疗组每晚清洁贴身内裤,并用2%优氯净浸泡1晚,消毒清洗处理。对患者配偶尿道口分泌物进行高危HPV-DNA检查,若有阳性者,彻底清洁外生殖器及会阴部,并碘伏消毒处理,由泌尿科医生治疗处理。
1.4.2观察指标及疗效判定用药治疗的二组患者,每月于下次月经干净3d来院复查1次,HC2复查高危HPV-DNA,以3月为限。观察患者白带情况,宫颈局部糜烂的好转情况,有无过敏情况,血、尿常规,肝、肾功能。定期电话随诊观察其白带情况及临床反应。根据病理组织学诊断判定CIN的疗效;参照《中药新药临床研究指导》[7]判定宫颈糜烂疗效。对照组于3月后复查高危HPV-DNA阳性情况。
1.4.3观察复发情况青黛新三萜物质合剂组于治疗结束后3个月、6个月、12个月,取宫颈上皮细胞HC2再复查高危HPV-DNA,观察高危HPV是否复发。
1.5统计学方法应用SPSS 17.0统计软件进行统计分析。计数资料用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。
2.1临床疗效⑴青黛新三萜物质合剂组及干扰素组HPV-DNA转阴率分别为 87.5%(28/32)、71.4%(25/35)(χ2=2.612,P=0.106)。见表1。⑵以治疗后CINⅡ转为CINⅠ或ASCUS,或者CINⅠ转为ASCUS或炎症或无上皮内病变等,由高级向低转化为对CIN治疗有效,青黛新三萜物质合剂组及干扰素组对CIN治疗有效率分别为75.0%(18/24)、44.0%(11/25)(χ2=4.873,P<0.05)。⑶青黛新三萜物质合剂组及干扰素组对宫颈糜烂治疗有效率90.6% (29/32)、47.1%(16/34)(χ2=14.422,P<0.001)。见图1。
表1 治疗组及对照组HPV-DNA转阴率比较
2.2青黛新三萜物质合剂组28例高危HPV-DNA转阴患者,于治疗结束后3个月、6个月、12个月,取宫颈上皮细胞 HC2再复查高危HPV-DNA,结果均为阴性。
图1 二类药治疗不同疾病的有效率
2.3不良反应二组治疗组患者均未发现肝、肾功能异常者,血、尿常规亦均在正常范围内。也未发现青黛新三萜物质合剂有过敏反应及其他任何不良反应。
近年来,生殖道HPV感染日益增加,其临床感染与宫颈上皮内瘤变和宫颈癌的相关性已成为倍受医学界关注的焦点之一。国内有报道高危HPV、液基薄层细胞学配合阴道镜检查对宫颈癌前病变筛查的必要性及诊断价值[8]及类似报道[9,10]。由于女性生殖道生理解剖结构特殊,因此是HPV易感部位,同时也是其他妇科病原菌的寄生之处[11]。也有报道淋病奈瑟菌、沙眼衣原体或解脲支原体阳性是高危型HPV感染的独立危险因素[12],说明高危型HPV感染是建立在宫颈炎症基础之上的,而不是孤立存在的。青黛有清热解毒、抗病毒、凉血散结消肿功效,有用青黛与重楼、冰片一起外敷用于抗流行性腮腺炎病毒的报道[13],亦有用青黛散治疗复发性口腔溃疡的报道[14],青黛含靛蓝、靛玉红等成分,靛玉红已证实可抑制多种细胞的DNA合成,对角质形成细胞的增殖分化起调控作用[15]。而且我们还发现近几年来在临床上有口服复方青黛胶囊治疗重症牛皮癣的情况,可见青黛的功用在临床上越来越受到重视。本研究为了观察青黛新三萜物质抗高危HPV病毒的治疗效果并加速宫颈糜烂等疮面的愈合,以阻断向宫颈癌发展的途径,由医疗与实验中心多部门联合,超声提取青黛新三萜物质,并将青黛新三萜物质与枯矾、冰片联合制成合剂,用于感染高危HPV病毒、宫颈低级别病变患者的治疗,经过3个月的临床观察,青黛新三萜物质合剂治疗组高危HPV转阴率达到87.5%,其疗效虽然与目前治疗HPV感染常用药物干扰素(总有效率71.4%)比较无明显差异,但都可用于高危型HPV病毒的治疗,且青黛新三萜物质合剂可加速宫颈糜烂等疮面的愈合,其疗效甚至更好。28例高危HPV-DNA转阴患者,于治疗结束后3个月、6个月及12个月再复查高危HPV-DNA,结果均为阴性,疗效确切,同时,青黛新三萜物质合剂治疗CIN的总有效率也达到75%,效果与干扰素比较有明显差异(P<0.05)。治疗CIN的有效与高危HPV-DNA阴转联合阻断了向宫颈癌病变发展的途径,说明青黛新三萜物质合剂的使用对预防宫颈癌的发生有确切的临床价值。药方中三种中药成分的作用相辅相成,青黛新三萜物质在抗病毒、散结消肿和抗细胞间变方面起主要作用,而枯矾起燥湿、止血、解毒、杀虫的作用,冰片具有凉血敛疮、散热宣毒、消肿止痛、防腐生肌,促进伤口愈合的效用。
10例干扰素治疗失败者,改用本研究组方法青黛新三萜物质合剂治疗三月,9例高危HPVDNA转阴,效果显著。
上述研究也表明:青黛新三萜物质合剂作为中药制剂,对于宫颈糜烂治疗3月的总有效率达90.6%,与干扰素比较有显著的差异(P<0.001)。可见干扰素在治疗宫颈糜烂的疗效显然不如青黛新三萜物质合剂。
综上所述,我们选择青黛新三萜物质合剂治疗高危型HPV感染和轻度CIN取得良好的效果,同时取得了青黛新三萜物质合剂对宫颈糜烂的明显疗效,治疗期间未见肝、肾功能、血细胞等异常,是较为安全的中药制剂。尤其对干扰素治疗失败者,它是很好的替代药物。
近年来,宫颈癌发生率有所下降,与通过高危HPV检测来筛查宫颈癌及癌前病变的广泛应用是分不开的[16]。对于CINⅠ合并有高危HPV病毒持续阳性患者,临床在抗HPV治疗同时常选用利普刀手术治疗;CINⅡ合并有高危HPV病毒持续阳性患者,临床可选用利普刀手术或宫颈锥切术进行治疗;对于CINⅡ级累及腺体或CINⅢ级及以上病变的治疗,临床常采用宫颈锥切术,宫颈次全切除术等外科手术进行干预治疗,青黛新三萜物质合剂作为抗高危HPV病毒的较有效药物,进行术后或放化疗的联合应用,不失为一种好的治疗措施。
本研究由于所检测试验复杂,加上病人依从性和自愿的原则所限,样本例数有限,还需要更大样本量的支持。
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The observation of clinical therapeutic effect of the indigo naturalis new triterpene substances against high-risk HPV virus
SHUAI Lihua1,HU Zhijian1,LI Tin2,WANG Min1,LI Meiren2,ZHOU Yingtang3,ZOU Zhimei4,CHEN Ping4.1.Department of Clinical Laboratory,Jiujiang University Hospital,Jiujiang Jiangxi 332000,China;2.Department of Clinical Pathology,Jiujiang University Hospital,Jiujiang Jiangxi 332000,China;3.Key Laboratory of Provincial Experiment Center,Institute of Medicine and Life Science of Jiujiang University,Jiujiang Jiangxi 332000,China;4.Department of gynaecology and obstetrics,Jiujiang University Hospital,Jiujiang Jiangxi 332000,China.
Objective To observe the effect of the indigo naturalis new triterpene substances against high-risk HPV virus and the function in preventing the occurrence and development of cervical cancer.Methods We extracted the indigo naturalis new triterpene substances by high frequency ultrasound and made mixture with dried alum and bomeol.Then we observed its role against high-risk HPV virus and the effective rates of treatment to cervical intraepithelial neoplasias(CIN)and cervical erosion,with comparison of treatment by interferon.Result The seroconversion rate of high-risk HPV DNA,when treated by Indigo naturalis new triterpene substances 3 months later was 87.5%,and the rate was 71.4%when treated by interferon 3 months later;The effective rate of CIN,when treated by Indigo naturalis new triterpene substances 3 months later was 75.0%,and the rate was 44.0% when treated by interferon 3 months later;The therapeutical effective rate of cervical erosion,when treated by Indigo naturalis new triterpene substances 3 months later was 90.6%,and the rate was 47.1%when treated by interferon 3 months later.The patients who were positive for high-risk HPV DNA,were treated by indigo naturalis new triterpene substances,then turned to negative.3 months,6 months and 12 months later,the results of the high-risk HPV DNA were still negative.Conclusion Indigo naturalis new triterpene substances which are traditional Chinese medicine,can effectively treat against high-risk HPV virus.It has a precise clinical value to prevent cervical cancer,and to treat cervical erosion.
Indigo naturalis new triterpene substances;High-risk HPV virus;Cervical intraepithelial neoplasias(CIN);Cervical cancer;Treatment;Preventation
R737.33,R730.231+.2
A
1674-1129(2016)04-0442-04
10.3969/j.issn.1674-1129.2016.04.010
九江市科技支撑计划项目九财教〔2013〕64号:130
帅丽华,女,1972年4月出生,学士,副主任技师/讲师,主要从事病原微生物检测和抗感染治疗。Tel:0792-2180124,E-mail:liwa33@163.com。
周英棠,男,1981年10月出生,博士,研究方向为分子生物学及蛋白质组学Tel:18607922163,E-mail:18607922163@163. com。
(2016-05-11;
2016-07-28)